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1、1不同预后尖锐湿疣组织中 IFN 和 IL4 蛋白的表达【摘要 】 目的：研究 CA 组织中干扰素 （IFN ）和白介素4(IL4)蛋白的表达情况并探讨其与尖锐湿疣复发和消退的关系. 方法：以 12 周内皮损有无复发作为标准分为复发组 (22 例)和未复发组（14 例） ，以免疫组化 SP 法检测 CA 患者皮损中 IFN 和 IL4蛋白的表达. 并比较两组 IFN 和 IL4 蛋白的表达情况 . 结果：复发组中 IL4 蛋白阳性率（81.2%）高于未复发组中 IL4 蛋白的表达（50%） （P0.05) ；未复发组中 IFN 蛋白的阳性率（50.0%）高于复发组中 IFN 蛋白的阳性率（31
2、.8%）（P0.01）. 复发组 IL4 蛋白表达程度积分(2.321.13)虽高于未复发组(1.571.45)，但其差别无统计学意义（P0.05） ；而在未复发组中 IFN 蛋白表达程度积分（2.861.10）高于复发组中的表达（0.961.05） （P0.01）. 结论：CA 皮损局部不同 IL4 蛋白表达差异对其预后无明显影响,IFN 表达增高可能有利于 CA 的消退. 【关键词】 尖锐湿疣 ； 干扰素 ； 白介素 40 引言2尖锐湿疣（CA ）是一种常见的性传播疾病，2024 岁人群中年发病率达 1.21-2 ，治疗后复发率较高，而临床上也能将看到部分患者皮损可自行消退3 ，提示机体不
3、同的免疫状态对 CA 的发生和复发有一定的影响. 因此研究 CA 的复发和消退机制对其临床治疗具有重要意义. 有关 HPV 的免疫学研究发现，细胞免疫对于病毒的清除起主要作用. 国内外多项研究也发现 CA 患者外周血中 Th2细胞因子表达明显升高，Th1 型细胞因子表达下降 4-5 ，而对CA 皮损局部免疫状态研究较少. 我们用 SP 免疫组化法研究 IFN和 IL4 蛋白在不同预后 CA 患者皮损局部的表达情况，以探讨其与CA 复发和消退的关系.1 对象和方法1.1 对象选择 200301/03 在我科首次就诊的 CA 患者 36（男21，女 15）例：年龄 2141（28.24.5 ）岁.
4、 二氧化碳激光治疗前用手术刀切取 CA 患者的皮损保存，根据其治疗后随访 12 wk 内是否出现新发皮损分为未复发组(n=14)和复发组 (n=22). 两组在年龄、性别和病变程度等方面均具有可比性. 以泌尿外科切除的 15 例正常包皮组织作为对照.1.2 方法治疗前手术刀切取 CA 患者的皮损后立即放入 40 g/L 福3尔马林溶液中固定，经透明、浸蜡、包埋，然后连续 5 m 厚切片，贴附于经多聚赖氨酸处理过的载玻片上备用. 免疫组化 SP 试剂盒购自迈新生物技术公司；小鼠抗人 IFN, IL4 单克隆抗体购自SANTA CRUZ 公司. 病理切片常规脱蜡至水，滴 1 滴 30 mL/L 过
5、氧化氢溶液，室温下阻断 10 min，蒸馏水冲洗 2 min3 次，微波炉内 9298保持 10 min 进行抗原修复，PBS 冲洗 5 min3 次，非免疫动物血清室温下封闭 15 min，滴加 IFN 或 IL4 单克隆抗体，室温孵育 60 min 或 4 过夜，PBS 冲洗 5 min3 次，加生物素标记的二抗，室温下孵育 4060 min， PBS 冲洗 5 min3 次, 加链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶溶液，室温下孵育 3060 min, PBS 冲洗 5 min3 次, DAB 显色液显色. 阴性对照以双蒸水代替一抗作为质控标准.1.3 结果判定标准根据 Shimizu 法改良而
6、成， DAB 染色阳性细胞染成棕黄色. 着色范围以百分率记分：1% 为 0，2% 20%为1，21%50%为 2，51%为 3；着色强度依据深浅记分：无着色为 0，浅着为 1，深着色为 2. 上述两项相加为着色程度积分：1.9为阴性(-)， 22.9 为弱阳性 (+)，3 3.9 为阳性(). 4 为强阳性().统计学处理：组间表达阳性率比较采用精确概率法（Fishers Exact Test）进行检验；表达程度积分值比较采用 t 检验. P0.054为有统计学意义.2 结果健康对照皮肤中 IFN 和 IL4 蛋白呈阴性表达；CA 患者皮损可见 IFN 和 IL4 蛋白表达，主要表达于真皮浅层
7、淋巴样细胞周围. 复发组中有 18/22（81.2%）例表达 IL4 蛋白， 未复发组中有 7/14（50.0%）例表达 IL4 蛋白，复发组 IL4 蛋白表达率高于未复发组（P0.05） ；复发组中有 7/22（31.8%）例表达 IFN 蛋白，未复发组中有 7/14（50.0%）例表达 IFN 蛋白，未复发组IFN 蛋白的表达率高于复发组（P0.01,图 2） ，未复发组IFN 蛋白表达程度积分（2.861.10 ）也高于复发组（0.961.05） （P0.01）.3 讨论研究发现，CA 在治疗后 3 mo 有 25到 67可能复发1 ，多数有安慰剂对照的研究表明，有少量的 CA 却在发病
8、后数月即使未经治疗也可自行消退3 ，两种现象形成鲜明的对照提示不同患者免疫状态的个体差异可能影响了 CA 的预后. 目前对 CA 患者全身性免疫功能的研究较多，发现 CA 患者外周血的 IL2, IL12, 5IFN, IFN 水平下降，而 IL4, IL10 则升高4-6, 并初步认定 CA 患者在 HPV 感染后出现了全身性免疫受抑制现象，即 Th1细胞免疫功能下降，而对其皮损局部免疫功能的研究相对较少. CA常发生于肛门生殖器，而且经治疗后复发也基本局限在原发的部位的皮肤粘膜. 故可以推测，除患者全身免疫功能外， CA 患者皮损处皮肤粘膜的局部免疫状态，尤其是局部的细胞免疫功能状态对其预
9、后起着更直接的影响.Alfred 等6研究发现，自行消退的 CA 患者皮损局部IFNmRNA 表达增高；Mark 等7 发现部分宫颈处 HPV 感染者其可在数月后自动消退，采用 RTPCR 对其宫颈局部黏膜处的细胞因子 mRNA 进行检测证实，所有自动消退的患者消退前宫颈局部显示有 Th1 型细胞因子 IFN 的表达，而缺乏 Th2 型细胞因子IL4 的表达 .我们研究发现，CA 患者皮损中有 IFN 和 IL4 蛋白的表达增高，主要与炎症细胞尤其是淋巴细胞在皮损处的活化和大量浸润，使局部淋巴细胞相对数量增加有关. 但在不同预后的 CA 患者中这两种细胞因子的表达却有不同，未复发组 IFN 蛋
10、白表达程度积分高于复发组，复发组 IL4 蛋白表达程度积分虽高于未复发组,但其差别无统计学意义，这和 Arany 等8的研究结果相符. 以上结果提示 CA 皮损局部不同 IL4 蛋白表达差异对其预后无明显影响；而6IFN 蛋白表达程度增高却有利于 CA 的消退， IFN 由 Th1 亚群产生，即皮损局部为 Th1 型免疫反应增强时有利于形成对局部 HPV的有效的免疫.【参考文献】 1 Lacey CJ. Therapy for genital human papillomavirusrelated diseaseJ . J Clin Virol, 2005，32 （ 1）：S82-90.2 A
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