NCBI_blast_使用教程

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1、生物序列的相似性搜索 blast简介及其应用 2005年3月 2 序列数据的保存格式与相关数据库资源在数据库中进行序列相似性搜索多序列比对进化树构建与分子进化分析Motif的寻找与序列的模式识别RNA二级结构 蛋白质二 三级结构的预测基因芯片的数据分析 生物信息学常见的应用与软件 3 内容提要 1 基本概念相似性 同源性2 Blast介绍Blast资源和相关问题3 Blast的应用网络版 单机版4 深入了解Blast 改进程序 算法基础 5 其他的序列相似性搜索工具 fasta 4 生物序列的相似性 相似性 similarity 是指一种很直接的数量关系 比如部分相同或相似的百分比或其它一些合

2、适的度量 比如说 A序列和B序列的相似性是80 或者4 5 这是个量化的关系 当然可进行自身局部比较 5 同源性 homology 指从一些数据中推断出的两个基因或蛋白质序列具而共同祖先的结论 属于质的判断 就是说A和B的关系上 只有是同源序列 或者非同源序列两种关系 而说A和B的同源性为80 都是不科学的 生物序列的同源性 6 相似性和同源性关系 序列的相似性和序列的同源性有一定的关系 一般来说序列间的相似性越高的话 它们是同源序列的可能性就更高 所以经常可以通过序列的相似性来推测序列是否同源 正因为存在这样的关系 很多时候对序列的相似性和同源性就没有做很明显的区分 造成经常等价混用两个名词

3、 所以有出现A序列和B序列的同源性为80 一说 7 序列相似性比较和序列同源性分析 序列相似性比较 就是将待研究序列与DNA或蛋白质序列库进行比较 用于确定该序列的生物属性 也就是找出与此序列相似的已知序列是什么 完成这一工作只需要使用两两序列比较算法 常用的程序包有BLAST FASTA等 序列同源性分析 是将待研究序列加入到一组与之同源 但来自不同物种的序列中进行多序列同时比较 以确定该序列与其它序列间的同源性大小 这是理论分析方法中最关键的一步 完成这一工作必须使用多序列比较算法 常用的程序包有CLUSTAL等 8 Blast简介 一 BLAST是由美国国立生物技术信息中心 NCBI 开

4、发的一个基于序列相似性的数据库搜索程序 BLAST是 局部相似性基本查询工具 BasicLocalAlignmentSearchTool 的缩写 9 Blast是一个序列相似性搜索的程序包 其中包含了很多个独立的程序 这些程序是根据查询的对象和数据库的不同来定义的 比如说查询的序列为核酸 查询数据库亦为核酸序列数据库 那么就应该选择blastn程序 下表列出了主要的blast程序 Blast简介 二 10 主要的blast程序 11 Blast相关的问题 怎么获得blast服务 怎么使用的问题 为什么使用blast 可以获得什么样的信息 其他问题 实际使用时选择哪种方式 网络 本地化 参数的选

5、择 结果的解释 12 Blast资源 1 NCBI主站点 http www ncbi nlm nih gov BLAST 网络版 ftp ftp ncbi nlm nih gov blast 单机版 2 其他站点 13 Blast结果给出的信息 Blast结果会列出跟查询序列相似性比较高 符合限定要求的序列结果 根据这些结果可以获取以下一些信息 1 查询序列可能具有某种功能2 查询序列可能是来源于某个物种3 查询序列可能是某种功能基因的同源基因 这些信息都可以应用到后续分析中 14 两种版本的Blast比较 一 网络版本包括NCBI在内的很多网站都提供了在线的blast服务 这也是我们最经常用

6、到的blast服务 网络版本的blast服务就有方便 容易操作 数据库同步更新等优点 但是缺点是不利于操作大批量的数据 同时也不能自己定义搜索的数据库 15 单机版单机版的blast可以通过NCBI的ftp站点获得 有适合不同平台的版本 包括linux dos等 获得程序的同时必须获取相应的数据库才能在本地进行blast分析 单机版的优点是可以处理大批的数据 可以自己定义数据库 但是需要耗费本地机的大量资源 此外操作也没有网络版直观 方便 需要一定的计算机操作水平 两种版本的Blast比较 二 16 本地WEB版的Blast 在NCBI的FTP上 在blast程序的目录下 还提供了一种供用户在

7、自己的服务器上建立Blast网页服务的软件包 wwwblast 使用该软件包 用户可以建立一个简易的进行Blast运算的网站供实验室人员使用 用于搜索的数据库同样可以灵活的定义 17 Blast程序评价序列相似性的两个数据 Score 使用打分矩阵对匹配的片段进行打分 这是对各对氨基酸残基 或碱基 打分求和的结果 一般来说 匹配片段越长 相似性越高则Score值越大 Evalue 在相同长度的情况下 两个氨基酸残基 或碱基 随机排列的序列进行打分 得到上述Score值的概率的大小 E值越小表示随机情况下得到该Score值的可能性越低 18 NCBI提供的Blast服务 登陆ncbi的blast

8、主页 核酸序列 蛋白序列 翻译序列 底下有其他一些针对特殊数据库的和查看以往的比对结果等 19 Blast任务提交表单 一 1 序列信息部分 填入查询 query 的序列 序列范围 默认全部 选择搜索数据库 如果接受其他参数默认设置 点击开始搜索 20 Blast任务提交表单 二 设置搜索的范围 entrez关键词 或者选择特定物种 2 设置各种参数部分 一些过滤选项 包括简单重复序列 人类基因组中的重复序列等 E值上限 窗口大小 如果你对blast的命令行选项熟悉的话 可以在这里加入更多的参数 21 Blast任务提交表单 三 3 设置结果输出显示格式 选择需要显示的选项以及显示的文件格式

9、显示数目 Alignment的显示方式 筛选结果 E值范围 其他一些显示格式参数 点击开始搜索 22 提交任务 返回查询号 requestid 可以修改显示结果格式 修改完显示格式后点击进入结果界面 23 结果页面 一 图形示意结果 24 结果页面 二 目标序列描述部分 带有genbank的链接 点击可以进入相应的genbank序列 匹配情况 分值 e值 25 结果页面 三 详细的比对上的序列的排列情况 26 一个具体的例子 blastp 假设以下为一未知蛋白序列 query seqMSDNGPQSNQRSAPRITFGGPTDSTDNNQNGGRNGARPKQRRPQGLPNNTASWFTA

10、LTQHGKEELRFPRGQGVPINTNSGPDDQIGYYRRATRRVRGGDGKMKELSPRWYFYYLGTGPEASLPYGANKEGIVWVATEGALNTPKDHIGTRNPNNNAATVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSSSRSRGNSRNSTPGSSRGNSPARMASGGGETALALLLLDRLNQLESKVSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKQYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQDLIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYHGAIKLDDKDPQFKDNVILLNK

11、HIDAYKTFPPTEPKKDKKKKTDEAQPLPQRQKKQPTVTLLPAADMDDFSRQLQNSMSGASADSTQA我们通过blast搜索来获取一些这个序列的信息 27 具体步骤 1 登陆blast主页http www ncbi nlm nih gov BLAST 2 根据数据类型 选择合适的程序3 填写表单信息4 提交任务5 查看和分析结果 28 分析过程 一 1 登陆ncbi的blast主页 2 选择程序 因为查询序列是蛋白序列可以选择blastp 点击进入 也可以选择tblastn 作为演示 我们这里选blastp 29 分析过程 二 3 填入序列 copy paste

12、Fasta格式 或者纯序列 4 选择搜索区域 这里我们要搜索整个序列 不填 5 选择搜索数据库 这里我们选nr 非冗余的蛋白序列库 是否搜索保守区域数据库 cdd 蛋白序列搜索才有 我们选上 30 分析过程 三 6 限制条件 我们限制在病毒里面找 7 其他选项保持默认值 打分矩阵 31 分析过程 四 8 输出格式选项保持默认值 9 点击开始搜索 32 分析过程 五 10 查询序列的一些相关信息 在cdd库里面找到两个保守区域 点击可以进入 33 分析过程 六 图形结果 34 分析过程 七 匹配序列列表 35 分析过程 八 具体匹配情况 36 为什么使用单机版的Blast 1 特殊的数据库要求

13、2 涉及序列的隐私与价值 3 批量处理4 其他原因 单机版的Blast使用 一 37 单机版Blast的基本操作过程1 下载单机版的Blast程序ftp ftp ncbi nlm nih gov blast executables 目录下 下载对应的操作系统版本 2 解压程序包 blast 2 28 ia32 linux tar gz 命令是 tarzxvfblast 2 28 ia32 linux tar gz 单机版的Blast使用 二 38 下载正确的Blast程序包 blast 在本地运行的blast程序包wwwblast 在本地服务器建立blast服务的网站netblast blas

14、t的客户端程序 直接链接至NCBI的BLAST服务器 使用BLAST服务 不需浏览器 39 下载正确的Blast程序包 Blast程序包的名字上还包括了该程序包运行的硬件和操作系统环境 硬件环境 CPU 操作系统 sparc powerPC ia32 ia64 amd64 mips alpha linux macox solaris irix aix freebsd win32 hpux 40 3 获取Blast数据库a 直接从ncbi下载ftp ftp ncbi nlm nih gov blast db b 用Blast程序包提供的formatdb工具自己格式化序列数据成数据库 假设有一序列

15、数据 sequence fa 多序列 fasta格式 欲自己做成Blast数据库 典型的命令如下 单机版的Blast使用 三 41 核酸序列 formatdb isequence fa pF oT F ndb name蛋白序列 formatdb isequence fa pT oT F ndb name 单机版的Blast使用 四 42 4 执行Blast比对获得了单机版的Blast程序 解压开以后 如果有了相应的数据库 db 那么就可以开始执行Blast分析了 单机版的Blast程序包 把基本的blast分析 包括blastn blastp blastx等都整合到了blastall一个程序里

16、面 单机版的Blast使用 五 43 以下是一个典型的blastn分析命令 待分析序列seq fa 数据库nt db blastall pblastn iseq fa dnt db w7 e10 o程序名输入数据库窗口e值输出seq blastn out该命令的意思是 对seq fa文件中的核酸序列对nt db数据库执行blastn搜索 窗口大小是7 e值限制是10 输出的结果保存到文件seq blastn out中 单机版的Blast使用 六 44 5 Blastall的常用参数 p程序名应该是blastn blastp blastx tblastn tblastx中的一个 d数据库名称 默认nr i查询序列文件 默认stdin eE值限制 默认10 o结果输出文件 默认stdout F过滤选项 默认T a选择进行运算的CPU个数 单机版的Blast使用 七 45 进一步深入Blast 1 blast22 Megablast3 Psi blast4 其他 rpsblast blastclust等 46 Blast2 两个序列的blast比对 给定两个序列 相互进行blast比对 能快