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1、化妆品中防腐剂的检测方法（征求意见稿） 1化妆品中防腐剂的检测方法（征求意见稿）第一法高效液相色谱法（一）甲基异噻唑啉酮等23种组分1范围本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中甲基异噻唑啉酮等23种组分的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中甲基异噻唑啉酮等23种组分含量的测定。 本方法所指的23种组分包括甲基异噻唑啉酮、2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇、4-羟基苯甲酸、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、4-羟基苯甲酸甲酯、氯苯甘醚、脱氢乙酸、5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷、4-羟基苯甲酸乙酯、4-羟基苯甲酸异丙酯、4-羟基苯甲酸丙酯、4-
2、羟基苯甲酸苯酯、4-羟基苯甲酸异丁酯、4-羟基苯甲酸丁酯、4-羟基苯甲酸苄酯、苯甲酸乙酯、4-羟基苯甲酸戊酯、苯甲酸异丙酯、苯甲酸丙酯和苯甲酸苯基酯。 2方法提要以甲醇为溶剂提取化妆品中23种组分，用高效液相色谱仪分离，二级管阵列检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对23种组分的检出限、定量限和取样量为1g时的最低检出浓度，最低定量浓度见表1。 表123种组分的检出限、定量限、检出浓度和最低定量浓度序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）1甲基异噻唑啉酮0.080.250.0000080.00002522-溴-
3、2-硝基丙烷-1,3二醇5150.00050.001534-羟基苯甲酸0.6720.0000670.00024甲基氯异噻唑啉酮0.080.250.0000080.0000255苯甲醇10300.00100.00306苯氧乙醇6.7200.000670.00202序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）7苯甲酸1.750.000170.000584-羟基苯甲酸甲酯0.41.250.000040.0001259氯苯甘醚130.00010.000310脱氢乙酸130.00010.0003115-溴-5-硝基-1,3-二噁烷8.3250.000830.0025124
4、-羟基苯甲酸乙酯0.82.50.000080.00025134-羟基苯甲酸异丙酯0.82.50.000080.00025144-羟基苯甲酸丙酯0.82.50.000080.00025154-羟基苯甲酸苯酯130.00010.0003164-羟基苯甲酸异丁酯130.00010.0003174-羟基苯甲酸丁酯130.00010.0003184-羟基苯甲酸苄酯130.00010.000319苯甲酸乙酯260.00020.0006204-羟基苯甲酸戊酯260.00020.000621苯甲酸异丙酯2.370.000230.000722苯甲酸丙酯2.370.000230.000723苯甲酸苯基酯2.780
5、.000270.00083试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2乙腈，色谱纯。 3.3二甲亚砜，色谱纯。 3.4磷酸(85%)，色谱纯。 3.50.1%磷酸溶液量取磷酸(85%)（3.4）1.18mL，加水至1000mL，混匀。 3.6标准储备溶液（=1g/L）准确称取甲基异噻唑啉酮等23种组分的标准品适量，精确到0.0001g，置于同一容量瓶中，用乙腈（必要时，可先用适量二甲亚砜溶解，再用乙腈溶液定容至刻度）溶解并定容至刻度，摇匀，置于冰箱中冷藏保存。 各组分浓度见表2。 3表2甲基异噻唑啉酮等23种组分混合标准储备溶液浓度序
6、号组分名称混合标准储备溶液浓度（g/mL）1甲基异噻唑啉酮25022-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇1500034-羟基苯甲酸20004甲基氯异噻唑啉酮2505苯甲醇300006苯氧乙醇200007苯甲酸500084-羟基苯甲酸甲酯12509氯苯甘醚300010脱氢乙酸3000115-溴-5-硝基-1,3-二噁烷25000124-羟基苯甲酸乙酯2500134-羟基苯甲酸异丙酯2500144-羟基苯甲酸丙酯2500154-羟基苯甲酸苯酯3000164-羟基苯甲酸异丁酯3000174-羟基苯甲酸丁酯3000184-羟基苯甲酸苄酯300019苯甲酸乙酯6000204-羟基苯甲酸戊酯600021苯甲酸异
7、丙酯700022苯甲酸丙酯700023苯甲酸苯基酯80004仪器和设备4.1高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。 4.2超声波清洗器。 44.30.22?m滤膜。 4.4离心机，10000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 5分析步骤5.1混合标准系列溶液制备取混合标准储备溶液（3.6）适量，用甲醇稀释得混合标准系列溶液，各组分标准系列溶液浓度见表3。 混合标准系列溶液应现用现配。 表3甲基异噻唑啉酮等23种组分标准系列溶液浓度名称混合标准系列溶液溶液浓度（g/mL）甲基异噻唑啉酮12.552.50.50.250.0252-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇75030015030151.5
8、4-羟基苯甲酸1004020420.2甲基氯异噻唑啉酮12.552.50.50.250.025苯甲醇150060030060303苯氧乙醇1000400xx0202苯甲酸250100501050.54-羟基苯甲酸甲酯62.52512.52.51.250.125氯苯甘醚1506030630.3脱氢乙酸1506030630.35-溴-5-硝基-1,3-二噁烷125050025050252.54-羟基苯甲酸乙酯125502552.50.254-羟基苯甲酸异丙酯125502552.50.254-羟基苯甲酸丙酯125502552.50.254-羟基苯甲酸苯酯1506030630.34-羟基苯甲酸异丁酯1
9、506030630.34-羟基苯甲酸丁酯1506030630.34-羟基苯甲酸苄酯1506030630.3苯甲酸乙酯300120601260.65名称混合标准系列溶液溶液浓度（g/mL）4-羟基苯甲酸戊酯300120601260.6苯甲酸异丙酯350140701470.7苯甲酸丙酯350140701470.7苯甲酸苯基酯400160801680.85.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入甲醇（3.1）8mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min（工作频率2043KHz，200W），用甲醇定容至10mL，摇匀，以10000r/min离
10、心5min。 取上清液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 必要时用适量甲醇稀释。 5.3参考色谱条件色谱柱Agilent ZorbaxSB-C18柱（5m，4.6250mm），或等效色谱柱。 流动相溶液A0.1%磷酸溶液（3.5），溶液B乙腈（3.2），梯度洗脱程序见表4表4梯度洗脱time（min）A(%)B(%)0.0090105.00901029.0505041.0653552.0356557.059562.0901067.09010流速1.0mL/min；柱温30；进样量10L；检测波长甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲酸的测定可采用280nm，对羟基苯甲酸、苯甲醇、4-
11、羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸乙酯、4-羟基苯甲酸异丙酯、4-羟基苯甲酸丙酯、4-羟基苯甲酸苯酯、4-羟基苯甲酸异丁酯、4-羟基苯甲酸丁酯、4-羟基苯甲酸苄酯、4-羟基苯甲酸戊酯的测定可采用254nm，2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇、氯苯甘醚、5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷、苯甲酸乙酯、苯甲酸异丙酯、苯甲酸丙酯、苯甲酸苯基酯的测定可采用6230nm，苯氧乙醇的测定可采用270nm，脱氢乙酸的测定可采用310nm。 5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，
12、进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中各测定组分的浓度，按“6”计算样品中各测定组分的含量。 6分析结果的表述6.1计算mD V?式中样品中甲基异噻唑啉酮等23种组分的含量，g/g；试样溶液中甲基异噻唑啉酮等23种组分的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g。 D稀释倍数（如未稀释则为1）。 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.2回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为80.0%115.0%，相对标准偏差小于9.7%；其他浓度回收率为79.89%114.6%，相对标准偏差小于1
13、0.5%。 77谱图图1标准溶液HPLC参考色谱图（1.甲基异噻唑啉酮，2.2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇，3.4-羟基苯甲酸，4.甲基氯异噻唑啉酮，5.苯甲醇，6.苯氧乙醇，7.苯甲酸，8.4-羟基苯甲酸甲酯，9.氯苯甘醚，10.脱氢乙酸，11.5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷，12.4-羟基苯甲酸乙酯，13.4-羟基苯甲酸异丙酯，14.4-羟基苯甲酸丙酯，15.4-羟基苯甲酸苯酯，16.4-羟基苯甲酸异丁酯，17.4-羟基苯甲酸丁酯，18.4-羟基苯甲酸苄酯，19.苯甲酸乙酯，20.4-羟基苯甲酸戊酯，21.苯甲酸异丙酯，22.苯甲酸丙酯，23.苯甲酸苯基酯）8附录A表A标准品信息表标准
14、品分子量纯度CAS No分子式甲基异噻唑啉酮115.0695%2682-20-4C4H5NOS2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇199.9898%52-51-7C3H6BrNO44-羟基苯甲酸138.1299%99-96-7C7H6O3甲基氯异噻唑啉酮149.5699%26172-55-4C4H4ClNOS苯甲醇108.13100%100-51-6C7H8O苯氧乙醇138.1699%122-99-6C8H10O2苯甲酸122.1100%65-85-0C6H5COOH4-羟基苯甲酸甲酯152.1599%99-76-3C8H8O3氯苯甘醚202.6398%104-29-0C9H11ClO3脱氢乙酸1
15、68.1598%520-45-6C8H8O45-溴-5-硝基-1,3-二噁烷21298%30007-47-7C4H6BrNO44-羟基苯甲酸乙酯166.299%120-47-8C9H10O34-羟基苯甲酸异丙酯180.299%4191-73-5C10H12O34-羟基苯甲酸丙酯180.2100%94-13-3C10H12O34-羟基苯甲酸苯酯214.299%17696-62-7C13H10O34-羟基苯甲酸异丁酯194.299%4247-02-3C11H14O34-羟基苯甲酸丁酯194.299%94-26-8C11H14O34-羟基苯甲酸苄酯228.2598%94-18-8C14H12O3苯甲酸乙酯150.17100%93-89-0C9H10O24-羟基苯甲酸戊酯203.2597%6521-29-5C12H16O3苯甲酸异丙酯164.299%939-48-0C10H12O2苯甲酸丙酯164.299%2315-68-6C10H12O2苯甲酸苯基酯198.2299%93-99-2C13H10O29（二）水杨酸等18种组分1范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中水杨酸等18种组分的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中水杨酸等18种组分含量的测定。 本方法所指的18种组分包括水杨酸、山梨酸、苯氧异丙醇、2,6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯、碘
