《DNA定量分析用于宫颈癌及癌前病变的早期筛查探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《DNA定量分析用于宫颈癌及癌前病变的早期筛查探讨（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1DNA 定量分析用于宫颈癌及癌前病变的早期筛查探讨作者：张薇，刘玉华，易细容，周单华 【摘要 】 目的 探讨用 DNA 定量分析和常规细胞学相结合方法而诊断宫颈癌及癌前病变。 方法 对 3266 名妇女用宫颈刷取材，每例液基薄层制片 2 张，1 张巴氏染色做常规细胞学检查，1 张 Feulgan DNA 染色用全自动 DNA 倍体分析系统做 DNA 定量测定。常规细胞学和 DNA 倍体分析系统可疑的妇女在阴道镜下行宫颈组织学活检。 结果 3266 例宫颈癌标本中，常规细胞学发现42 例非典型鳞状上皮（ASCUS） ，9 例低级别鳞状上皮内病变（LSIL）及 1 例高级别鳞状上皮内病变（HSI
2、L） 。DNA 倍体分析发现 3 个或 3 个以上5C 细胞的 35 例。32 例活检病例中有 14 例宫颈上皮内瘤变 2（CIN2）或 CIN2 以上级别改变，这 14 例细胞标本中均可见 DNA 倍体异常，而常规细胞学发现 1 例正常，8 例ASCUS，4 例 LSIL 和 1 例 HSIL。 结论 DNA 倍体分析与常规细胞学相结合方法可提高宫颈癌及癌前病变的阳性率。 【关键词】 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤变2Screening for Early Cervical Cancer and Precancerous Cervical Lesions by DNA Ploid AnalysisA
3、bstract: Purpose To explore the diagnosis for cervical cancer and precancerous cervical lesions by DNA ploid analysis combined with cytology. Methods A total of 3266 cervical samples were obtained by cervix brush. Cell monolayers were prepared by a liquid based sample preparation. Two slides were pr
4、epared from each case: one slide was stained by Papanicolaou stain for conventional cytology examination, while the other slide was stained by Feulgen-Thionin method to measure relative amount of DNA in cell nuclei using an automated DNA imaging cytometer. Women suspected by cytology and DNA ploid u
5、nderwent a colposcope examination and biopsy. Results Forty-two cases proved atypical squamous cells of undermined significance (ASCUS) by cytology; 9 cases, low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL); and 1 case, high-grade squamous intraepithelial lesion(HISL) were found, while DNA ploid ana
6、lysis found 35 cases having 3 or more cells with DNA greater than 5C in a total of 3266 women. Fourteen cases with cervical intraepithelial neoplasia 2(CIN2 or over） 3out of 32 biopsies were diagnosed as 1 case, normal; 8 cases, ASCUS; 4 cases, LSIL and 1 case, HSIL by cytology. However all 14 cases
7、 were determined aneuploid cells by a DNA image cytometry. Conclusion Combination of DNA ploid analysis and cytology can increase positive rate of detection for cervical cancer and precancerous cervical lesions.Key words：DNA ploid; cytology; cervical neoplasms; cervical intraepithelial neoplasia宫颈癌是
8、妇科高发的恶性肿瘤之一，宫颈癌及癌前病变的早期筛查与早期治疗是防治宫颈癌的主要手段。宫颈细胞学检查简便、可靠，是目前推行最广、最有成效的防癌筛查方法。但在传统的宫颈细胞学检查过程中可出现：取材时细胞丢失和制片时涂片质量差、人眼工作疲劳等问题，往往会影响细胞病理学医生的正确诊断而导致较高的假阴性。近年来，我们采用宫颈刷取材，液基薄层制片，有经验的细胞学医生与全自动 DNA 图像分析系统相联合，力求把宫颈癌及癌前病变的漏诊率降低到最低限度。目前，DNA 倍体分析系统进行宫颈癌前病变的诊断及预测在国内外已有大量报道13。在北美及欧洲细胞 DNA 定量分析诊断方法已是一种常见临床检测方法之一4，5。本
9、研究主要探讨用宫颈常规细胞学结合全自动DNA 图像分析系统诊断宫颈癌及癌前病变。41 材料与方法2005 年 10 月至 2006 年 5 月，3 266 名妇女在本院进行宫颈癌筛查。参与检查妇女的年龄多数在 2262 岁。宫颈癌普查试剂盒由武汉兰丁肿瘤早期诊断检测中心提供，其中包括：宫颈刷、盛有固定液的标本管、标签、申请单等。1.1 取 材妇科医生在阴道扩张器直视下，手持宫颈刷的刷柄，通过扩阴器，将刷头中央较长的刷丝从子宫颈外口插入子宫颈管内（约 8mm）处，周边刷丝顶部抵触于子宫颈黏膜面，顺时针或逆时针旋转 35圈，取出宫颈刷后，用镊子夹紧刷头底座，拔脱刷头，将刷尖向下垂直方向浸泡在样本收
10、集管固定液内，旋紧管盖后震荡摇晃，然后将贴上标签的标本管送到细胞实验室制片。1.2 液基薄层制片及染色将装有固定液和刷头的标本收集管，经化学和物理处理，每例制成 2 张薄层细胞学片。其中 1 张巴氏染色做常规细胞学诊断，另外1 张 Feulgen DNA 染色做 DNA 定量测定。51.3 细胞学诊断所有巴氏染色片经有经验的细胞病理医生读片。根据 Bethesda诊断分为 5 组：正常或良性； 不明意义的非典型鳞状上皮(typical squamous cells of undermined significance，ASCUS) ；低级别鳞状上皮内病变(low?鄄 grade squamou
11、s intraepithelial lesion，LSIL)；高级别鳞状上皮内病变(high?鄄 grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)或原位癌(carcinoma in sita，CIS)； 鳞状上皮浸润癌。1.4 细胞 DNA 定量分析所有 Feulgen 染色片用 AcCell 全自动细胞图像分析系统进行扫描处理6，7，该系统已达到欧洲定量细胞病理学会所制定的有关DNA 定量分析图像系统的各项标准8。一般情况下，AcCell 系统对每张玻片上 6 000 个以上的细胞核进行扫描测定。经扫描后的每个细胞核均有 128 个特征值，其中包括形态特
12、征、吸光特征、具体结构特征、Markovian 和非 Markovian 结构特征和长度特征等。AcCell 系统根据不同细胞成分所具有的不同特征参数来完成自动细胞分类和计数过程，如正常上皮细胞，增生或癌变细胞，淋巴细胞，中性白细胞及未参与诊断的垃圾细胞（重叠细胞核，聚焦不良细胞6核和核碎片等） 。标准对照细胞为同张玻片上的 100 个正常上皮细胞，所测出的平均光密度(intergrated optical density，IOD) 为2C 的参考值，其 CV（ coefficient of variantion）值5% 。如果出现以下三种情况就诊断异常：出现 5C（DNA 指数2.5 ）非整
13、倍细胞。4C 细胞数超过被测细胞总数的 10%。出现非整倍体细胞峰。凡是有 DNA 指数2.5 以上细胞的玻片，都要通过细胞技术员在显微镜下逐一对 DNA 指数2.5 细胞进行核实，以排除 AcCell系统将垃圾和重叠的细胞核误认为癌细胞或异常细胞。1.5 结合常规细胞学与 DNA 定量分析根据表 1 而做出综合诊断及建议。1.6 阴道镜及病理学检查凡建议活检妇女，均建议进行阴道镜检查并对宫颈可疑部位进行四点以上的组织活检。每例活检样本由有经验的病理学医生出病理诊断报告。病理诊断报告分别为正常、宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN1、CIN2、CIN3）或原位癌和浸润癌。2 结 果72.1 常规细胞
14、学与 DNA 倍体分析比较3 266 名妇女中，常规细胞学诊断 3 214 例正常，42 例ASCUS、9 例 LSIL 及 1 例 HSIL；DNA 倍体分析发现 3 117 例未见非整倍体细胞，114 例 12 个5C 非整倍体细胞，27 例 310个5C 非整倍体细胞和 8 例 10 个或 10 个以上5C 非整倍体细胞。在 42 例 ASCUS 病例中，除 2 例 ASCUS 和 1 例 LSIL 外，其余ASCUS，LSIL 和 HSIL 均可见非整倍体细胞。在 114 例 12 个非整倍体细胞病例中，89 例常规诊断为正常，其余 25 例分别诊断为ASCUS 和 LSIL。在 27
15、 例 310 个5C 细胞病例中，有 11 例常规诊断正常，16 例诊断为 ASCUS 或 LSIL。在 8 例大于 10 个5C 细胞病例中，常规均诊断为 ASCUS、LSIL 或 HSIL。表 2 中常规细胞和 DNA 倍体分析均为正常 3 114 例，常规细胞学诊断正常而 DNA 发现 12 个5C 细胞 89 例和常规诊断为ASCUS 而 DNA 分析正常的 2 例，未要求活检，其余的 61 例均要求活检。2.2 病理学诊断与 DNA 倍体分析和常规细胞学比较有 61 例妇女要求活检，但在本院实际活检例数为 32 例。32 例8病理检查发现 1 例为宫颈炎， 17 例 CIN1，7 例
16、 CIN2，6 例CIN3/CIS 和 1 例浸润癌。表 3 显示，在 1 例宫颈炎中 DNA 倍体分析发现有 310 个大于5C 细胞（常规诊断为 ASCUS） 。在 17 例 CIN1 中有 1 例 DNA 倍体分析正常，而常规诊断为 LSIL，其余 16 例均可见 DNA 倍体异常。在 7 例 CIN2、6 例 CIN3/CIS 和 1 例浸润癌中均可见 DNA 倍体异常。在 18 例病理诊断为宫颈炎和 CIN1 病例中，有常规细胞学分别诊断为 2 例正常，12 例 ASCUS，3 例 LSIL。在 14 例病理诊断为CIN2、CIN3/CIS 和浸润癌的病例中，常规细胞学分别诊断为 1 例正常，8 例 ASCUS，4 例 LSIL 和 1 例 HSIL。2.3 敏感性若以病理学诊断为金标准，计算常规细胞学和 DNA 倍体分析诊断 CIN2 或 CIN2 以上级别的敏感性。若以 ASCUS 和 LSIL
