《前列腺癌p21CIP1-WAF1 和PCNA的表达及相关性研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《前列腺癌p21CIP1-WAF1 和PCNA的表达及相关性研究（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1前列腺癌 p21CIP1/WAF1 和 PCNA 的表达及相关性研究作者：杨力军邵国兴王禾陈宝琦秦荣良刘荣福 【关键词】 前列腺肿瘤 关键词: 前列腺肿瘤;p21CIP1/WAF1 ;增殖细胞核抗原; 免疫组织化学 摘 要:目的 研究 p21CIP1/WAF1 及 PCNA 在人前列腺癌标本中的表达及相关性，阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系. 方法 以 36 例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象，采用免疫组化 SABC 法对其 p21CIP1/WAF1 及 PCNA 进行检测，并应用图像分析仪判定，统计学处理，对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究. 结果
2、p21CIP1/WAF1 及PCNA 的免疫组化阳性染色为棕黄色和/或棕褐色，定位于细胞质或细胞核.所得数据均经统计学处理. 在不同病理分级及临床分期之间差异均有显著性，同时还发现 PCNA 与 p21CIP1/WAF1 存在显著负相关性. 结论 p21CIP1/WAF1 表达与前列腺癌组织的病理分级及临床分期呈负相关性，在发病机制中可能涉及到 p21CIP1/WAF1 和 PCNA 调节通路的异常. 同时，作为一种检测方法，可用于判定前列腺癌恶性程度及进程的有价值的指标. 2Keywords:Prostatic neoplasms;p21 CIP1/WAF1 ;proliferating c
3、ell nuclear antigen;immunohistochemistry Abstract:AIM To research the expression and correlationof p21CIP1/WAF1 and PCNA in human prostate cancer，for the purpose of illustrating their relations to the pathological grad-ing and clinical phases.METHODS Thirty six subjects were collected，which were the
4、 paraffin embedding samples that had been diagnosed as prostate cancer.p21CIP1/WAF1 and PCNA was tested by immunohistochemical SABC method.By using image pattern analyzer and through statistical methods，we did the comparative analysis and correlation research for the pathological grading and clinica
5、l phases of the prostate cancer.RESULTS The immunohistochemical positive staining of p21CIP1/WAF1 and PCNA was brown or dark brown，which were located in cytoplasm and nucleus.All data were treated through statistic analysis.As a result，the significant differ-ences were found in different pathologica
6、l grading and clinical phases.Meanwhile，we also found there 3was negative corre-lation between PCNA and p21CIP1/WAF1 .CONCLUSION The above-mentioned research shows that p21CIP1/WAF1 is involved in the occurrence and development of prostate cancer.As for the pathological mechanism，it is related to th
7、e abnormal of p21CIP1/WAF1 and PCNA regulating path.Therefore，as a test-ing method，the research can be an index for estimating the level of malignant and progression of the prostate cancer，and expectedly，provide some references for diagnosis and treat-ments. 0 引言 随着前列腺癌在我国发病率的增高1 ，对它的诊治已日益受到重视.PCNA
8、是真核细胞 DNA 聚合酶 的辅助蛋白，对DNA 复制的调节起重要作用.p21CIP1/WAF1 是细胞周期中重要的调控因子，协调 DNA 的复制及修复，在细胞的生长分化和衰老中起重要的作用.我们采用免疫组织化学 SABC 法对前列腺癌标本PCNA 及 p21CIP1/WAF1 进行检测，旨在探讨它们在前列腺癌中的表达及其相互关系. 1 材料和方法 41.1 材料 1982/1999 确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本 36 例，年龄 4884 岁，均为前列腺腺癌，病理分级采用Bcking（ 1982）的 3 级标准 2 ， ，及级各有 13，9 和 14 例.临床分期采用吴阶平主编的泌尿外科标准分
9、为 A，B，C，D4 期.各有 13，9，8 和 6 例.全部标本均经 40gL-1 缓冲中性甲醛液固定，石蜡包埋，5m 连续切片 2 张，烤片后备染， 1 张行 HE 染色复诊，1 张行免疫组化研究.鼠抗 p21CIP1/WAF1 mAb（187）购自美国 Santa Cruz Biotechnology，Inc，鼠抗 PCNA（PC-10）mAb 购自北京中山生物技术有限公司;工作浓度均为 1100;SABC 免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司.羊抗鼠 IgG 及羊抗兔 IgG 为第四军医大学病理学教研室提供. 1.2 方法 采用免疫组织化学 SABC 法，各步骤按说明书进行，组织抗
10、原修复采用 Sanyo EM-715FW 微波炉“慢速烹调、高火力档”15min，DAB 显色，逐级脱水、透明、封片.用已知肝细胞肝癌阳性切片作阳性对照，用 PBS 代替一抗作空白对照.实验数据均采用2 及方差检验处理. 2 结果 5在日产 OLYMPUS BH-2 型显微镜下行双盲法阅片，p21CIP1/WAF1 蛋白主要定位于前列腺癌上皮细胞胞质中，呈现粗大的棕黄色颗粒状（Fig1）.按染色强度分为 0 级:染色阴性;1 级:用100 倍放大可清晰辨认染色;2 级: 用40 倍放大可清晰辨认染色.又按染色数量分为 0 级:细胞无染色;1 级:染色细胞数少于 1/3;2 级:染色细胞数少于
11、2/3;3 级:染色细胞数多于 2/3.将染色强度和染色数量的级数相加，大于 4 者为阳性染色3 .按此方法将p21CIP1/WAF1 的前列腺癌组织切片分为阳性片和阴性片.PCNA为细胞核染成棕黄色或棕褐色者为阳性反应（Fig2） ，采用 MIAS-300 型图像分析仪分析，普通光源照明，显微镜放大 400 倍，将图像输入高分辩图像监视器上，在每张切片中央及四周每隔 45 度扇面取视野，共 9 个.分析统计每个视野内 PCNA 阳性细胞数，将细胞数最多和最少的 4 个视野剔除，汇总出余下 5 个视野的阳性细胞均值，即为该例标本的 PCNA 阳性表达细胞数均值.表达情况详见Tab1.PCNA
12、表达强度与病理分级及临床分期的 Bartlett 方差齐性检验 P 值分别为 0.6993 和 0.1816.在 PCNA 与 p21CIP1/WAF1 表达相互关系中 P 值分别为 0.001，两两比较时的 Bartlett 方差齐性检验显示 P=0.5678. 3 讨论 p21CIP1/WAF1 是一种潜在的、广谱的细胞周期蛋白依赖6性激酶（Cyclin Dependent Kinases，CDK ）的抑 制因子4，5 .定位于人 6 号染色体短臂的 2 带 1 区，它可对 Cyclin-CDK 复合物活性加以抑制，从而使细胞在 Gl 期处于停滞状态，DNA 的复制及细胞的有丝分裂得以控制
13、，受损的 DNA 得以修复或最终导致细胞的凋亡6，7 .它的减少或缺失将引起相关的Cyclin 和 CDKs 的过度表达，失去对肿瘤细胞增殖及分化的抑制作用，导致肿瘤的发生.有文献报道 p21CIP1/WAF1 的缺失在前列腺癌的发生中起重要作用8 .PCNA 是反应细胞增殖的一种很好的标志物，是 DNA 多聚酶 的一种辅酶，在细胞进入增殖周期时就开始出现，S 期达到高峰，在 G2 期和 M 期下降，恶性肿瘤的特点就是分化受阻而增殖无限，因此，PCNA 是研究肿瘤细胞动力学及评估某些肿瘤预后的较好指标9 .在 S 期前发生的 DNA 损伤，p21CIP1/WAF1 可通过对 Cyclin-CD
14、K 复合物活性的抑制，使 Rb处于未磷酸化状态而使细胞停滞在 G1 期，直至受损的 DNA 得以修复，确保 DNA 下一轮复制时遗传物质的精确性10，11 .在 S期时发生的 DNA 损伤，p21CIP1/WAF1 则可通过 PCNA 直接抑制受损 DNA 的复制12 . 图 1 图 2 略 表 1 p21CIP1/WAF1 和 PCNA 在前列腺癌病理分级、临床分期中表达的关系略 7我们在前列腺癌组织切片上观测 p21CIP1/WAF1 ，PCNA的表达及其相互关系，结果发现 p21CIP1/WAF1 表达阳性率为52.8%（19/36）.不同病理分级阳性表达不同，级阳性表达明显高于级，存在
15、显著性差异（P=0.0416） ，表明 p21CIP1/WAF1 基因可能与前列腺癌细胞的分化过程有关，它在前列腺癌的细胞生长中起负性调控作用，它的缺失可能意味着肿瘤的迅速生长.同时p21CIP1/WAF1 蛋白的缺失可能是前列腺癌的晚期表现，它与前列腺癌的临床分期也有显著相关性，随分期的升高，阳性表达降低，A-B 期的阳性表达率明显高于 C-D 期，存在显著性差异（P=0.0023）. 有学者在胃癌及肝细胞癌中得出了类似的结论13，14 .我们使用的 PC10 是一种能与常规甲醛固定石蜡包埋组织起反应的 PCNA mAb15 .肿瘤分化程度越差，恶性程度就越高，本组研究与其相符，分化差的肿瘤
16、细胞 PCNA 表达增多（P=0.0001 ） ，低分化 PCNA 表达强度明显高于高分化，呈正相关性，这反映出肿瘤的分化程度与增殖活性的一般规律.还发现 PCNA 表达强度与前列腺癌的临床分期亦呈正相关性（P=0.0000） ，可见 PCNA 与前列腺癌的病程有关，这与国外学者研究所得结论类似16，17 .在正常前列腺组织中，PCNA 表达弱而规律，而在前列腺癌细胞中表达明显增多，并呈不同程度的异质性分布，这表明癌细胞生长调节失控，DNA 合成紊乱，也提示肿瘤增殖细胞群中并非所有细胞均同步增殖. 在 p21CIP1/WAF1 与 PCNA 的相互关系中，我们发现它们 8之间呈现负相关性（P=0.001） ，p21CIP1/WAF1 阳性表达标本的PCNA 计数低于阴性表达标本，这一结果支持 p21CIP1/WAF1 与PCNA 在调节细胞周期活动中存在着相互作用.PCNA 是正常细胞D
