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1、动物组织中 总 DNA的提取 Total DNA extraction from eukaryotic tissue 实验目的 了解真核生物基因组 DNA提取的一般原理 通过动物组织 DNA的提取，掌握DNA 提取的方法和步骤 高等动物 、 植物的基因组相当宠大 ， 如人类细胞基因组由 30亿个碱基对组成 ， 包含了该物种生长 ， 发育 ， 繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量 ， 获得纯度高 、 基因组相对完整的基因组是以后 PCR分析 ，基因文库的构建 ， 基因探测等的研究的基础 。 动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后
2、纯化出。 DNA提取原则 保证 DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染 实验原理 细胞内各种 DNA（包括基因组 DNA和核外 DNA）称为总 DNA。 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（ DNP），能溶解在纯水或 1mol/L的 NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。 目前从样品中分离 DNA的方法主要有两种，分为CTAB法和 SDS法（ 表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使 DNA得以游离出来）。 SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使
3、蛋白质变性而沉淀下来。 EDTA 抑制 DNA酶的活性。 再加入氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸 (DNA、 RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入乙醇使 DNA沉淀，沉淀 DNA溶于双蒸水或 TE溶液中，即 DNA溶液。 SDS法提取动物组织 DNA 试剂 提取缓冲液： 200 mmol/L TrisCl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS 24： 1的氯仿：异戊醇 预冷无水乙醇 SDS抽提液配方 (1000ml): 操作步骤 1. 肝脏 1g左右 , (剪碎 ) 置研钵中，加入 2-3mL提取缓冲液， 研磨成浆；吸入 10mL EP管中，摇动混匀； 2. 60 水浴保温 15min， 不时 颠倒混匀； 3. 室温下 3000rpm离心 7min； 4. 小心吸上清于 另一只 离心管中，加入等体积 的 24:1的 氯仿 ：异戊醇 ， 上下颠倒混匀 ； 5. 室温下 3000rpm离心 10min； 6. 小心 将上层水相 吸入 另一只 离心管中； 7. 重复 4-5步 2-3次 ; (此步不做） 8. 加入 等 体积 预冷无水乙醇 ，室温下放置片刻即出现絮状 DNA沉淀。 结果分析与讨论
