培训教程(进样机理)Waters 中国有限公司培训中心©2006 Waters Corporation进样机理 满定量环和部分定量环进样 空气间隙 吸液速度设置 进样回收率和 %RSD ©2006 Waters Corporation进样器设计 比较两种进样方式的进样体积– 可变体积进样器设计 : 9提供优异的进样体积准确度和回收率– 定量环进样设计： 9在高压下交叉污染最小 9对于满定量环模式, 进样准确度或回收率与可变体积进样方式是不同的– 在转移的过程中会有少量的样品损失 9对于部分定量环进样模式, 进样准确度或回收率不同于可变体积进样和满量程进样方式, 它取决于体积参数/ 限制以保证最大的准确度/ 回收率©2006 Waters Corporation样品管理器进样方法 共有 三种进样方法– 满定量环 进样方式采用 “压力辅助 ”进样 9进样体积为 100% 的定量环体积– 不充满定量环 进样方式使用 “针溢出 ”进样 9进样体积为定量环体积的 25% ~ 75% – 不充满定量环 进样方式采用 “压力辅助 ”进样 9进样体积为定量环体积的 10% ~ 50% ©2006 Waters Corporation样品管理器推荐的进样方法样品进样体积 (µL) 定量环体积不充满定量环 2 µL 5 µL 10 µL 20 µL针溢出 进样范围 (µL) 0.5 – 1.5 1.5 - 3.8 2.5 - 7.5 5.0 – 15.0压力辅助 进样范围 (µL) N.R. N.R. 2.0 – 5.0 2.0 - 10.0充满定量环 2 µL 5 µL 10 µL 20 µL压力辅助 进样范围 (µL) 2 5 10 20指标R2> 0.999面积 % RSD < ± 1.0©2006 Waters Corporation样品管理器仪器方法描述软件版本1.2©2006 Waters Corporation样品进样过程 从 PEEK 针尖吸取空气 加载前后样品溶液 定量计量样品到检测器 提高回收率和准确性 使用不充满定量环方式©2006 Waters Corporation满定量环进样样品样品定量环弱洗溶剂弱洗溶剂样品1.5 X 定量环体积1.5 X 定量环体积进样体积溢出因子 1 ~ 4©2006 Waters Corporation样品体积流动相空气间隙弱洗溶剂234165抽液器从进样瓶来泵来流动相流动相到色谱柱后溢出 空气间隙前溢出样品空气间隙吸入样品，溢出体积和空气间隙样品环内含有弱洗溶剂用户设定自动 (随定量环体积而变)自动满定量环进样步骤–1©2006 Waters Corporation 加 150 psi 辅助压力, 空气隙被压缩 ,样品溶液吸入定位 ,样品环充满过量样品234165满定量环进样步骤–2后溢出 空气间隙前溢出样品空气间隙样品体积流动相空气间隙弱洗溶剂从进样瓶来泵来流动相流动相到色谱柱样品环内含有弱洗溶剂抽液器©2006 Waters Corporation234165 进样样品 : 进样阀动作, 样品载入色谱柱 进样后, 分别用强洗溶剂和弱洗溶剂清洗整个样品管理器流路抽液器样品体积流动相空气间隙弱洗溶剂从进样瓶来后溢出空气间隙前溢出样品空气间隙泵来流动相流动相到色谱柱样品环内含有弱洗溶剂满定量环进样步骤–3©2006 Waters Corporation满定量环进样方式总结 具有最好的进样准确度和精度 每次需要吸取几倍定量环体积的样品溶液 对于小的定量环，需要较大的溢出因子 对于不同的进样体积需要更换定量环©2006 Waters Corporation“针溢出”不充满定量环进样样品定量环2 uL2 uL进样体积溢出因子 1 ~ 4空气间隙样品样品弱洗溶剂弱洗溶剂样品空气间隙©2006 Waters Corporation“针溢出”不充满定量环进样–1 前样品溢液, 样品液, 后样品溢液从样品瓶中吸取 ;前导空气隙从针座吸取234165后 2 µL 空气隙前 2µL样品推荐1.0 µL 固定体积2 µL固定体积2 µL用户设定体积前或后样品溶液溢液样品体积流动相空气间隙弱洗针液从进样瓶来泵来流动相流动相到色谱柱样品环内含有流动相抽液器©2006 Waters Corporation 进样阀清洗–样品溶液被吸入到针及阀内，直到前样品溢液通过进样阀–此过程的目的是牺牲一部分样品溶液来消除弱洗溶液对样品的影响前或后样品溶液溢液样品体积流动相空气间隙弱洗针液234165在 3后是吸出的一部分样品溢液在 2与 3之间有 100nL 的前样品溢液后 2 µL 空气隙前 2 µL样品从进样瓶来流动相到色谱柱泵来流动相抽液器样品环内含有流动相“针溢出”不充满定量环进样–2©2006 Waters Corporation样品定量环内含有样品、样品溢液和流动相234165 样品定量环从进样位置移动到上样位置后 2 µL 空气隙前 2 µL样品从进样瓶来流动相到色谱柱抽液器前或后样品溶液溢液样品体积流动相空气间隙弱洗针液泵来流动相“针溢出”不充满定量环进样–3©2006 Waters Corporation234165 样品溶液定位–用户设置的样品体积被推入样品定量环抽液器泵来流动相后 2 µL 空气隙前 2 µL样品从进样瓶来流动相到色谱柱样品定量环内含有样品、样品溢液和流动相前或后样品溶液溢液样品体积流动相空气间隙弱洗针液“针溢出”不充满定量环进样–4©2006 Waters Corporation234165后 2 µL 空气隙前 2 µL样品从进样瓶来流动相到色谱柱泵来流动相样品定量环内含有样品、样品溢液和流动相抽液器前或后样品溶液溢液样品体积流动相空气间隙弱洗针液“针溢出”不充满定量环进样–5 样品进样– 样品定量环被移动到进样位置 ,然后样品被泵推向色谱柱 9进样时，只有样品和流动相 9进样后，分别用强洗溶剂和弱洗溶剂清洗整个样品管理器流路©2006 Waters Corporation“针溢出”不充满定量环进样方式–总结 没有弱洗溶剂进入色谱柱（只有流动相和样品） 空气间隙也不会进入色谱柱 样品不会与弱洗溶剂接触 推荐用 “针溢出 ”不充满定量环进样方式, 特别是用小定量环时, 因为它比 “压力辅助不充满定量环 ”方式具有更好的准确度 有着更宽的线性范围, 进样量一般为定量环体积的 25% ~ 75% 进样时间取决于吸液速度 无论多大的进样体积, 每次进样都需要多吸取 4 µL 样品溶液作为缓冲 准确度和精密度要低于满定量环进样©2006 Waters Corporation“压力辅助”不充满定量环进样样品弱洗溶剂空气间隙弱洗溶剂样品定量环进样体积©2006 Waters Corporation样品定量环内含有弱洗溶剂样品体积流动相空气间隙弱洗针溶液从进样瓶来流动相到色谱柱空气隙样品空气隙234165自动吸取4 µL用户设定进样量自动吸取4 µL 样品被从样品瓶吸入, 并且在样品溶液前后会有空气间隙也被吸入泵来流动相抽液器“压力辅助”不充满定量环进样–1©2006 Waters Corporation“压力辅助”不充满定量环进样–2234165 加 150 psi 辅助压力, 空气隙被压缩, 样品溶液吸入定位空气隙样品空气隙从进样瓶来流动相到色谱柱样品体积流动相空气间隙弱洗针溶液泵来流动相样品定量环内含有空气间隙、样品和弱洗溶剂抽液器©2006 Waters Corporation“压力辅助”不充满定量环进样–3234165样品溶液定位空气隙样品空气隙从进样瓶来流动相到色谱柱样品体积流动相空气间隙弱洗针溶液抽液器泵来流动相样品定量环内含有空气间隙、样品和弱洗溶剂©2006 Waters Corporation234165空气隙样品空气隙从进样瓶来流动相到色谱柱 泵来流动相抽液器样品体积流动相空气间隙弱洗针溶液样品定量环内含有空气间隙、样品和弱洗溶剂“压力辅助”不充满定量环进样–4 样品进样– 样品定量环被移动到进样位置，然后样品被泵推向色谱柱– 进样后 ,分别用强洗溶剂和弱洗溶剂清洗整个样品管理器流路©2006 Waters Corporation“压力辅助”不充满定量环进样-总结 进样循环时间比 “针溢出不充满定量环 ”进样方式短 样品体积被保持 推荐用于较大的样品环进样 进样性能取决于弱洗溶液与流动相的匹配性 空气间隙会进入色谱柱 进样准确度一般低于 “针溢出 ”的方式 进样范围较窄, 一般约为样品定量环体积的 10 – 50% 进样准确度和精密度比满定量环方式低©2006 Waters Corporation样品管理器仪器方法描述1. 选择“ 使用针溢出不充满定量环 (Partial Loop With Needle Overfill） ”模式1. 进入 “高级（ Advanced ） ”选项2. 使用 1 µL 空气间隙©2006 Waters Corporation“针溢出”进样方式10 µL loop 20 µL loop进样精度 (n=6)进样 %RSD %RSD体积 压力 针溢出辅助0.5 1.13 0.801.0 1.19 0.121.5 0.98 0.052.0 1.03 0.172.5 0.74 0.143.0 0.49 0.113.5 0.65 0.064.0 0.52 0.184.5 0.32 0.345.0 0.70 0.34Full 0.06进样精度 (n=6)进样 %RSD %RSD体积 压力 针溢出辅助0.5 2.92 0.351.0 2.28 0.361.5 0.96 0.172.0 0.40 0.222.5 0.56 0.253.0 0.49 0.263.5 0.70 0.304.0 0.80 0.294.5 0.22 0.045.0 0.13 0.05Full 0.06进样精度 (n=6)进样 %RSD %RSD体积 压力 针溢出辅助0.5 6.00 1.641.0 1.43 0.121.5 1.05 1.002.0 1.04 0.572.5 0.81 0.063.0 0.48 0.083.5 0.67 0.124.0 0.55 0.184.5 0.12 0.145.0 0.45 0.26Full 0.06被废弃的体积% 5 µL loop % 10 µL loop % 20 µL loop0.025 µL 0.50% 0.25% 0.13%0.05 µL 1.00% 0.50% 0.25%0.1 µL 2.00% 1.00% 0.50%5 µL loop©2006 Waters Corporation满定量环进样模式总结 优势– 有最高的进样准确度和精确度 模式权衡– 每次需要吸取几倍定量环体积的样品溶液 9对于小的定量环，需要较大的溢出因子– 对于不同的进样体积需要更换定量环©2006 Waters Corporation“压力辅助”不充满定量环进样总结 优势 :– 较短的进样循环时间– 样品体积被保持– 推荐用于较大的样品环进样 模式权衡 :– 进样准确度和精密度比 “满定量环 ”方式低– 进样性能取决于弱洗溶液与流动相的匹配性– 进样准确度一般低于有 “针溢出 ”的方式©2006 Waters Corporation“针溢出”不充满定量环进样方式总结 优势 : – 推荐用有针溢出的不充满定量环进样方式，特别是用小定量环时，因为它比 “压力辅助不充满定量环 。