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1、正交设计在三七多糖提取中的应用刘禄明 08自动化（2）班 200810320220摘 要 ：目的 优选三七多糖的提取工艺。 方法 设置四因素三水平正交实验提取三七粗多糖。 结果 最佳提取方案为：料水比=1：40；提取次数3次；每次提取时间为3h；醇沉浓度为乙醇浓度达2/3。结论 正交实验后的最佳方案提取量稳定，方法简单、可行。关 键 词：正交试验；三七多糖；提取三七(Panax notoginseng)是一种名贵的中药材，人参属植物的一种。本草纲目记载：味微甘而苦，颇似人参之味。传统中医把三七主根作为入药的主要选择,其主要成分为皂甙、多糖等。多糖广泛存在于中草药中，现代药理表明，多糖是中草药发
2、挥独特疗效的重要物质基础。然而有关三七多糖的研究却不多见1，为了更深入的研究三七多糖，本实验采取正交实验对三七多糖进行提取，对多糖提取的最佳工艺进行研究。1材料、试剂和仪器1.1材料与试剂三七（Panax notoginseng）购自吉林市九鑫药业公司，经吉林医药学院药学院雷均涛副教授鉴定为正品。葡萄糖、乙醇、氯仿、异戊醇、浓硫酸、蒽酮均为国产分析纯。1.2 仪器与设备电磨机，HH-601超级恒温水浴（华峰仪器有限公司）；GYS-2不锈钢电热恒温水浴箱（北京市医疗设备厂）；HZQ-C空气浴震荡器（哈尔滨东联电子技术开发公司）；GZX-DH-50X55-S电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）；7
3、21可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司）；HC-TP12型架盘天平（天津市天马仪器厂）；LXJ-型离心沉淀机（上海医用分析仪厂）。2方法2.1正交实验提取三七粗多糖根据文献资料及预实验设计提取工艺的正交因素水平（见表1），设立四因素三水平L9(34)表进行正交实验。表1 因素水平表水平ABCD料水比水提次数提取时间醇沉浓度1231：201：301：401次2次3次1小时2小时3小时2：33：44：5 将粉碎的三七粉18g分为9组，每组2g于小烧杯中用无水乙醇浸泡祛除色素，离心常温干燥得到处理后三七粉,按照正交表1前三因素安排，90水浴提取，离心取上清液，将提取液均浓缩至20ml，按正交表1加
4、入相应体积乙醇醇沉，静置过夜，乙醇、乙醚洗涤，离心弃上清，60干燥后称重。2.2脱蛋白 初次提取的粗多糖中还有较多的蛋白质，实验特加入sevag法2进行蛋白质脱离。将粗多糖溶于水，将等体积Sevag液（氯仿：异戊醇=4：1），空气振荡浴90r/min10分钟，静置分液取上层，离心变性的沉淀（蛋白质），再次醇沉干燥。2.3蒽酮硫酸法测定多糖含量2.3.1蒽酮试剂的配制：精确称取蒽酮0.2g至烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸，搅拌至黄色透明液，转移至棕色瓶中保存，临用鲜配。2.3.2标准曲线的制作：精确称取105干燥至恒重的葡萄糖0.1020g ，100ml容量瓶定容备用。分别取葡萄糖标准溶液0.
5、05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.60，0.80ml，用蒸馏水补到2.00ml；分别加入5.00ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完一起进入沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620nm比色。以同样处理的重蒸馏水为空白进行比色。绘制标准曲线，得回归线方程：Y=11.197X-0.0018（R2=0.9997），Y：测定出的A值；X：浓度（mg/ml）。2.3.3测定各个样份多糖含量将1-9号脱蛋白后粗多糖，各取5mg溶于50ml蒸馏水中，定容于50ml容量瓶，各取2ml加入5ml蒽酮试剂，葡萄糖标准
6、曲线法测定A值，A值与提取物中多糖浓度呈回归线方程关系。2.4 验证试验取三份同批三七粉样品根据正交表的最佳试验结果，即料水比=1：30，水提3次，每次提取时间3h，醇沉的乙醇浓度为2/3，进行可靠性和重复性验证，测定多糖含量平均为65.3%，粗多糖得率平均为5.8%，与其他研究者的报道相近3。3.结果正交实验结果及级差分析见表2，方差分析见表3。正交实验指标=实验提取的粗多糖量对应的测定A值表2.正交表结果和级差分析表编号ABCD粗多糖量（mg）A值指标11111102.20.30431.0692122283.70.31429.42231333322.50.18559.66342123117
7、.70.19623.06952231286.50.23567.32862312165.30.25542.15173132112.60.28732.31683213203.00.17836.13493321232.00.28766.584K1120.15386.454109.354164.980387.736K2132.548132.883119.075103.890K3135.034168.398159.306118.866R14.88181.94449.95261.091 表3 方差分析表来源离差平方和自由度平均离差平方和F值显著性A（误差）42.363221.181B1125.749256
8、2.87526.574P0.05D675.8812337.94115.955P0.05注：F0.05(2,2)=19结果分析： 表2，级差分析最佳方案为：A3 B3 C3 D1；因素重要性由高到低为： BDCA。即最佳方案为：三七粉：蒸馏水=1：40；提取次数3次；每次提取时间为3h；醇沉浓度为乙醇浓度达2/3。表3，方差分析：A因素离差平方和最小代替误差离差平方和4，B因素差异性显著（P0.05，无统计学意义）。4.讨论多糖类化合物由于其独特功能和较低的毒性,在抗衰老、抗病毒和肿瘤治疗、糖尿病治疗等方面有良好的应用前景。另外,多糖可以改善食品的食用品质、加工特性和外观特性,可用于抑制脂质氧化
9、,稳定酸性饮料,也可作为乳化剂等,在食品中的用途十分广泛。从而,多糖的提取变得尤为关键,是其广泛应用的基础5。本实验所筛选的最佳工艺（三七粉：蒸馏水=1：40；提取次数3次；提取时间为3h/次；醇沉的乙醇浓度为：2/3），解决了相关报道中提取因素水平不明了，步骤繁琐的问题，符合传统中草药煎煮理论，进行的验证试验结果较稳定。与其他研究者的试验结果比较：设备普通，方法简单，步骤少，消耗材料和能源较低，提取结果理想。乙醇沉淀是水体醇沉法提取中药多糖中的重要环节，对于不同中药以及不同部位的多糖提取需要考虑具体情况适用不同浓度的乙醇6，实验结果证实只有在醇沉浓度适当的情况下提取三七多糖才能得到较理想结果
10、。参考文献 ：1 Zhang C G, Huang Q Q. Effect of Panax notoginseng polysaccharide on cellular immune function of rats trauma-tized J.Chin J Trauma ,2005, 21(9):771-772.2 徐大伦,欧昌荣,黄晓春,等.浒苔多糖脱蛋白方法的研究.水产科学J,2005,24(5):26-273 盛卸晃,王 健,郭建军等.三七多糖的分离纯化及理化性质研究J.中草药,2007,38(7)：987-989.4 梅长林 周家良.实用统计方法M.科学出版社2006：224-2405 尹艳,高文宏,于淑娟.多糖提取技术的研究进展J.食品工业科技,2007（02）：248-2506 季宇彬.中药多糖的化学与药理M.人民卫生出版社2006版：
