《酵母双杂交系统ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酵母双杂交系统ppt课件.ppt（20页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 酶母双杂交系统(yeasttwo-hybridsystem)#-LW邝:x7皇F厂寸婢雀切,一切。概念、原理优点与缺点应用,优化。酵母双杂交系统是一种建立在酶母菌基础上的遗传学分析方法,主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中,通过醇母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。该法由Fields等人于1989年首次建立并得到广泛地应用。利用酵母作为真核蛋白相互作用的模型利用诱饵质粒筛选文库或者单个已知蛋白“通过报告基因的转录鉴定蛋白的相互作用。使用不同的培养基筛选阳性克隆、双杂交
2、系统的两个重要元件:。转录激活图子:DNA结合结构域(DNAbindingdomain,简称为DB和转录潘活结构域(activationdomain,简称为AD)。报道株:经改造的、含报道基因的重组质粒的宿主细胞。最常用的是酶母细胞。*酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点D易于转化、便于回收扩增质粒;具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因;)酶母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。醇母双杂TranscriptionivatingionE怡-DNA-Bi丑d董墅囊ReporterGeneDomaiDNA-BindingSite里模型“G一一心萱H里t_宣PamcteRpo
3、e袁世.吴”仪一EUr院们RRRHHKelFRFEL、一g绑一P医途e口s玟putW6PCRmRRRBXL8尿W4文库筛选的步骤。将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛇白的DNA结合域融合构建诱饵质粒“将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母*再将文库质粒转化到酶母中。通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白序列分析。从酵母中分离质粒然后转化E-coli。从大肠杆菌中提取质粒并测序在数据库中比对所测定序列与已知蛋白的同源性质粒构建。在Gal4(或其他合适的蛋自功能域)的DNA结合域前面的多克隆位点处插入待测基因序列构建诱饵质粒*诱饵质粒含有筛选基因,例如氨苄青震素抗性基因,Leu2,Ura3,orTrp1等。
