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1、1实验一 茶多酚总量的测定一 实验目的茶多酚是茶叶中多元酚物质的总量，具有苦涩味，对茶汤的滋味和茶叶的保健功能有非常重要的影响。药理学研究表明，茶多酚对心血管系统疾病、癌症等具有一定的防治效果。因此，检测茶多酚总量对评价茶叶品质具有非常重要的作用，同时对于茶叶深加工产品如茶饮料、茶叶提取物、速溶茶等的品质评判也有重要作用。福林酚法由于采用没食子酸为标准品，因而其适用范围较宽，不仅可以用于茶叶，而且还可适用于茶叶提取物、茶叶深加工制品等。而酒石酸亚铁法由于采用经验系数 1.957，因而仅适用于茶叶中多酚总量测定，而不适于茶叶提取物制品等其他产品中多酚总量测定。二 实验原理本实验引用国家标准方法茶
2、叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法 （GB/T 8313-2008）中的“方法二 茶叶中茶多酚的检测”的方法。茶叶磨碎样中茶多酚用 70%的甲醇在 70水浴上提取，福林酚试剂（主要成分为磷钨酸和磷钼酸）在碱性条件下氧化茶多酚中-OH 基团并显蓝色，最大吸收波长为 765 nm，用没食子酸作校正标准，根据标准曲线定量茶多酚。三 实验材料、仪器与试剂1 实验材料：均匀磨碎茶样。2 仪器：电子天平（感量分别为0.000 1g和0.01g） 、分光光度计、恒温水浴锅、低速离心机、移液管、容量瓶（10、100、250、500mL） 、10mL离心管、10mL 具塞刻度试管。3 10%福林酚（Folin-
3、Ciocalteu ）试剂：将25mL福林酚试剂转移到 250mL容量瓶中，用水定容并摇匀，避光储存，现配现用。4 Na2CO3溶液：按质量浓度 7.5%配置，即称取37.50g Na2CO3，加适量水溶解，转移到500mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。该试剂在室温下可保存30天。5 没食子酸标准储备溶液：按1mg/mL（1 000 g/mL）的浓度现配，即称取0.110g没食子酸（GA，相对分子质量188.14）于100mL容量瓶中溶解，并定容至刻度，摇匀，避光保存。6 没食子酸工作液：用移液管分别移取1.0、2.0、3.0、4.0 、5.0 mL的没食子酸标准储备溶液于100mL容量瓶中，分
4、别用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为10、20、30、40、50g/mL。四 实验步骤1 茶样含水率测定 按GB/T 8303-2002进行。2 供试液的制备 （1）母液制备 称取0.2g（精确至0.000 1g）茶样于10 mL离心管中，加入在70水浴锅2中预热过的70%的甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70水浴锅中，浸提10 min，期间搅拌两次，浸提后冷却至室温，转入离心机在 3 500r/min转速下离心10 min，将上清转移至10 mL 容量瓶。残渣再用 5mL的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作。合并提取液定容至10mL，摇匀备用。此提取液在4下至多可保存24
5、h。（2）测试液制备 移取母液1.0 mL于100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。3 测定（1）测定 用移液管分别移取系列没食子酸工作液、水（作空白对照用）及测试液各1.0 mL 于10 mL具塞刻度试管内，在每个试管内分别加入5.0 mL10%福林酚试剂，摇匀。反应38 min内，加入4.0mL 7.5% Na 2CO3溶液，摇匀。室温下放置60 min 。用10 mm 比色皿，在765 nm波长条件下用分光广度计测定吸光度（ A） 。（2）标准曲线制作 根据没食子酸工作液的吸光度（A ）与各工作溶液的没食子酸浓度，制作标准曲线。以没食子酸浓度（g/mL）为横坐标，对应的吸光度
6、（A）为纵坐标，求得线性回归方程和相关系数。五 数据处理1 计算方法 比较试样和标准工作液的吸光度，按下式计算。茶多酚含量（%）=（AVd）100 ( SLOPEStdm106w)式中 A-样品测试液吸光度；V-样品提取液体积（10 mL） ；d-稀释因子（通常为1 mL稀释成100 mL，则其稀释因子为100） ；SLOPEStd -没食子酸标准曲线的斜率；w-样品干物质含量（%） ；m-样品质量（g） 。2 重复性 同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g，若测定值相对误差在此范围内，则取两次测定值的算术平均值为结果，保留小数点后一位。3 注意事项 样品吸光度应在没食子酸标
7、准工作曲线的校准范围内，若样品吸光度高于50g/mL 浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度，则应重新配置高浓度没食子酸标准工作液进行校准。六 实验准备物品清单每个标准班按30人计算，两人一组，共15组。本次实验需实验室准备物品及数量如表1-3所示。表1 需准备试剂序号 试 剂 数 量1 100%甲醇 500 mL2 福林酚（Folin-Ciocalteu ）试剂 100 mL33 Na2CO3 500 g4 没食子酸 10 g表2 需准备仪器序号 仪 器 数 量1 电子天平（感量为0.000 1g） 4 台2 电子天平（感量为0.01g） 4 台3 分光光度计 4 台4 恒温水浴锅 4 台5 低速离心机 2 台表3 需准备玻璃器皿序号 玻璃器皿 数 量1 10 mL容量瓶 50 个2 100 mL容量瓶 50 个3 250 mL容量瓶 2 个4 500 mL容量瓶 2 个5 10 mL离心管 1 大包6 10 mL具塞刻度试管 120 支7 1 mL移液管 60 支8 5 mL移液管 60 支9 10 mL离心管架 8 个10 500 mL 棕色广口瓶 4个11 50 mL 量筒 2 个12 500 mL 量筒 2 个13 500 mL 洗瓶（装蒸馏水） 15个
