《实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法20191017》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法20191017（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验六 植物组织中总糖和 还原性糖含量的测定 1 实验目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法 学习总糖和还原糖提取的方法 2 实验重点和难点 利用3 5 二硝基水杨酸法测定还原糖含量的 实验原理 多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖 3 实验原理 3 1 还原糖的概念 指含有游离的半缩醛 酮 基糖 单糖都是还原 糖 某些二糖是还原糖 如麦芽糖 乳糖等 多糖多为非还原糖 葡萄糖分子中含有游离醛基 果糖分子中含有游 离酮基 乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基 故它们都是还原糖 3 2 3 5 二硝基水杨酸比色法 总糖的提取及双 多糖的酸水解 利用糖的溶解 度不同 可将植物样品中的单糖 双糖和多糖分 别提
2、取出来 对没有还原性的双糖和多糖 可用 酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产 物 3 5 二硝基水杨酸 黄色 则被还原为棕红色 的3 氨基 5 硝基水杨酸 在一定范围内 还原糖 的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系 利用 分光光度计 在540nm波长下测定光密度值 查对 标准曲线并计算 便可求出样品中还原糖和总糖 的含量 由于多糖水解为单糖时 每断裂一个糖苷键需加 入一分子水 所以在计算多糖含量时应乘以0 9 相对密度法 折光法 旋光法 物理法 3 3 糖含量测定方法 化学法 还原糖法 碘量法 比色法 直接滴定
3、法 改良的兰 爱农法 高锰酸钾法 萨氏法 3 5 二硝基水杨酸 酚 硫酸法 蒽酮法 半胱氨酸 咔唑法 纸色谱 薄层色谱 GC HPLC 半乳糖脱氢酶测半乳糖 乳糖 葡萄糖氧化酶测葡萄糖 发酵法 测不可发酵糖 重量法 测果胶 纤维素 膳食纤维素 色谱法 酶法 4 操作步骤 4 1 制定标准曲线 管号012345 标准葡萄糖溶液 mL00 20 40 60 81 0 蒸馏水 mL1 00 80 60 40 20 DNS试剂 mL2 02 02 02 02 02 0 沸水浴中准确煮沸5min 取出 用自来水冷却至室温 蒸馏水 mL9 09 09 09 09 09 0 葡萄糖浓度 mg mL00 20
4、 40 60 81 0 A540 4 2 植物组织中总糖与还原糖溶液的获取 1 还原糖 30mL水冲研 钵2 3次 1g土豆 研成匀浆 3mL水 三角瓶中 50 水浴0 5h 冷却定到 100mL 混匀 过滤 取滤液作为还 原糖提取液 2 总糖 1g土豆 研成匀浆 3mL水 三角瓶中 沸水浴0 5h 冷却 用 NaOH中和 加水定容 到100mL 混匀 过滤 取滤液作为 总糖提取液 12mL水冲研 钵2 3次 10mL6MHCl I2 KI检测 4 3 用3 5 二硝基水杨酸法测还原糖 总糖含量 管号空白对照 还原糖 样液管 总糖样液管 样液 mL01 01 0 水1 000 DNS试剂 mL2 02 02 0 沸水浴中准确煮沸5min 取出 用自来水冷却至室温 蒸馏水 mL9 09 09 0 A540 5 数据处理与问题 5 1 计算浓度 5 2 本实验的注意事项 预习实验102 1酵母醇脱氢酶的提纯 3 5 二硝基水杨酸法标准曲线
