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1、 TdT介导的dqUTP缺口末端标记技术(TUNEL)TUNEL(TdT-mediateddUTPnickendlabeling)法实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凉亡小体进行原位染色,能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冼涉组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胸感嬉高,因而在细胞浮亡的研究中己被广泛采用刍,_TUNEL蹇蓥.。TUNEL的原理黜主要试剂1.缓冲液(LabelingBuffer):用于维持一定的反应条件,含有以下成分:500mmoL二甲肺戛钾、PH7.210mmoLCoCl2(氯化钴)、1mmoLDTT(
2、二砂苏楼醉)-2.未端脱氧核糖核酸转移酶(TdT):催化3-OH未端dUTP反应的关锤酶,3.荧光素-dUTP:TdT的底物和本实验的标记物丨4.蛋白酶K:/消化组织,增加细胞通透性1N,e二喝武M拱贼怡队广颖4抚峡怡:意5晓明蛇扬【“摄人守原“史雯氓水意毕坂朋医口坂河裴尸砺拘“一圭岩吊吴噬仁洁偷长丶澈“吴伟标个吴木探扬云英b。多排怀医招团、鹏惮L肥核巳圭吴戴史掌宣耐删蒯刨塘S匕水忍林獒沙如切怡万塌“安既糖妍-忍央健希居Ej怡匹李0勤劳意远怡怪E城怀口E江E萱猷舜区怡坏城影糊圆崔“捧巴表婵衔技引弘心吼Q不标口工七妮4)白意8s截机和梁|蝶已蛎沥尔基吴奘歇捧子志拍益国国加挂吴长命艇口杜厅坤星5口
3、柳联。.郭井E2厂命存解益眼标华口日厂TUNEL原理DNAFragmentation-TUNELLabelingPrincipleIsttunicktanshtionInsftuendbeing(IUNEUfempitedependenlfempiatsndependen5+Temnalpoyrecs+Teminaltenslense丨+XdP(申XdP(园自然晚平的绍庞样本(纹胡泡片或育片-1诀入国定洛,宇属1s250)国定1530mih(团志命。446多栗卵涛千PH4的785中,1腾涉计茆PBS源活4E(封间洁2080:洁于界咤“4PBS源沈4诀入述&R中,冰上(28)促乡Zn(逊达010
4、6Ttnt.100济千0196朱林国1进入李2瓮应(诉见Pase8)。DNAFragmentation-TUNEL杉SituCellDeathDetectionKit-TestPrincipleEE0【aE【sssDbUgensesepyEDiagnostics实验流程细腾涂片、贴坚细祖洁绍练奶-石蟒包探纯林片-厢育片符线胺枯本木+国殷蜡水吾。坤白院处途+枯本通通的俞沛+TM蒂作用下奉%单力TP与样本DA的标讥-一一八荚光显徽镜检测加人Stzeptavidixre及物l的玟余氓L光学显徒锴览家结果注意事项极少数细胞凋亡时没有DNA断裂或DNA裂解不完全,此时不适用TUNEL法检测,进而产生假阴性结果。,在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测君阳性。在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大蜜DNA片断,从而引起假阳性结果。在需要严格判凉的情况下,最好同时检测多个凋亡指标0国
