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1、1早期自然流产病人血清、胎盘绒毛和蜕膜组织中瘦素水平的测定作者：詹瑛，齐卫红，陈维萍，相尧美 【关键词】 流产, 自然;瘦素; 绒毛膜促性腺激素 , 亚单位,人 摘要目的 探讨瘦素水平与早期自然流产的关系。方法 检测 25 例正常早孕妇女（对照组）及 30 例原因不明自然流产病人（研究组）的血清、绒毛和蜕膜组织中瘦素及 人绒毛膜促性腺激素（-hCG）的水平。结果研究组及对照组胎盘绒毛组织中瘦素水平均有较高表达 ，但对照组瘦素水平高于研究组（ H=15.26，P 0.01） ，蜕膜组织无瘦素表达。对照组血清瘦素和 -hCG 水平明显高于研究组（ t=9.493、5.356，P 0.01）; 且两
2、者呈正相关（ r=0.776，P 0.05） 。结论 血清和胎盘绒毛组织中瘦素水平降低可能是发生自然流产的原因之一。 关键词 流产，自然;瘦素;绒毛膜促性腺激素， 亚单位，人 ABSTRACTObjectiveTo investigate the relationship between leptin and early spontaneous abortion. MethodsThe levels of leptin and -hCG in serum，syncytiotrophoblast and decidua in 30 early spontaneous aborters （cont
3、rol group） 2and 25 healthy women with early pregnancy （research group） were determined. ResultsThe levels of leptin in syncytiotrophoblast were high in both spontaneous aborters and normal gravida，but it was higher in the controls （ H=15.26，P 0.01） ，no leptin was expressed in decidua. The levels of
4、serum leptin and -hCG were significantly lower in spontaneous aborters than in normal gravida （ t= 9.493 ， 5.356 ;P 0.01） ，showing a positive correlation between the two markers（ r=0.776， P 0.05） 。 1.2 方法 1.2.1 血清 LP 及 人绒毛膜促性腺激素（-hCG ）水平的测定 所有孕妇均于清晨空腹抽取静脉血，分离血清，-70 冰箱保存，采用放射免疫分析法同批检测 LP、-hCG 的含量。试剂盒
5、由北京生物制品公司提供，批内变异系数5%。 1.2.2 蜕膜、绒毛组织中 LP 的免疫组化染色 将取出的正常早孕及自然流产病人的蜕膜、绒毛组织用生理盐水冲洗干净，固定于 40 g/L 多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，制成 4 m 厚切片，采用链霉素亲和素-过氧化物酶复合物（SABC ）法进行免疫组化染色。LP单克隆抗体、SABC 试剂盒、二氨基联苯胺（ DAB）显色剂由大连蓝江生物工程有限公司提供。 1.2.3 染色评分标准 以磷酸盐缓冲溶液替代一抗作为阴性对照。根据细胞染色强度和染色细胞所占百分比判断瘦素表达水平。染色强度:不染色或染色不清为 0，浅黄色为 1，棕黄色为 2，深黄4色为 3。染色细
6、胞（胞浆或胞膜中出现黄色或棕黄色颗粒）百分率:无细胞染色为 0，细胞染色 50%为 3。若积分之和 01，则表达为（-） ，积分之和 2 则为（+） ，积分之和 34 则为（ ） ，积分之和 56 则为（ ） 。 1.3 统计学处理 采用 SPSS 10.0 软件包对血清 LP、-hCG测量结果进行 t 检验。对 LP 表达数据进行 Kruskal-Wallis 秩和检验。 2 结果 2.1 两组血清 -hCG 和 LP 水平的比较 两组血清 -hCG 水平比较差异有显著性（ t= 5.356 ，P 0.01） 。两组血清 LP 水平比较差异有显著性（ t=9.493，P 0.01） 。LP
7、水平与 -hCG水平呈正相关（ r=0.776，P 0.05） 。见表 1。 2.2 两组胎盘绒毛及蜕膜组织中 LP 水平的表达 LP 不论在研究组还是对照组胎盘绒毛组织中均有较高水平的表达，分别为 63.3%和84.0%;对照组胎盘绒毛组织中 LP 的表达强度以（ ）（ ）为主，研究组胎盘绒毛组织中 LP 的表达强度以（+）（ ）为主，研究组 LP 表达水平明显低于对照组（ H=15.26，P 0.01） 。LP 在蜕膜组织中无表达。见表 2。 表 1 两组病人血清 LP 及 -hCG 水平的比较（略） 表 2 两组病人胎盘绒毛组织中 LP 的表达（略） 53 讨论 LP 是肥胖基因（Ob）
8、的产物，参与细胞的成熟与生长，而妊娠的建立和早期胚胎发育与多种因素有关。近年来研究显示，LP对早期胚胎发育和着床过程有着重要作用。GONZALEZ 等2发现，LP 能上调在受精卵植入中起重要作用的整合素亚单位和 金属蛋白酶 9 的表达，有助于增加滋养细胞的侵袭力，提示 LP 可能以自分泌或旁分泌的方式在受精卵植入和胎盘形成过程中起着调节作用。通过逆转录聚合酶链反应技术，检测到人胎盘组织中有 Ob 基因 mRNA 的表达。来源于胎盘滋养层的细胞株 JEG3 和 JAR 有 LP mRNA 的表达，这些细胞可以合成和分泌人绒毛膜促性腺激素（hCG） 、胎盘生乳素、孕酮等激素，因此 LP 也是胎盘分
9、泌的激素，可能参与胎儿生长发育的调节3 。免疫组化研究表明， LP 存在于胎盘合体滋养层细胞的胞浆中，而在基质、绒毛膜和血管内皮细胞中均检测不到 LP，证明胎盘合体滋养层细胞系产生 LP 的部位4 。本研究也证实，LP 不论在研究组还是对照组胎盘绒毛组织中均有较高水平的表达，但研究组中 LP 的表达强度和水平均低于对照组。LP 在蜕膜组织中无表达。流产的发生被认为主要与异常发育的胎儿-胎盘单位有关，LP 在其中的作用主要为:LP 作为细胞因子，可以通过影响胎儿-胎盘单位内的其他细胞因子之间的平衡来影响妊娠结局;LP 也可以影响细胞滋养细胞的功能，增加其 hCG 的合成与基质金属蛋白酶的分泌，有
10、助于增加滋养细胞的侵袭力;LP 还具有血管生成活性，可通过影响胎盘血管丛的生成影响胎儿发育5 。有6研究证明，孕妇流产前的血中 LP 含量明显低下，而流产后 24 h 母体血中 LP 的含量与正常分娩后 24 h 的母体 LP 含量相似，说明孕妇血中 LP 含量下降是流产的标志，孕妇血中 LP 不足的重要原因是胎盘分泌 LP 能力降低。本研究也表明，对照组妇女的血清 LP 水平明显高于研究组，并且与 -hCG 水平呈正相关 ;研究组胎盘绒毛组织中 LP 水平表达明显低于对照组，推测由于合体滋养细胞 LP 分泌减少，影响 hCG 的合成和基质金属蛋白酶的分泌，阻碍了滋养层细胞对子宫内膜的侵入和胚
11、胎的发育，可能导致流产的发生。由于 LP的表达受多种激素、生长因子和细胞因子影响，且它们之间相互调节，协调完成胚胎的发育和着床，因此，LP 在自然流产中的作用机制仍有待于进一步研究证实。 参考文献 1 LAIRD S M， QUINTON N D， ANSTIE B， et al. Leptin and leptin-binding activity in women with recurrent miscarriage:correlation with pregnancy outcomeJ. Hum Reprod， 2001，16 （9）: 2008. 2 GONZALEZ R R， DEV
12、OTO L， CAMPANA A， et al. Effect of leptin， interleukin-1alpha， interleukin-6， and transforming phenotype:integrins and metalloproteinasesJ. Endocrine， 2001，15（2）:157. 3 MALEK A， WILLI A， MULLER J， et al. Capacity for hor-mone production of cultured trophoblast 7obtained from placen- tae at term in early pregnancyJ. J Assist Reprod Genet，2001，18（5）:299. 4 ASHWOTH C J， HOGGARD N， THOMAS L， et al. Placen-tal leptinJ. Rev Reprod， 2000，5:18. 5 GONZALEZ R R， SIMON C， CABALLERO-CAMPO P， et al. Leptin and reproductionJ. Hum Reprod Update， 2000，6（ 3）:290.
