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1、酵母蔗糖酶酵母蔗糖酶KKm m值的测定 值的测定 目的与要求 目的与要求 学习米氏常数的测定原理及方法 学习米氏常数的测定原理及方法 认识底物浓度对酶促反应速度的影响 认识底物浓度对酶促反应速度的影响 实验原理实验原理 qq影响酶促反应速度的因素有 底物浓度 酶的浓影响酶促反应速度的因素有 底物浓度 酶的浓 度 度 pHpH值 环境温度等 当环境温度 值 环境温度等 当环境温度 pHpH值和酶浓值和酶浓 度等条件相对恒定时 酶促反应的初速度度等条件相对恒定时 酶促反应的初速度v v随底物浓随底物浓 度增大而增大 直到酶全部被底物所饱和时达到最度增大而增大 直到酶全部被底物所饱和时达到最 大速度
2、大速度V Vmax max 反应初速度与底物浓度间的关系可用反应初速度与底物浓度间的关系可用 米米 曼氏方程式表示 将两边取倒数 采用双倒数作曼氏方程式表示 将两边取倒数 采用双倒数作 图法可求得图法可求得KKm m值 值 操作步骤操作步骤 q 干净大试管5只编号 按 P45表加入试剂 混匀 37 C15min q 取出后加入1mol L NaOH 0 5ml 摇匀终止反应 q 按 P45表加入试剂 混匀 沸水浴5min 流水冷却 稀释到12 5ml q 540nm测 OD值 结果与计算 结果与计算 在横坐标上查得酵母蔗糖酶的在横坐标上查得酵母蔗糖酶的KKm m值 值 注意事项 注意事项 qq 微量移液器的使用 微量移液器的使用 qq 血糖管的使用 血糖管的使用 qq 水浴温度 时间要精确 水浴温度 时间要精确 qq 煮沸时注意安全 煮沸时注意安全
