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1、常见病毒性传染病及其常见病毒性传染病及其 免疫学检测免疫学检测 平顶山市妇幼保健院平顶山市妇幼保健院 传染病 是病原体以某种方式进入到 人体后 并在人体内生长繁殖 释放 毒素或导致机体内微生态平衡失调 给人体的组织和器官造成一定的损伤 而引起的疾病 病原体易感人群 免疫学检验主要用于 免疫学检验主要用于 辅助诊断及鉴别诊断 判断疗效及预后 流行病学调查 常用的免疫学检测方法常用的免疫学检测方法 n n 酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验 ELISAELISA n n 金标法 试纸条 试纸板 金标法 试纸条 试纸板 n n 化学发光法化学发光法 1 1 电化学发光 罗氏 电化学发光 罗氏 2 2
2、 微粒子化学发光 雅培 微粒子化学发光 雅培 n n 免疫印迹法免疫印迹法 Western blotting Western blotting n n 凝集反应 梅毒检测凝集反应 梅毒检测 n n 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验ELISAELISA enzyme linked immunosorbent assayenzyme linked immunosorbent assay 是一类常用的免疫酶技术 是将已知是一类常用的免疫酶技术 是将已知 的抗原或抗体吸附在固相载体表面 使的抗原或抗体吸附在固相载体表面 使 抗原抗体反应在固相表面进行 抗原抗体反应在固相表面进行 常用的酶 常用的酶 辣
3、根过氧化物酶辣根过氧化物酶 HRP HRP 碱性磷酸酶 碱性磷酸酶 APAP 基本步骤基本步骤 n n 包被包被 n n 封闭封闭 n n 孵育孵育 n n 洗涤洗涤 n n 显色显色 n n 结果测定结果测定 缺点 缺点 1 1只是诊断的辅助手段 特异性和灵敏性只是诊断的辅助手段 特异性和灵敏性 有待提高 有待提高 2 2操作过程有些繁琐 反应时间过长 不能一蹴而操作过程有些繁琐 反应时间过长 不能一蹴而 就 就 金标法金标法 n n 原理 金标层析法采用双抗原夹原理 金标层析法采用双抗原夹 心法免疫测定原理 选择经纯化心法免疫测定原理 选择经纯化 的基因工程制备的抗原 分别作的基因工程制备
4、的抗原 分别作 为包被抗原和胶体金结合抗原 为包被抗原和胶体金结合抗原 由于由于层析层析作用反应复合物沿硝酸作用反应复合物沿硝酸 纤维膜向前移动 当遇到包被抗纤维膜向前移动 当遇到包被抗 原时 形成红色沉淀线 在包被原时 形成红色沉淀线 在包被 膜上还有一条质控线对照 故当膜上还有一条质控线对照 故当 有两条红线时判为阳性 只有一有两条红线时判为阳性 只有一 条红线时 判为阴性 条红线时 判为阴性 免疫印迹法免疫印迹法 n n 免疫印迹法免疫印迹法 Western blotting Western blotting 是一是一 种将高分辨率种将高分辨率凝胶电泳凝胶电泳和免疫化学和免疫化学 分析技
5、术相结合的分析技术相结合的杂交技术杂交技术 免疫 免疫 印迹法具有分析容量大 敏感度高印迹法具有分析容量大 敏感度高 特异性强等优点 是检测蛋白质 特异性强等优点 是检测蛋白质 特性 表达与分布的一种最常用的特性 表达与分布的一种最常用的 方法 病毒学检测主要用于检测方法 病毒学检测主要用于检测 HIVHIV抗原确证试验 抗原确证试验 凝集反应凝集反应 凝集反应是指凝集反应是指颗粒抗原颗粒抗原与相应抗体结合与相应抗体结合 反应出现的可见性现象 颗粒抗原如完整反应出现的可见性现象 颗粒抗原如完整 的细菌 红细胞等与相应抗体相混合 在的细菌 红细胞等与相应抗体相混合 在 一定条件下出现凝集 一定条
6、件下出现凝集 化学发光免疫分析化学发光免疫分析 chemiluminescence immunoassaychemiluminescence immunoassay CLIACLIA n n CLIACLIA是将是将化学发光分析和免疫反应化学发光分析和免疫反应相结相结 合而建立的一种新的免疫分析技术 合而建立的一种新的免疫分析技术 n n 这种方法兼有这种方法兼有发光分析的高灵敏度发光分析的高灵敏度和抗和抗 原抗体反应的原抗体反应的高度特异性高度特异性 CLIACLIA优越性优越性 n n 高度高度敏感敏感 可达 可达pgpg mlml或或pmolpmol水平 水平 n n 特异性强特异性强
7、重复性好 重复性好 CVCV 5 5 n n 测定范围宽测定范围宽 可达 可达7 7个数量级 个数量级 n n 试剂稳定试剂稳定 无毒害 无污染 有效期长 无毒害 无污染 有效期长 达数月甚至数年 达数月甚至数年 n n 操作简单操作简单 耗时短 易于自动化 耗时短 易于自动化 n n 在对在对环保环保很重视的国家 很重视的国家 CLIACLIA成了取代成了取代 RIARIA的首选方法 的首选方法 常见术前检测常见术前检测 n n 甲型肝炎抗体 甲型肝炎抗体 抗抗HAV IgMHAV IgM n n 乙肝五项乙肝五项 n n 丙型肝炎抗体丙型肝炎抗体 抗 抗HCV HCV n n 梅毒螺旋体抗
8、体梅毒螺旋体抗体 n n 人类免疫缺陷病毒抗体 抗人类免疫缺陷病毒抗体 抗HIVHIV 病毒性肝炎病毒性肝炎 Viral HepatitisViral Hepatitis是由一组嗜 肝病毒引起的 以肝脏炎症和坏死 病变为主的一种传染病 主要表现 为明显的消化道症状 全身疲乏无 力 肝脏肿大 肝功能异常 部分 病例出现黄疸 甲型病毒性肝炎 甲型病毒性肝炎 HAVHAV n n HAVHAV属小属小RNARNA病毒 为正单链病毒 为正单链RNARNA病毒 病毒 HAVHAV主要经主要经粪粪 口途径口途径传播 潜伏期平均传播 潜伏期平均2828 天 天 n n HAVHAV抵抗力较强 抵抗力较强 6
9、060 加热加热10 1210 12h h后仍具有后仍具有 感染性 感染性 85 85 加热立即灭活 对乙醚 氯加热立即灭活 对乙醚 氯 仿及仿及PHPH为为3 3的酸性环境有抵抗力 的酸性环境有抵抗力 HAVHAV IgM 近期感染HAV 发病2周后阳性 率为100 3个月后转阴 早期诊断 早期诊断 IgG 急性感染后急性感染后6 6个月达高峰 然个月达高峰 然 后逐渐下降 可终身存在 后逐渐下降 可终身存在 既往感 染HAV RNA 早期诊断的特异性指标 HBV hepatitis B virusHBV hepatitis B virus 乙型肝炎病 乙型肝炎病 毒毒 我国流行现状我国流行
10、现状 现有HBV感染者约1 6亿 HBVHBV颗粒颗粒 l管型 l小球型 l大球型 HBVHBV特点特点 HBsAg与HBsAb HBeAg与HBeAb HBcAg与HBcAb 有包膜双股DNA病毒 三组Ag Ab系统 HBs AgHBs Ag 是感染的标志 见于体液和分泌物 中 也可见于唾 液 精液 乳汁中 介导病毒结合肝细胞 HBs AbHBs Ab 3 6个月产生 有抵抗力的标志 阻断病毒结合肝细胞 HBeAgHBeAg 病毒复制的标志 传 染性强 病毒合成后释放到血液 中 治疗的参考指标 HBeAbHBeAb 病毒复制减少的标志 传染性弱 要先于HBsAb出现 HBcAgHBcAg 存
11、在于病毒核心 不 释放至血液 抗原性强 HBcAbHBcAb 出现早 消退晚 IgM 近期感染HBV IgG 既往感染HBV 临床组合模式临床组合模式 模式模式HBsAgHBsAgAnti HBsAnti HBsHBeAgHBeAgAnti HBeAnti HBeAnti HBcAnti HBc临床意义临床意义 1 1 俗称俗称 大三阳大三阳 急性或慢性乙 急性或慢性乙 肝 病毒在复制 传染性强 肝 病毒在复制 传染性强 2 2 俗称俗称 小三阳小三阳 急性或慢性乙 急性或慢性乙 肝 传染性低 这种模式在慢肝 传染性低 这种模式在慢 性无症状携带者以及急性感染性无症状携带者以及急性感染 人群中
12、较常见 病毒复制可能人群中较常见 病毒复制可能 仍在进行 仍在进行 3 3 急性或慢性乙肝感染 有传染急性或慢性乙肝感染 有传染 性性 4 4 既往感染既往感染 5 5 处于处于HBsAgHBsAg和和HBeAgHBeAg消失与消失与AntiAnti HBe HBe和和Anti HBsAnti HBs出现之间的一出现之间的一 个缺口时期 既往感染个缺口时期 既往感染 6 6 感染恢复期 既往感染 有免感染恢复期 既往感染 有免 疫力疫力 7 7 感染恢复期 既往感染感染恢复期 既往感染 8 8 主动免疫主动免疫 9 9 未感染未感染HBV HBV 属易感者属易感者 1010 少见的模式少见的模
13、式 1111 1212 1313 1414 模式模式HBsAgHBsAgAnti HBsAnti HBsHBeAgHBeAgAnti HBeAnti HBeAnti HBcAnti HBc临床意义临床意义 乙肝五项少见模式分析 单一单一HBsAgHBsAg 主要见于急性主要见于急性HBVHBV感染的最早期 一般随之出现感染的最早期 一般随之出现HBeAgHBeAg和和 IgMIgM的的Anti HBcAnti HBc 通常的慢性 通常的慢性HBVHBV感染中 感染中 HBsAgHBsAg和和Anti Anti HBcHBc并存者约占并存者约占95 95 HBVHBV慢性慢性感染中不出现感染中不
14、出现Anti HBcAnti HBc是少是少 见的 单一的见的 单一的HBsAgHBsAg的异常表现主要由于的异常表现主要由于Anti HBcAnti HBc的缺失 的缺失 HBsAgHBsAg和和Anti HBsAnti HBs并存 并存 在在HBVHBV感染恢复期中约有感染恢复期中约有3 3 的个例可同时检出的个例可同时检出HBsAgHBsAg和和Anti Anti HBs HBs 然后然后HBsAgHBsAg消失而消失而Anti HBsAnti HBs水平逐渐升高 在慢性水平逐渐升高 在慢性HBVHBV 感染者中约感染者中约3 5 3 5 两者共存 出现两者共存 出现Anti HBsAn
15、ti HBs并不表明并不表明 HBsAgHBsAg的清除和感染的恢复 可能由于 的清除和感染的恢复 可能由于 1 1 前后感染两种亚型前后感染两种亚型HBVHBV 或 或HBsAgHBsAg与其抗体之间仅有低亲和与其抗体之间仅有低亲和 性反应 性反应 2 S2 S基因变异 其编码的基因变异 其编码的HBsAgHBsAg抗原性改变 原型抗原性改变 原型Anti HBsAnti HBs不不 能将其清除 能将其清除 3 3 干扰素治疗中出现干扰素治疗中出现Anti HBsAnti HBs血清转换 也因血清转换 也因S S基因的变异 基因的变异 而未能清除而未能清除HBsAgHBsAg 4 HBV4
16、HBV疫苗接种者中也有少数个例虽有正常的疫苗接种者中也有少数个例虽有正常的Anti HBsAnti HBs应答 应答 但仍能感染但仍能感染 决定簇变异的免疫逃逸病毒株 从而出现与决定簇变异的免疫逃逸病毒株 从而出现与HBsAgHBsAg 共存的现象 共存的现象 HBeAgHBeAg和和Anti Anti HBeHBe并存 并存 一般是处于乙肝一般是处于乙肝e e抗原和抗原和e e 抗体转换时期 抗体转换时期 e e抗原和抗原和e e抗抗 体以抗原抗体复合物的状态共体以抗原抗体复合物的状态共 存 存 Anti HBeAnti HBe试剂检测时 试剂检测时 血样中的抗原抗体复合物同样血样中的抗原抗体复合物同样 可以结合至包被板上 起到了可以结合至包被板上 起到了 竞争效果 竞争效果 呈世界性分布 极易慢性化 与肝硬化 原发性肝癌 关系密切 HCV HCV hepatitis C virushepatitis C virus 丙型肝炎 丙型肝炎 病毒病毒 HCVHCV特点特点 有包膜的单股正链RNA病毒 抗HCV抗体非保护性抗体 输血和非肠道途径传播 主要检测IgG 丙型病毒性肝炎丙型病毒性
