《血凝和血凝抑制ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血凝和血凝抑制ppt课件.ppt（20页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、血凝和血凝抑制试验 1 一 试验目的 血凝试验 滴定病毒的血凝效价 病毒的凝集价 采用一定的病毒量 通常采用4个血凝单位 血凝抑制试验 应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用特 异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒 检测鸡群有无病毒感染和监测鸡的免疫状态 掌握血凝和血凝抑制试验的原理和操作方法 能够 正确判定试验结果 2 二 血凝试验 hemagglutination test 原理 病毒粒子上的血凝素蛋白与红细胞特定表 面受体相结合 引起特异性凝集 血凝现象 有些病毒可凝集某些动物 如鸡 鹅 豚鼠 绵羊 和人的红细胞 3 HA试验的原理示意图 4 用途 1确定病毒的存在 2测定病毒的血凝价 血凝
2、价 能使一定量红细胞发生50 凝集的 病毒最高稀释度 5 6 7 8 实验材料 器材 96孔V型微量反应板 微量移液器 枪头 试剂 1 鸡红细胞 采集健康鸡血液 以阿氏液抗凝 用PBS洗涤3 5次 用PBS配成1 红细胞悬液备 用 试验抗原 PBS缓冲液 9 血凝实验步骤 1 取96孔V型反应板1块置于水平实验台上 在第1排 1 10孔内加入25ulPBS缓冲液 第11孔不加 第12孔 加25ulPBS缓冲液 2 在第1孔内加入血凝素25ul 混匀后吸出25ul加入第 2孔内 再混匀后吸出25ul加入第3孔内 依次类推 至第10孔时弃掉25ul 第12孔不加作阴性对照孔 3 在1 12孔均加入
3、25ul的生理盐水 4 在每孔内加入25ul1 的鸡红细胞悬液 震荡 室温静止感 作15 30min 每5min观察一次结果 5 计算血凝效价 稀释使成为四价备用 10 结果判定 1 在各组对照均正确的情况下 按下列标准判定 血凝反应强度示意图 4 红细胞呈片状凝集 均匀布满孔底 边缘有时不整齐或皱缩 3 红细胞呈片状凝集 但面积略小于 4 2 红细胞呈片状凝集 但有少许沉积孔底中部呈小圆点状 红细胞大部分沉于孔底中央 周围有少量散在凝集颗粒 红细胞均沉于孔底呈小圆点状 边缘整齐 2 对照孔正常的情况下 红细胞凝集100 的稀释度为判定血凝价的 终点 凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为
4、病毒的凝集 价 11 12 血凝抑制试验步骤 1 取96孔V型反应板1块置于水平实验台上 在第1排1 10孔内加入25ul PBS缓冲液 第11孔不加 第12孔加25ul PBS缓冲液 2 在第1孔内加入被检血清25ul 混匀后吸出25ul加入 第2孔内 再混匀后吸出25ul加入第3孔内 依次类推至 第10孔时弃掉25ul 第12孔不加作阴性对照孔 3 在1 12孔内均加入 四价 血凝素25ul 震荡后 室温 静止作用40min 4 在1 12 孔内均加入1 的鸡红细胞悬液25ul 震荡 室温30min 5 观测结果 记录实验数据 13 血凝抑制试验结果判定 测定孔 RBC沉于孔底中心 呈纽扣
5、状 凝集 病毒对照孔 凝集 RBC对照孔 无自凝 血凝抑制试验效价 呈完全血凝抑制使的最高血 清稀释度 14 15 16 17 思考题 1 病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反 应 为什么 2 血凝抑制实验是不是特异的抗原抗体反应 为什么 3 血凝试验中为什么要加补充液 4 为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加 5 血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义 18 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 H A 稀释度248163264128256 弃 PBS25252525252525252525x25 血凝素2525252525252525252525血 凝素 x PBS 252525252525252525252525 1 鸡红 细胞 252525252525252525252525 结果预测 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 HI 稀释度248163264128256 弃 PBS 25252525252525252525X25 待检血 清 2525252525252525252525x 4HA血凝 素 252525252525252525252525 1 鸡红 细胞 252525252525252525252525 结果预测 19 此课件下载可自行编辑修改 供参考 感谢您的支持 我们努力做得更好 20
