《CD14基因启动子多态性与冠心病的关系》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CD14基因启动子多态性与冠心病的关系（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1CD14 基因启动子多态性与冠心病的关系作者：韦叶生，刘运广，唐任光，蓝景生 【关键词】 冠状动脉疾病Association between CD14 gene promoter region polymorphisms and coronary heart disease【Abstract】 AIM: To study the allele frequencies and genotype distribution of CD14 gene promoter region -159C/T, -260C/T polymorphisms in Chinese patients with cor
2、onary heart disease(CHD), and to analyze the association between the serum levels and genotypes of CD14 and CHD. METHODS： The polymorphisms of CD14 gene were analyzed by the polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) methods in 246 patients with CHD and 258 healthy c
3、ontrols, and the serum levels of CD14 were determined by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS： The CHD group showed significantly higher serum levels of CD14 than control group (P0.05); but the CD14 gene -260C/T polymorphism was significantly different (P0.05). The relative risk for CHD
4、 in T allele carriers was 1.417 times as high as that in C allele carriers (OR=1.417，95%CI：1.106-1.816）, and the serum level of CD14 in T allele carriers was significantly higher than that in noncarriers (P0.05). CONCLUSION： CD14 gene promoter region -260C/T polymorphism is associated with CHD; and
5、T allele may be a risk factor for CHD; so T allele carriers have a higher risk for CHD by increasing the CD14 expression.【Keywords】 coronary disease; CD14; gene polymorphism【摘要】 目的： 研究白细胞分化抗原 14(CD14)基因启动子 159C/T，260C/T 多态性各等位基因及基因型在冠心病患者中的分布频率，分析 CD14 基因型及血清 CD14 水平与冠心病的相关性. 方法： 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(
6、PCRRFLP)技术，检测 246 例冠心病患者及 258 名正常人对照组 CD14 的基因多态性，同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测血清 CD14 水平. 结果： 冠心病组血清 CD14 水平显著高于对照组(P0.05） ，而 CD14 基因 260C/T 多态性在两组人群中的分布差异存在显著性（P0.05 ） ，等位基因频率的相对风险分析发现，T 等位基因携带者患冠心病的风险是 C 等位基因的 1.417 倍(OR=1.417，95%CI：1.1061.816)，携带 T 等位基因的冠心病患者血清 CD14 水平显著高于不携带者(P0.05). 结论： CD14基因启动子 260
7、C/T 多态性与冠心病的发病具有相关性，其中 T 等位基因可能是冠心病发病的遗传易感基因；携带 T 等位基因的个体可能通过促进 CD14 的高度表达进而增加了冠心病的发病风险.【关键词】 冠状动脉疾病； CD14； 基因多态性0 引言冠心病（coronary heart disease，CHD）是严重危害中、老年人生命健康的疾病. 其病因和发病机制尚未完全阐明，但细胞因子在其中的作用越来越受到重视. 白细胞分化抗原 14 (cluster of differentiation antigen14，CD14) 是最近几年倍受关注的一种多功能炎症细胞因子，主要由成熟的单核巨噬细胞所产生，它在炎症、
8、免疫反应及动脉粥样硬化形成中起着重要作用，并且与心血管疾病存在着密切关系1 . 但 CD14 在冠心病中异常表达的分子遗传学机制尚不清楚. 本研究采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性4(PCRRFLP)和酶联免疫吸附试验(ELISA) 的方法，拟探讨 CD14 基因多态性及血清水平与冠心病的关系，阐明基因型与表型之间的联系，为揭示冠心病的发病机制提供一定的理论依据.1 对象和方法1.1 对象冠心病组： 246（男 175，女 71）例，年龄4187(61.310.8)岁，均为右江民族医学院附属医院心血管内科的住院患者，冠心病诊断符合 1979 年世界卫生组织(WHO)制定的标准，并排除糖尿病、
9、家族性高胆固醇血症、甲状腺疾病、肾脏疾病、肝脏疾病等. 对照组：258（男 176，女 82）例，年龄3783(59.711.2)岁，均为在右江民族医学院附属医院经常规体检，心电图，X 线胸片等检查排除了心、脑、肝、肾等疾病的健康体检者. 研究对象为广西地区非血缘个体.1.2 方法采用已建立的改良碘化钠法2提取白细胞基因组DNA，-70保存备用. PCR 扩增：参照文献3-4 设计两对引物，由北京赛百盛有限公司合成. 用于特异性扩增 CD14 基因包含 159位点的一段 DNA 引物序列，上游引物为：5GTGCCAACAGATGAG GTTCAC3；下游引物为：5GCCTCTGACAGTTTA
10、TGTAATC3；扩增 CD14 基因包含 260 位点的一段 DNA 引物序列，上游引物为：55TGGCCTAAGGCACTGAGGATCAT3；下游引物为：5TCAGTTCCCTCCTCTGTGAACCC3. CD14 的 PCR 扩增反应体系均为 50 L，其中含 10PCR 缓冲液 5.0 L，2.5 mmol/L dNTPs 4.0 L，上、下游引物各 40 pmol/L，模板 DNA 10.0 L，TaqDNA 聚合酶 2.5 U，不足体积用灭菌双蒸水补足至 50 L. 置热循环仪(TC48/H 型)中 94预变性 3 min；再按下列程序循环35 次，即 94变性 45 s，59
11、退火 1 min，72延伸 1 min；末次循环后，72延伸 5 min. 分别取 PCR 扩增产物 10 L，用 5 U限制性内切酶 Ava II 酶切 CD14 基因 159 位点，37 孵育 2 h；用5 U 限制性内切酶 Hae III 酶切 CD14 基因 260 位点，37 孵育 3 h，反应终止后，消化片段分别在 20 和 25 g/L 琼脂糖凝胶上电泳，EB 染色，染色后经紫外灯判断结果并拍照. 采用 ELISA 测定可溶性CD14(sCD14)的血清水平，每次测定均严格按说明书操作. 酶法测定血清总胆固醇（TC）和甘油三酯(TG)；遮蔽法直接测定高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)
12、和低密度脂蛋白胆固醇 (LDLC)；apoAI，apoB用双波长免疫透射比浊法测定. 以上测定均在 7060 型(日本产)全自动生化分析仪上进行，每次测定均选用高、中、低 3 种质控样品进行质控，以上项目检测质控均符合英国 RIQAS 国际质控标准.统计学处理： 用 SPSS 10.0 软件包进行分析. 基因型和等位基因频率采用基因直接计数法计算，各组间基因型及等位基因频率比较采用 2 检验，并以比值比（ OR）及其 95%可信区间6（95%CI）估计相对危险度. 计量资料用 xs 或 Md（QR ）表示，各组间指标比较依据指标性质，用 t 检验、非参数秩和检验. P0.05 为差异有统计学意
13、义 .2 结果2.1CD14 基因型分析 CD14 基因 159C/T 多态性，PCR 扩增产物片段大小为 497 bp，根据限制性内切酶 Ava II 酶切片段的情况，基因型有 3 种，CC 型（497 bp 1 条带） ，CT 型（497 bp，353 bp，144 bp 3 条带） ，TT 型（353 bp，144 bp 2 条带） ；CD14 基因 -260C/T 多态性，PCR 扩增产物片段大小为 268 bp，根据限制性内切酶 Hae III 酶切片段的情况，基因型有 3 种，CC 型（159 bp， 109 bp 2 条带） ，CT 型（268 bp，159 bp，109 bp
14、3 条带） ，TT 型（268 bp 1 条带） （图 1， 2）.13：CC 基因型；4, 5, 7：TT 基因型；6：CT 基因型; M：DL2000 marker 分子量标准.图 1CD14 基因 159 位点基因型电泳（略）1, 5：TT 基因型； 2, 4：CT 基因型；3：CC 基因型; M：DL2000 marker 分子量标准.7图 2CD14 基因 260 位点基因型电泳（略）2.2CHD 组与对照组临床资料比较 CHD 组与对照组在性别和年龄上进行了匹配. CHD 组 TC，TG，LDLC 和 sCD14 水平均显著高于对照组（P0.05，表 1）.2.3CHD 组与对照组 CD14 基因多态性的比较 CD14 基因启动子 159 位点基因型在 CHD 组与对照组中的分布差异无显著性（2=1.449，P0.05） ；CD14 基因启动子 260 位点基因型在两组人群中的分布差异有显著性（2=7.022，P0.05） ，等位基因频率在两组人群中的分布也存在着显著性差异（2=7.622，P0.05,表 2）.表 1 冠心病组与对照组临床资料比较（略）aP0.05，阴性数据未列出） ；而 CD14 基因 260 位点各基因型间（CC ， CT 和 TT 基因型）sCD14
