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1、考纲明细1.微生物的分离和培养2.某种微生物数量的测定3.培养基对微生物的选择作用4.微生物在其他方面的应用考点1培养基及微生物的纯化培养技术1培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。(3)种类按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。1(选修1 P14资料卡片)琼脂是一种从红藻中提取的多糖。琼脂在98 以上熔化，在44 以下凝固，在常规培
2、养条件下呈现固态。2(选修1 P15资料卡片)牛肉膏和蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。2无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法(连线)答案、b、a、3大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基操作步骤倒平板的方法及注意事项a请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。b乙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c丁中的操作需要等待平板冷却凝固后才能进行。(2)纯化大肠杆菌的两种方法1)平板划线法概念：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表
3、面。注意事项：b灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。c第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。d划线时最后一区不要与第一区相连。e划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2)稀释涂布平板法概念：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。操作过程(3)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。1(选修1 P15旁栏思考)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生
4、物污染外，还有什么目的？提示无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。2(选修1 P18旁栏小资料改编)微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？提示不是。微生物的接种技术还包括斜面接种、穿刺接种等方法，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。3(选修1 P17讨论T2)倒平板操作时为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。4(选修1 P17讨论T3)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？提示平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入
5、培养基造成污染。5(选修1 P17讨论T4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？提示不能。因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，可能会造成污染。题组培养基及其制备方法分析1下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A操作的顺序为计算称量溶化倒平板灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却到50 左右时倒平板D待平板冷却凝固后将平板倒置答案A解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算称量溶化灭菌倒平板，不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，待牛肉膏溶化并
6、与称量纸分离后用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培养基冷却到50 左右时倒平板，此时不烫手且为液体状态，C正确；平板冷却凝固后才能将平板倒置，D正确。2下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()A从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基B该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C该培养基缺少提供生长因子的物质D该培养基调节合适的pH后就可以接种使用答案B解析从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基，A错误；微生物的营养物质主要包括氮源、碳源、水和无机盐等，培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨，B正确；生长
7、因子主要包括维生素、氨基酸和碱基等，它们一般是酶和核酸的组成成分，蛋白胨可以提供生长因子，C错误；该培养基调节合适的pH后经灭菌后才可以接种使用，D错误。知识拓展1培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需的pH不同。2不同微生物对主要营养物质的需求特点(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必
8、须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。题组无菌技术的操作3下列对灭菌和消毒的理解不正确的是()A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质上是完全相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法答案B解析消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，B错误。4(2014江苏高考)为了获得胡萝卜素产品，某小组开展了产胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：(1)实验用的
9、培养皿常用的两种灭菌方法是_；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是_。(3)如图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是_(填序号)。安全阀、放气阀、压力表放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_。答案(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)用牛皮纸(报纸)包扎器皿(2)抑制细菌(放线菌)的生长(3)(4)接种环温度过高，菌种被杀死解析(1)实验用的培养皿常用的灭菌方法是干热灭菌和
10、湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)，在实验前应用牛皮纸或干净的报纸包扎器皿。(2)酵母菌是真菌，对青霉素具有抵抗能力，青霉素主要抑制细菌、放线菌的生长。(3)图中甲为安全阀，乙为放气阀，丙为压力表。(4)该接种过程中的3块平板相同，菌种来源相同，只有一块平板接种培养后无菌落，对比知，问题最可能出现在接种过程中，最可能的原因是接种环灼烧后未充分冷却，菌种被杀死。题后归纳全面比较消毒和灭菌题组微生物的培养与纯化5用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌A B C D答案C解析平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，正
11、确；平板划线法采用接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基，正确；平板划线法一般用于分离而不能用于计数，错误。6为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL 水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌
12、数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。答案(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B解析(1)涂布接种前，灭菌后的空白平板先培养一段时间，若空白平板上无菌落形成，则说明培养基平板灭菌合格；平均每个平板上的菌落数目为38，稀释了100倍，取样为0.1 mL，则每毫升水中的活菌数目为381000.138000个，则每升水中的活菌数目为3800010003.810
13、7个。(2)用平板划线法分离微生物的过程中，应对接种环进行灼烧灭菌；每次划线都要从上一次划线的末端开始，这样做可将聚集的菌体逐步稀释以便最终得到单个菌落。(3)示意图A是用平板划线法接种培养后得到的结果；示意图B是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。题后归纳两种纯化细菌方法的比较考点2微生物的筛选和计数1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(选修1 P26资料卡片)细菌的数目还可以通过滤膜法来测定(以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例)。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。2分解纤维素
14、的微生物的分离筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。实验流程(3)分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长。鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是鉴别培养基。3结果分析与评价深挖教材在进行微生物计数实验时除设置对照组外，设置重复组的作用是什么？应如何设置重复组？提示设置重复组的作用是为排除偶然因素对实验结果的干扰；在每一稀释度下宜设置3个平板作重复组，选择菌落数均在30300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式予以计算菌落数。1(选修1 P22旁栏思考)想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？
