生物样品内中药制剂化学]成分测定

《生物样品内中药制剂化学]成分测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物样品内中药制剂化学]成分测定（85页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、第八章 体内中药制剂分析 大纲要求 v了解体内中药制剂分析的性质 意义和任务 v熟悉中药制剂在生物体内的存在状态与生物 转化 生物样品内药物分析方法 v掌握体内中药制剂的制备方法及注意事项 第一节 概述 一 体内中药制剂分析的性质 二 体内中药制剂分析的目的意义 三 体内中药制剂分析的任务 四 体内中药制剂分析的对象 五 体内中药中药制剂分析的特点 第一节 概述 一 体内中药制剂分析的性质 v体内中药制剂分析又称体液药物分析 生物 药物分析 是随着临床药学 临床药理学的发 展和需要而建立起来的一门新兴学科 概述 二 体内中药制剂分析的目的意义 研究及了解中药制剂在生物样品内的数量和质 量变化

2、获得药物代谢动力学的各种参数 药物在 生物样品内的生物转化 代谢的方式和途径等信息 从而为药品生产 临床医疗 实验研究等方面对 所研究药物作出估计与评价 第一节 概述 三 体内中药制剂分析的主要任务 1 分析方法学的研究 2 生物体内药物浓度检测中的应用 3 药代动力学研究中的应用 4 生物利用度的评价 第一节 概述 四 体内中药制剂分析的对象 受试者 大鼠 兔 狗 猴 人 分析对象 体液 器官 组织 排泄物等 分析的目标 母体药物 代谢产物 第一节 概述 五 体内中药制剂分析的特点 掌握 1 干扰杂质多 内源性物质 如蛋白质 多肽 脂肪酸 色素 酶等 代谢物 共存药物等 2 样品量少 生物体

3、采样量受限 3 药物浓度低 第二节 药物在生物体内的存在状 态与生物转化 一 药物在生物体内的存在状态 二 药物代谢研究的意义 第二节 药物在生物体内的存在状 态与生物转化 一 存在状态 l游离药物 l结合药物 蛋白质 结合不能透过细胞膜 可逆 第二节 药物在生物体内的存在状 态与生物转化 二 药物代谢研究的意义 l了解药物进入生物体后的状态 与生物系统的相互作用 保证临床用药安全 有效 l研究药物的代谢途径 酶催化机制 结构与药理作用的 关系 对避免药物的毒性及寻找新药具一定意义 l研究药物相互作用 毒性作用机制 使临床用药更加安 全 合理 第二节 药物在生物体内的存在状 态与生物转化 1

4、药物代谢的器官 l肝脏 肝微粒体中存在的药物代谢酶 l另外 肾 脾 肺 肠粘膜 胎盘等组织 第二节 药物在生物体内的存在状 态与生物转化 2 药物代谢的过程 l第一阶段 药物在以细胞色素P450为核心的混 合功能氧化酶等催化下发生氧化 还原 水解等反 应 增加极性基团 水溶性增强 活性改变 l第二阶段 药物与代谢物在尿苷二磷酸葡萄糖醛 酸基转移酶等催化下 与葡萄糖醛酸 硫酸盐等结 合 极性进一步增大 便于从尿中排泄 第二节 药物在生物体内的存在状 态与生物转化 v举例 l川芎嗪 主要是氧化代谢 第三节 生物样品的制备 一 选择体液或组织供体内药物分析的一般原则 二 常用生物样品的种类 特点与采

5、集 三 样本的代表性 四 样品的储存 五 样品的预处理 第三节 生物样品的制备 一 选择体液或组织供体内药物分析的一般原则 1 能够反映出浓度与药效之间的关系 2 易于获得 3 便于处理 适合分析 4 根据不同检测目的与要求进行选取 第三节 生物样品的制备 二 常用生物样品的种类 特点与采集 l按照生物样品的性质 生物样品可分为 均匀样品 血液 尿液 唾液 胆汁 脑 脊液 淋巴液等 非均匀样品 心 肝 脾 肺 脑等器官 组织 第三节 生物样品的制备 二 常用生物样品的种类 特点与采集 一 血样 二 尿液 三 唾液 四 胆汁 五 脏器组织 第三节 生物样品的制备 一 血样 1 采血方式及评价 多

6、用静脉采血 注意 将注射器内取好的血液转入试管或其他容器时 应注意勿用力压出 而应取下针头后轻推 以免血球破裂 使血浆 或血清 带红色 第三节 生物样品的制备 2 全血 血浆和血清样品的制备 血液 自然凝结 离心 上层 血清 40 下层 血细胞 加抗凝剂 离心 上层 血浆 50 下层 血细胞 全血 第三节 生物样品的制备 2 1抗凝剂的选择 肝素最常用 一般不会干扰药物分析及导 致药物发生化学变化 枸橼酸盐 乙二胺四乙酸 EDTA 能 与血中Ca2 结合 可能引起被测组分发生化 学变化或干扰药物的测定 肝素是一种含硫酸的粘多糖 常用其钠盐 钾盐 能阻止凝血酶原转化为凝血酶 抑制纤维蛋白原形成纤

7、维蛋白 一般1ml血液需要用肝素0 1 0 2mg 血液放入有抗凝剂的试管后轻轻旋摇容器 但勿太猛烈 第三节 生物样品的制备 3 全血 血浆和血清样品的应用 3 1血清和血浆可任意选用 测定方法可通用 但血 浆量多应用方便 若血浆内抗凝剂对药物分析有影 响 则应使用血清样品 血药浓度均指血浆或血清中的药物总浓度 游离 的和与血浆蛋白结合的总浓度 微透析技术除外 第三节 生物样品的制备 3 2 全血 不能很好反映药物的药理作用强度 不 能作为作用部位药浓的可靠指标 血细胞中的药物 暂时仅作为 储库 失去药理作用 第三节 生物样品的制备 vv血样的特点 血样的特点 vv缺点 损伤性采样方式 样品量

8、受限 抽缺点 损伤性采样方式 样品量受限 抽 血比较麻烦血比较麻烦 vv优点 可用于药物动力学 生物利用度 优点 可用于药物动力学 生物利用度 临床治疗药物监测临床治疗药物监测 第三节 生物样品的制备 二 唾液 可用作药物浓度检测及药代动力学研究 唾液中药物浓度通常与血浆浓度相关 比血浆药物浓度 低 收集方法 漱口后15min收集 不同唾液腺分泌不同的唾液 成分不尽相同 个体差异大 第三节 生物样品的制备 三 尿液 用于药物剂量回收 药物肾清除率及代谢类型等研究 体内中药清除主要是通过尿液排出 药物以原型 代谢 物 缀合物形式排出 收集方法 规定的时间内采集尿液 第三节 生物样品的制备 1 特

9、点 1 1 尿中药物浓度改变不直接反映血药浓度 1 2 尿液药物浓度较高 收集量大 但浓度变化较大 要 测定一定时间内尿中药物总量 需要记录排出的尿液体积 及尿药浓度 1 3 短时间内不能多次取样 排尿时间较难掌握及不易采 集完全等缺点 第三节 生物样品的制备 四 胆汁 阐明药物的胆汁排泄率及药物的体内动态特性 方法 胆汁引流 规定时间内收集胆汁 计算累积排泄量 第三节 生物样品的制备 五 脏器组织 用于研究成分在各器官 组织的分布 积蓄或 代谢研究 脏器组织可与成分形成强烈结合 分离分析前 需预先制成1 5或1 10匀浆 提高溶剂抽提率 降低组织空白值 避免乳化 第三节 生物样品的制备 三

10、样本的代表性 1 取样条件标准化 摄取标准膳食 控制饮水量等 2 取样时间及其间隔 一般在吸收相至少需要2 3个采样点 对于吸收快的血管外给药的药物 应尽量避免第一个点是峰浓度 Cmax 在Cmax附近至少需要3个采样点 消除相需要4 6个采样点 整个采样时间至少应持续到3 5个半衰期 或持续到血药浓度为Cmax的1 10 1 20 冷藏或冷冻冷藏或冷冻 1 1 血浆和血清 采血后及时分离 血浆和血清 采血后及时分离 2h2h 短期 短期4 4 长 长 期期 20 20 2 2 尿样 应立即测定 否则需加防腐剂置冰箱保存 尿样 应立即测定 否则需加防腐剂置冰箱保存 3 3 唾液 在 唾液 在4

11、 4 下保存 往往需要在取样时测定下保存 往往需要在取样时测定pHpH值值 4 4 生物样品总的原则 临时解冻 解冻的样品一次测 生物样品总的原则 临时解冻 解冻的样品一次测 完 不能反复完 不能反复冷冻冷冻 解冻解冻 冷冻冷冻 FTC FTC 样品应以小体 样品应以小体 积分装存放 积分装存放 第三节 生物样品的制备 第三节 生物样品的制备 五 样品的预处理 掌握 目的目的 1 1 药物从缀合物中释放 测定总浓度药物从缀合物中释放 测定总浓度 2 2 纯化 富集药物纯化 富集药物 3 3 适应和满足测定方法要求的灵敏度适应和满足测定方法要求的灵敏度 4 4 防止对分析仪器的污染和劣化防止对分

12、析仪器的污染和劣化 第三节 生物样品的制备 五 样品的预处理 掌握 一 提取方法的选择依据 二 药物的提取 三 药物的分离与净化 四 待测组分的富集 五 衍生物处理 第三节 生物样品的制备 一 提取方法的选择依据 药物的理化性质 药物的浓度范围 药物测定的目的 生物样品的类型 样品处理与分析技术的关系 第三节 生物样品的制备 二 药物的提取 1 蛋白质处理 干扰分析 污染测定条件 2 缀合物水解 测定母体药物 3 水溶性强的药物 冷冻干燥 冻干后进 行液 固萃取 第三节 生物样品的制备 1 蛋白质处理 v加入与水相混溶的有机溶剂 有机溶剂使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化 沉淀剂 乙腈 1

13、 5倍 甲醇 2倍 乙醇 丙酮 很难挥干浓集 超速离心 超速离心 10000r min10000r min 去除去除9090 蛋白 蛋白 加保护柱 第三节 生物样品的制备 1 蛋白质处理 v加入中性盐 蛋白质脱水沉淀 沉淀剂 硫酸铵 硫酸钠 镁盐 枸橼酸盐 1 1 2 902 90 去除 去除 超速离心 超速离心 10000r min10000r min 第三节 生物样品的制备 1 蛋白质处理 加入强酸 常用溶剂 与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀 常用溶剂 与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀 1010 三氯醋酸 三氯醋酸 6 6 高氯酸 硫酸 钨酸混合液体积比 高氯酸 硫酸 钨酸混合液体积比 1 1

14、 0 6 900 6 90 去除 去除 方法 超速离心 方法 超速离心 10000r min10000r min 第三节 生物样品的制备 1 蛋白质处理 v沸水浴 v超滤 透析法 游离药物浓度 第三节 生物样品的制备 2 缀合物水解 含义 中药制剂待测成分或其代谢物与体内的内 源性物质结合生成的产物 特点 缀合物极性较母体药物大 亲水性强 不 易被有机溶剂提取 需水解处理 第三节 生物样品的制备 2 缀合物水解 水解方法 酸水解 酶水解 葡萄糖醛酸 苷酶 芳基硫酸酯酶 溶解剂 趋势 直接测定缀合物的量 了解药物代 谢情况 第三节 生物样品的制备 3 冷冻干燥 特点 适合于一次不能完成分析的大批

15、量生物 样品 水溶性样品 挥发性样品和对热不稳定 的样品 方法 干冰 丙酮浴 用液氮 冷冻干燥仪 第三节 生物样品的制备 三 药物的分离和净化 1 液 液萃取 liquid liquid extraction LLE 2 液 固萃取 liquid solid extraction LSE 第三节 生物样品的制备 1 液 液萃取 liquid liquid extraction LLE 大多数药物都是脂溶性的 内源性物质基 本上都是水溶性的 当用有机溶剂萃取时 药物被萃取出来而内源性物质被除去 因此 采用有机溶剂萃取法能够达到纯化的目的 第三节 生物样品的制备 1 液 液萃取 liquid li

16、quid extraction LLE vv关键要考虑三个方面的因素 关键要考虑三个方面的因素 vv 1 1 有机溶剂的特性 有机溶剂的特性 vv 2 2 有机溶剂相和水相的体积 有机溶剂相和水相的体积 vv 3 3 水相的 水相的pHpH值值 第三节 生物样品的制备 1 液 液萃取 liquid liquid extraction LLE 萃取率应不低于50 影响提取率的因素 水相的PH值 提取溶剂 低沸点 低毒性 乙酸乙酯 无水 Na2SO4脱水 离子强度 加入氯化钠 有利于提取 减少乳化 1 液 液萃取 liquid liquid extraction LLE 血浆或其他生物样品血浆或其他生物样品加入萃取溶剂加入萃取溶剂 分取有机层分取有机层 必要时调必要时调pHpH值值 减压氮气吹干减压氮气吹干流动相溶解后进样分析流动相溶解后进样分析 1 液 液萃取 liquid liquid extraction LLE 消除LLE中产生的乳化现象 1 提取前在水相中加入适量的固体食盐 2 经适当转速离心消除已产生的轻微乳化 3 置于冰箱中快速冻凝破坏乳化层 再融 化后离心来消除已产生的严重