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1、1前列腺癌组织 EZH2 基因的表达及其意义作者：宋力，崔小健，苏大军，谭国良【关键词】 前列腺肿瘤；基因；EZH2Expression profile and significance of EZH2 gene in primary prostate cance【Abstract】 AIM: To determine the expression of EZH2 gene in prostate cancer （PCa ） and to investigate the relation between EZH2 expression and biological characters of
2、PCa. METHODS: In 40 cases of PCa, 20 cases of benign prostate hyperplasia (BPH), 20 cases of prostatic intraepithelial neoplasia (PIN), the expression of EZH2 was detected by semiquantitative RTPCR and the amplified product was sequenced. RESULTS: All 40 PCa cases were positive in EZH2 expression. T
3、here was no expression of EZH2 gene in BPH. Only one of the 20 PIN cases was seen EZH2 expressed positively. EZH2 expression was increased in the advanced compared with the primary PCa (P0.05), in the lowdifferentiated compared with the highlydifferentiated PCa 2(P 0.05) and in the hormonedependent
4、compared with the hormoneindependent PCa (P0.05). However, EZH2 expression did not have a linear correlation with the serum total prostate specific antigen level (P0.05). CONCLUSION: EZH2 gene plays an important role in the development of prostaic carcinoma. Therefore, the analysis of EZH2 expressio
5、n will benefit the diagnosis and treatment of prostatic carcinoma.【Keywords】 prostatic carcinoma; gene; EZH2【摘要】 目的：探讨 EZH2 基因在列腺癌组织中的表达意义. 方法：采用半定量 RTPCR 检测前列腺癌、前列腺上皮内瘤(PIN)，良性前列腺增生中 EZH2 表达状况并对其扩增产物进行测序. 结果：前列腺癌 40 例组织中，EZH2 表达率（100）. 良性前列腺增生组织无表达， PIN 20 例中仅有 1 例有表达 . 晚期前列腺癌组织表达明显高于早期前列腺癌（P0.05）
6、；低分化前列腺癌表达高于中高分化前列腺癌（P0.05） ；激素依赖性前列腺癌表达高于激素非依赖性前列腺癌（P0.05）. EZH2 表达高低与前列腺血清总 PSA浓度无关（P0.05）. 结论：EZH2 基因表达状况与前列腺癌分期、分级有关，其表达对判断前列腺癌病理生物学特性和前列腺癌治疗有重要意义.3【关键词】 前列腺肿瘤；基因；EZH20 引言EZH2 (enhancer of zeste homolog 2)基因是最近识别的一种人类新基因，是 PcG (polycomb group)基因家族的重要成员之一. 与前列腺癌的发生发展关系密切. 我们采用 RTPCR 方法研究EZH2 在前列腺
7、癌、前列腺上皮内瘤、良性前列腺增生中的表达状况，探讨其在前列腺癌发生发展中的作用及意义.1 对象和方法1.1 对象良性前列腺增生标本 20 例，年龄（66.510.2）岁；前列腺上皮内瘤标本 20 例，年龄(64.211.3 ）岁. 前列腺癌标本40 例，年龄(67.512.2）岁. 按国际抗癌协会(UICC)的 TNM 分期标准, T1 期 9 例、T2 期 8 例、T3 期 11 例、 T4 期 12 例，高分化，Gleason 评分 24 分 12 例，中分化，Gleason 57 分 18 例，低分化，Gleason 810 分 10 例；其中内分泌治疗后复发（雄激素非依赖性）8 例.
8、 所有标本均经病理切片证实，新鲜标本离体后立即切成小块，置于-70 冰箱中 .41.2 方法 EZH2 和内参照（actin）PCR 引物设计参照文献1 ，并登陆 GeneBank 对照无误，由北京赛百胜有限公司合成. EZH2 基因上游引物序列为 5GCCAGACTGGGAAGAAATCTG3, 下游引物序列为 5TGTGCTGGAAAATCCAAGTCA3. 扩增产物为620 bp； actin上游引物序列为5CGGAGTCAACGGATTTGGTCGTAT3，下游引物序列为5AGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGAC3，扩增产物为 316 bp. 取100mg 待测组织，采用 Tr
9、izol 一步法提取组织总 RNA. 紫外分光光度计测定 A260 nm 和 A280 nm 比值在 1.82.0 之间. 1 g/L 琼脂糖凝胶电泳可见 28S,18S 和 5SRNA 条带，表明 RNA 质量符合要求，可用于逆转录. 取 2 g总 RNA 进行逆转录，所得产物用于PCR. 取 2 L合成的 cDAN 进行 PCR 扩增 . PCR 体积 50 L,反应条件为 80预变性 1 min,94变性 1 min，62退火，72 延伸，35 次循环，末次循环再延伸 10 min. 取 10 L PCR 产物，1 g/L琼脂糖凝胶电泳 100 V，30 min. 凝胶图像定量分析系统对
10、电泳图象进行吸光度扫描，计算待测基因的相对表达量. PCR 产物测序由北京赛百胜有限公司代测.统计学方法：采用 SPSS 10.0 统计软件，计量资料用 xs 表示，多组数据的比较用方差分析，两组间比较用 t 检验，再两两用SNKq 检验. P0.05 为差异有统计学意义 .52 结果凝胶图像定量分析系统对电泳图像进行吸光度扫描，计算各组基因的相对表达量（表 1）. 所表达 cDNA 产物经双脱氧终止法进行测序证实为 EZH2 基因序列（图 1）. 各分期前列腺癌中表达存在差异（P0.05） ，早期癌表达明显低于中晚期癌；低分化癌中EZH2 表达高于高分化癌（ P0.05） ；激素依赖型前列腺
11、癌中的表达高于非激素依赖型（P0.05）. 在良性前列腺增生标本中基因无表达，在前列腺上皮内瘤中偶有表达（5） . 血清 PSA 的高低与基因表达的高低无关联（P0.05）.表 1 基因相对表达量（略）aP0.05 vs T1, bP0.05 vs T2, cP0.05 vs 高分化, dP0.05 vs 雄激素依赖性（+）.3 讨论EZH2 基因是果蝇 Zeste 基因增强子（ EZH2）的人类同源物，Hobert 等2在采用酵母双杂交实验研究与原癌基因 Vav 蛋白产物相互作用的过程中发现了该基因. Cardoso 等3证实 EZH2 基因定位在人染色体 7q35 的位置上. 目前作用机制
12、尚不明确，EZH2具有 HDAC，组蛋白甲基转移酶和多种基因外的调控作用, 参与转6录抑制4. 在前列腺癌恶性演进过程中, EZH2 表达上调抑制某些肿瘤转移抑制基因, 促进前列腺癌或乳腺癌的浸润、转移5.A：分期越高表达量越高；B：分化程度（分化低表达量高） ；C1：雄激素非依赖性（+） ，C2：雄激素依赖性（-） ；D1：前列腺癌：D2：良性增生；D3 ：上皮内瘤.图 1 前列腺癌组织 EZH2 基因扩增产物电泳图（略）目前研究发现 EZH2 基因在多种肿瘤中有表达. Raaphorst等6发现, 在 RS 细胞的核内有 Bmil 和 EZH2 共同表达现象，证实 EZH2 可能参与人类淋
13、巴瘤的发生 . Raaphorst 等7报道正常静息的乳腺细胞不表达 EZH2, 侵袭性乳腺癌相对于正常乳腺上皮EZH2 蛋白表达是上调的 . 最近的报道在膀胱肿瘤中 EZH2 也是随着肿瘤恶性程度增高而表达量增加1. Varambaly 等5报道了EZH2 在人类前列腺癌演化过程中具有重要作用. 前列腺癌恶性演进过程伴有 EZH2 mR2NA 和 EZH2 蛋白逐渐增加,在转移性前列腺癌中也明显增加.在欧美国家前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤. 近年来，随着人口老龄化及生活条件的改变，在我国前列腺癌的发病率的发病率呈逐年上升的趋势. 通过对 EZH2 基因地研究，我们对早期发现、7诊断以及治疗
14、前列腺癌有很大的临床意义.【参考文献】1 Arisan S, Buyuktuncer ED, PalavanUnsal N, et al. Increased expression of EZH2, a polycomb group protein in bladder carcinomaJ .Urologia, 2005,75:252-257.2 Hobert O, Jallal B, Ullrich A. Interaction of Vav wit h ENX1, a putativet ranscriptional regulator of homeobox gene expressi
15、on J. Mol Cell Biol, 1996, 16(6):3066-3073.3 Cardoso C, Mignon C, Hetet G, et al. The human EZH2 gene: genomic organisatin and revised mapping in 7q35 within the critical region for malignant myeloid disorders J. Eur J Hum Genetics, 2000, 8:174.4 Kuzmichev A, Jenuwein T, Tempst P, et al. Different E
16、ZH2containing complexes target methylation of histone H1 or nucleosomal histone H3J. Mol Cell, 2004, 14(2): 183-193.85 Varambally S, Dhanasekaran SM, Ming H, et al. The poly2comb group protein EZH2 is involved in progression of prostate cancer J. Nature, 2002, 419:624-627.6 Raaphorst FM, van Kemenade FJ, Blokijl T, et al. Expression of BMI1 and EZH2 polycomb group gen
