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1、120(S)人参皂苷 Rg3 对 Lewis 肺癌生长及转移的抑制作用作者：倪劲松,辛颖, 王心蕊 ,石博,陈迪, 田阔 ,陈兰悦,吴家祥【摘要 】 目的 观察 20（S ） 人参皂苷 Rg3（SPGRg3 ）抗Lewis 肺癌生长及转移的作用并探讨其作用机制。方法 建立 Lewis肺癌实体瘤模型及自发肺转移模型观察 SPGRg3 的抗肿瘤作用，并取 Lewis 肺癌 C57BL/6 荷瘤小鼠的脾脏，检测 T 淋巴细胞转化活性、NK 细胞及 IL2 活性。结果 实体瘤实验中，3.0mg/kg 和1.0mg/kg SPGRg3 用药组瘤重明显低于溶剂对照组（P0.05） ；SPGRg3用药组肺转
2、移结节均明显少于溶剂对照组（P0.05） ；SPGRg3用药组 Lewis 肺癌 C57BL/6 荷瘤小鼠的脾细胞对 ConA 和 IL2 反应性以及 NK 活性均高于溶剂对照组（P99.5% ，注射前用生理盐水稀释成所需浓度，溶剂对照组含有溶剂和生理盐水。环磷酰胺，50mg/kg，上海华联制药有限公司。纯系 C57BL/6N 小鼠，雌雄各半，体重1822g，购于本校实验动物部，动物等级为普通级，合格证编号为 101025。高转移 Lewis 肺癌细胞由本校放射生物实验室惠赠，培养于含 10%新生牛血清的 RPMI1640 培养液中。31.2SPGRg3 对 Lewis 肺癌实体瘤生长的作用无
3、菌条件下，取 Lewis 肺癌实体瘤，用玻璃匀浆器加生理盐水(13)磨制成细胞悬液，取 0.2ml（含瘤细胞 2106）接种于C57BL/6N 小鼠右腋窝皮下，接种后将动物随机分成 5 组：SPGRg3 3mg/kg、 1mg/kg、0.3mg/kg 组，阳性（环磷酰胺）及阴性（溶剂）对照组。次日腹腔注射 SPGRg3，连续给药10d（1 次/天） ，停药 24h 后处死动物，称体重及瘤重，计算肿瘤生长抑制率(%)，其值为- （治疗组平均瘤重对照组平均瘤重） 100%。1.3SPGRg3 对 Lewis 肺癌自发肺转移的作用取体外培养对数生长期 Lewis 肺癌细胞，以 5105/只接种于C5
4、7BL/6N 小鼠右后肢爪垫皮下。随机分为 4 组，即 SPGRg3 3mg/kg、 1mg/kg、 0.3mg/kg 组及溶剂对照组。次日腹腔注射SPGRg3，连续用药 5 周（1 次/天） ，在第 3 周截除荷瘤下肢，第5 周末处死小鼠，取出肺组织用 Bouins 液固定，在解剖显微镜下（10）计数肺组织表面肿瘤结节数。1.4SPGRg3 对 Lewis 肺癌 C57 荷瘤小鼠免疫功能影响4取 Lewis 肺癌实体瘤，按 13 加入生理盐水研磨成细胞悬液，取 0.2ml（含瘤细胞 1106）接种于小鼠右腋皮下，次日腹腔注射SPGRg3(1.0mg/kg)，连续给药 21d 后处死动物、无菌
5、条件下取脾脏，分别检测淋巴细胞转化活性、NK 细胞活性以及对 IL2 反应活性4。1.5 统计方法采用 SPSS10.0 统计软件，应用方差分析处理数据。2 结果2.1SPGRg3 对 Lewis 肺癌生长的抑制作用3 次体内重复实验均见 SPGRg3 用药组瘤重明显低于溶剂对照组，见表 1，其中以 3.0mg/kg 和 1.0mg/kg SPGRg3 组效果非常显著（P0.05） ， 0.3mg/kg 组效果不明显（ P0.05） ，且3.0mg/kg SPGRg3 组抑瘤率 3 次均在 30%以上，说明SPGRg3 具有明显地抑制 Lewis 肺癌生长的作用。但 SPGRg3组瘤重明显高于
6、阳性药物组（P0.05 ） ，说明 SPGRg3 的抑瘤作用较传统的细胞毒性抗肿瘤药物的作用差。52.2SPGRg3 对 Lewis 肺癌自发肺转移的抑制作用SPGRg3 用药组肺转移结节数明显少于溶剂对照组，0.3mg/kg 组即显示出明显的作用，具有显著统计学意义（P0.05） ，且随着剂量的增加其作用也有增加趋势，可见SPGRg3 具有明显地抑制 Lewis 肺癌自发肺转移的作用，见表2。2.3SPGRg3 对 Lewis 肺癌 C57 荷瘤小鼠免疫功能影响SPGRg3 用药组瘤重低于溶剂对照组（P0.05 ） ，脾细胞对ConA 、IL2 反应性和脾细胞 NK 活性值均高于溶剂对照组（
7、P0.05） ，这表明 SPGRg3 提高小鼠 NK 细胞杀伤活性、提高脾淋巴细胞对 IL2 及 ConA 刺激的反应性，说明 SPGRg3 能明显提高机体免疫功能，见表 3。3 讨论SPGRg3 属原人参二醇型皂甙，其水溶性好，生物利用率较高，已有研究表明，其有抑制儿茶酚胺分泌、保护神经元、拮抗血管平滑肌收缩5,6、抗肿瘤等功效。本组实验中观察到， SPGRg3 在体内具有明显地抑制 Lewis 肺癌生长和自发肺转移的作用。而我们6前期实验结果显示 SPGRg3 可明显抑制 B16 黑色素瘤肺转移、B16 黑色素瘤细胞的侵袭力以及肿瘤新生血管的形成6 。这说明SPGRg3 抑制 Lewis
8、肺癌的生长和转移的作用可能与其抗肿瘤血管新生、降低肿瘤细胞侵袭力的活性有关。表 1SPGRg3 对 Lewis肺癌生长的抑制作用表 2SPGRg3 抗 Lewis 肺癌自发肺转移作用与溶剂对照组比较，*P0.05；*P0.01 本次实验还通过检测SPGRg3 对荷瘤小鼠免疫力的影响，从免疫方面探讨其抗肿瘤的作用机制。淋巴细胞增殖能力的强弱，在某种程度上代表了淋巴细胞功能的高低4。ConA 诱导的淋巴细胞体外增殖反应能力的提高提示脾脏淋巴细胞的免疫活性明显增强，SPGRg3 提高脾细胞对ConA 刺激的反应性，说明 SPGRg3 提高了淋巴细胞的免疫功能。NK 细胞是细胞免疫中非特异部分，其可通
9、过表面受体与肿瘤细胞结合释放溶细胞素致肿瘤细胞死亡。IL2 其抗肿瘤机制在于刺激和活化效应细胞，IL2 能促进未成熟的细胞毒性淋巴细胞增殖和产生溶细胞作用，可解除肿瘤浸润淋巴细胞的免疫抑制状态并增强其免疫功能，并能促进 NK 细胞增殖、维持 NK 细胞长期生长并增强其活性。由此可见，IL2 在细胞免疫应答过程中发挥了重要作用。SPGRg3 提高了脾淋巴细胞对 IL2 的反应性，增强了荷瘤小鼠NK 细胞的杀伤活性，说明在 SPGRg3 作用下，更多有活性的淋巴细胞和 NK 细胞参与了肿瘤细胞免疫应答过程，提高机体的免疫功能，从而对肿瘤的生长和转移起到抑制作用。7SPGRg3 有明显的抗肿瘤活性，
10、并可提高荷瘤机体的免疫力，这说明其不仅可以提高机体对肿瘤的免疫应答，也可以提高荷瘤机体对其他致病因素的抵抗力。这一点优于其他抗肿瘤药物，对于肿瘤病人，尤其是放、化疗后的病人是致关重要的。SPGRg3 单独应用或与其他肿瘤化疗药物联合应用将给肿瘤治疗带来新的希望。【参考文献】 1 Mochizuki M,Yoo YC,Matsuzawa K,et al.Inhibitory effect of tumor metastasis in mice by saponin,ginsenosideRb2,20(R) and 20(S)ginsenosideRg3,of red ginsengJ .Biol
11、 Pharm Bull,1995,18(9): 11971202.2陈大富，赵扬冰，白绍槐,等. 裸鼠原位种植人乳腺癌细胞株术后早期应用人参皂甙 Rg3 对切口愈合的影响J.肿瘤防治研究，2003，30 （ 5）：391392.3Ji Yoon Lee,JunWan Shin,KyungSoo Chun,et al.Antitumor promotional effects of a novel intestinal bacterial metabolite (IH901) derived from the protopanaxadioltype ginsenosides in mouse s
12、kinJ.Carcinogenesis, 2005,26(2): 359367.84杨贵贞.免疫生物工程纲要与技术 M.长春:吉林科学技术出版社,1991.48.5Tachikawa E,kudo K,Nunokawa M,et al.Characterization of ginseng saponin ginsenosideRg3 inhibition of catacholamine sectetion in bovine adrenal chromaffin cells.Biochem Pharm,2001,62(7): 943951.6Kim ND,Kang SY,Kim MJ,et al.The ginsenoside Rg3 evoke endotheliumindependent relaxation in rat aortic ring:role of K+ channelsJ.Eur J Pharmacol,1999,367(1): 5157.7辛颖，倪劲松，王心蕊,等.20(S) 人参皂苷 Rg3 抗 B16 黑色素瘤转移的作用J.吉林大学学报（医学版） ，2004，30（4）：540543.
