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1、2 2 2动物细胞融合与单克隆抗体 太原市外国语学校 赵成艺 为什么 甲流 康复者或接种疫苗1月以上者的血浆会成为救治重症 甲流 患者的妙药 血浆中的抗体会与 甲流 病毒反应 从而将病毒消灭 获得抗体的传统方法 把某种抗原反复注射到动物体内 然后从动物血清中分离出所需的抗体 缺点 人们发现 B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性抗体 但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体 怎样才能获得大量的单一性抗体呢 产量低 纯度低 特异性差 怎样才能获得单一性抗体 大量克隆单一的B淋巴细胞 其寿命仅有几天 无法长期体外培养 动物细胞培养技术 骨髓瘤细胞 无限增殖 杂交瘤细胞 产生抗体无限增殖 细胞融合
2、 G Kohler C Milstein 英国科学家米尔斯坦和科勒于1975年设计和实践了这个想法 并获得成功 摘得1984年诺贝尔生理及医学奖 一 动物细胞融合技术 1 概念 动物细胞融合也称细胞杂交 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 称为杂交细胞 2 动物细胞融合基本原理 细胞膜的流动性 3 诱导方式 物理法 化学法 生物法 灭活的病毒 电激 振动 离心 聚乙二醇 PEG 如 仙台病毒 为什么要用灭活的病毒 仙台病毒 丧失感染活性 保留融合活性 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞融合 形成杂种细胞 4 植物
3、体细胞杂交和动物细胞融合的比较 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理 离心 振荡 电刺激 化学 聚乙二醇 物理 化学方法 同左 制备单克隆抗体 灭活的病毒 二 单克隆抗体的制备 用抗原免疫小鼠 骨髓瘤细胞的培养 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种细胞 由于培养基中缺乏相应的营养物 骨髓瘤细胞死亡 B淋巴细胞培养几天后死亡 杂交瘤细胞 置于选择培养基上培养 多孔细胞培养板 阳性克隆的筛选和克隆化培养 用培养液稀释 注射到小鼠体内 体外培养 由单个杂交瘤细胞通过克隆 所产生的化学性质单一 特异性强的抗体 单克隆抗体 整个制备过程
4、为何要经过两次筛选 第一次筛选 第二次筛选 用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞 筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞 三 单克隆抗体的特点和应用 生物导弹 单克隆抗体 药物 诊断试剂 用于治疗疾病 1 特点 特异性强 灵敏度高 产量高 2 应用 用于运载药物 优点 准确 高效 快速 练习 1 动物细胞融合技术最重要的用途是 A 克服远源杂交不亲和B 制备单克隆抗体C 培育新物种D 生产杂种细胞 B 2 单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 A B淋巴细胞B T淋巴细胞C 骨髓瘤细胞D 杂交瘤细胞 D 3 单克隆抗体制备过程中 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后 要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞 在这种
5、培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D C 4 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法 设计的生产破伤风杆菌的实验方案 制备单克隆抗体 不能 没有将抗原注入小鼠体内 无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞 1 该实验方案的目的是 2 该方案能达到预期效果吗 为什么 3 A是从小鼠的脾脏中取得 该细胞能够产生 4 图中B为 过程 常用 作为诱导剂 该细胞继承 的遗传特性 既能 又能 5 C过程指细胞培养 该过程包括 培养和 培养两个阶段 B淋巴细胞 抗体 细胞融合 灭活的病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 BBBB瘤瘤瘤瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径 其中D途径能被氨基嘌呤阻断 人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径 但一般不分裂增殖 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径 但能不断分裂增殖 将这两种细胞在试管中混合 加PEG促融 在筛选培养基上筛选获得杂种细胞 多孔细胞培养板
