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1、1Caveolin1 基因 mRNA 和蛋白在胃癌组织的表达作者：刘斌杨育生邢传平高自芳顾立萍钱震董亮苏勤军 【摘要 】 目的： 通过研究 Caveolin1 mRNA 及蛋白在胃不同病变组织中的表达, 对 mRNA 及蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数间的关系进行分析. 方法： 25 例正常胃黏膜、65 例不典型增生胃黏膜及 71 例胃癌组织，采用免疫组化 SP 法检测蛋白的表达情况；依据 GenBank 中 Caveolin1 基因序列（NC000007 ） ，设计并合成全长 21 bp 的寡核苷酸探针，运用原位杂交技术对 Caveolin1 mRNA 的表达进行检测. 结果： Cave
2、olin1 mRNA 和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞浆中的阳性表达率呈递减趋势，阳性率分别为：92.0%, 83.1%, 38.2% 和 88.0%, 83.1%, 28.2%. Caveolin1 mRNA 和蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移组、有无脉管侵犯组内表达率的差异有统计学意义(P0.05). Caveolin1 mRNA 和蛋白表达呈正相关（rs=0.967, P0.05）. 结论： Caveolin1 mRNA 和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、胃癌中阳性表达率均逐渐降低，两者在不同病变组织中表达的一致性提示该基因在癌组织中的低表2达发生于转录或以上水
3、平的抑制. 【关键词】 胃肿瘤； Caveolin1 基因；免疫组织化学；原位杂交 【Abstract】 AIM: To investigate the expression of Caveolin1 mRNA and protein in different lesions of gastric tissues and to analyze the correlations among mRNA, protein expression and clinical parameters. METHODS: SP immunohistochemical method and in situ hyb
4、ridization (ISH) method were respectively used to detect the expression of Caveolin1 protein and mRNA in 25 normal gastric tissues, 65 gastric atypical hyperplasia cases and 71 gastric carcinoma cases. The 21 bp oligonucleotide probe of Caveolin1 gene sequence was designed and synthesized according
5、to GenBank (NC000007). RESULTS: The positive expressions of Caveolin1 mRNA and protein in normal gastric tissues, gastric atypical hyperplasia and gastric carcinomas were gradually decreased and the positive rates were 92.0%, 83.1%, 38.2% and 88.0%, 83.1%, 28.2%, respectively. The expression of Cave
6、olin1 mRNA and protein was correlated with the malignant progression of gastric carcinoma, lymph nodes metastasis and vessel invasion (P0.05). In addition, the 3expression of Caveolin1 mRNA was positively related to the protein expression (rs=0.967, P5 cm 的胃黏膜 25 例作为正常对照. 所有标本均经 40 g/L 甲醛固定，常规石蜡包埋，4
7、 m 厚连续切片，分别行 HE 和免疫组化染色及原位杂交. Caveolin1 抗体为鼠抗人单克隆抗体（稀释度为 1400）购于美国基因公司. 原位杂交检测试剂盒(REMBRANT Universal RISH & HRP Detection Kit)购于 PanPath 公司. Caveolin1 基因寡核苷酸探针：使用 Oligo 软件设计探针，由上海生工生物技术服务有限公司合成. Caveolin1 寡核苷酸探针序列为 5CTCAG CCAAT AAAGC GATGG A3，探针片段长度 21 bp，3端标记地高辛. 1.2 方法 1.2.1 免疫组化 SP 法染色石蜡切片，烤干后脱蜡至
8、水，高温5修复，30 mL/L H2O2 孵育 10 min,加入非免疫性动物血清孵育 10 min，加入一抗过夜，再加入二抗， DAB 显色，苏木素复染，中性树胶封片. Caveolin1 阳性表达均位于细胞质内. 1.2.2 原位杂交石蜡切片经常规脱蜡至水，30 mL/L H2O2室温放置 10 min 以灭活内源性过氧化物酶，滴加 3%盐酸新鲜稀释的胃蛋白酶，37消化 15 min，以暴露 mRNA 核酸片断，变性及杂交，过夜，加 HRP 化鼠抗地高辛，37孵育 30 min，DAB 显色，苏木素复染，中性树胶封片. mRNA 表达：胞质内着棕黄色为Caveolin1 mRNA 信号阳性
9、. 1.2.3 结果判定 采用双盲法对每张切片在高倍镜（400）下计数 10 个视野，以染色强度分别计 0 3 分，无染色为 0 分，棕黄色为 2 分，棕褐色为 3 分；再以阳性细胞所占百分比评分，阴性为 0 分，阳性细胞10%为 1 分，11%50%为 2 分，51% 75%为 3 分，75%为4 分；两项得分相乘，0 分为“” ，1 2 分为“+” ，6 8 分为“” ，912 分为“”. 基因扩增：细胞核内检测到阳性信号（正常细胞核内无阳性信号）即为基因扩增. 统计学处理： 组间率的比较采用 2 检验，测量指标间相关分析采用 Spearman 秩相关，使用 SPSS10.0 统计软件包进
10、行统计学处理. P0.05 为差异有统计学意义 . 2 结果 2.1Caveolin1 mRNA 和蛋白在不同病变的胃组织中的表达 6Caveolin1 mRNA 在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞质中的表达阳性表达率呈递减趋势（图 1） ，2 检验显示组间差异有统计学意义（2=108.403, P0.05）, Caveolin1 mRNA 在部分癌细胞核中呈强阳性表达，蛋白阳性表达率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌各组间呈递减趋势（2=36.328， P0.05，图 2）. 另外，Caveolin1 mRNA 在胃黏膜不典型增生组和胃癌组间阳性率差异有统计学意义（2=47.556
11、， P0.01） ；胃黏膜不典型增生和高分化腺癌组间阳性率差异有统计学意义（2=4.980， P0.05，表 1). 表 1 不同胃黏膜组织中Caveolin1 mRNA 和蛋白表达（略） 2.2Caveolin1 基因 mRNA 和蛋白在胃癌中的表达Caveolin1 基因 mRNA 和蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移组、有无脉管侵犯组内表达率的差异有统计学意义(P0.05),在年龄及性别组内表达率的差异无统计学意义(P0.05，表 2). Spearman 等级相关分析显示 Caveolin1 mRNA 和蛋白表达呈正相关（rs=0.967, P0.05）. 表 2 胃癌组织中 Ca
12、veolin1 mRNA 及蛋白表达与临床病理参数的关系（略） 2.3 胃癌组织中 Caveolin1 基因扩增和细胞浆内 mRNA 表达的相关性正常胃黏膜和不典型增生胃黏膜中细胞核内均未见Caveolin1 基因扩增，但部分胃癌组织中可见癌细胞核中有基因扩增，并且其表达趋势与 Caveolin1 蛋白和胞浆内 mRNA 表达呈相反趋势（表 3）.表 3 胃癌中 Caveolin1 蛋白表达、基因扩增和7胞浆内 mRNA 表达的相关性（略） 3 讨论 肿瘤组织中基因表达指从基因转录到产物最终发挥生物学功能的全过程，基因表达异常的最终表现是该基因生物学功能的丧失或增强，基因表达研究主要是检测所表达蛋白和基因转录产物RNA，二者具有如下关系： 蛋白质表达正常，而功能丧失或异常，说明翻译后修饰阶段异常或是结构基因发生了突变； 蛋白质表达明显改变，需要进行基因转录产物（
