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1、.专业.专注.生理学实验手册EXPERIMENT MANUAL FOR PHYSIOLOGY专业及班级： 学 号： 姓 名： 组 别： 天津医科大学临床医学院生理学实验室实验一 标本制备及BL-410生物机能实验系统的使用Experiment 1 Preparation of specimens and the use of BL-410 biological function of experimental system同组人姓名（the name of the students in the same group） 。日期（date）： 年 月 日【实验目的】掌握制备坐骨神经-腓肠肌标本的
2、操作技术，为此后有关的神经肌肉实验打下基础；熟悉BL-410生物机能实验系统的使用。【实验原理】蛙或两栖类动物的一些基本生命活动及生理功能与温血动物近似，而且其离体组织需要的生活条件非常简单，易于控制和掌握。因此在生理学实验中，坐骨神经-腓肠肌标本是研究神经肌肉生理最常用的对象，经常用来研究神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律、肌肉收缩的特点、兴奋性的周期性变化等。【实验器材和药品】 蛙类手术器械一套（金属探针1根，粗剪刀、眼科剪刀各1把，圆头镊子、眼科镊子各1把，玻璃分针2根），蛙板和玻璃板各1块，培养皿，滴管，废物缸、锌铜弓，丝线，棉花；任氏液。【实验对象】蟾蜍或蛙。【实验方法和步骤】1破坏
3、脑和脊髓（常用的有三种方法）(1) 俯式捣毁法：是最常用的方法。以左手持蟾蜍，将其腹面朝向手心，前肢夹在食指和中指之间固定，后肢夹在无名指和小指之间固定，并用拇指按压蟾蜍头部使之下俯3040度角；然后右手持金属探针沿蟾蜍头部的中线下划，可触及一凹陷处即为枕骨大孔。将探针从枕骨大孔垂直刺入11.5mm，再向前刺入颅腔，左右搅动（可感觉到探针与颅骨壁的碰击），破坏脑组织；再将探针退回至进针处，但不拔出而是转向后方刺入椎管，破坏脊髓。(2) 仰式捣毁法：将蟾蜍仰卧于蛙板上，拉开下颌，右手持探针在颅底两眼之间向前下刺入颅腔，用探针在颅腔内向四周捣毁脑组织，然后将探针退至粘膜下，针尖向后平行刺入椎管内以
4、破坏脊髓。(3) 横断脊柱后捣毁法：左手持蟾蜍，右手持粗剪刀，在两腋窝稍下横断脊柱，然后在脊柱呈白色的脊髓断面处，向上插入探针破坏脑，再向下插入探针破坏脊髓。以上方法破坏脑和脊髓成功后，蟾蜍出现四肢（尤其是后肢）瘫软，并常有尿失禁现象。Schematics for handing of toad2剪去躯干上部及内脏 用粗剪刀在两侧腋部稍下（或在骶髂关节以上1.5 2cm处）剪断脊柱，用左手握住蟾蜍后肢，拇指按压骶骨，使蟾蜍头部及内脏自然下垂；避开腰骶神经丛后，右手用粗剪刀沿脊柱两侧剪开腹壁，在耻骨联合处将躯干上部及内脏剪掉，弃入废物缸内。3剥皮 左手持大镊子夹住脊柱断端 (小心勿伤神经)，右手
5、捏住脊柱断端的皮肤边缘，逐步向下剥去全部后肢皮肤。将剥好的标本放置在盛有任氏液的培养皿中，或置于洁净的玻璃板上，滴加任氏液备用。然后洗手并清洗用过的手术器械。4分离左右腿 用圆头镊子夹住脊柱并提起，避开坐骨神经，用粗剪刀剪去向上突出的骶骨，沿脊柱正中线将脊柱从上向下分成两半，再从耻骨联合中央剪开（注意：剪开时应避免剪刀走“S”形，以保证坐骨神经的完整），将已分离的两腿浸入任氏液备用。亦可在游离大腿部位的坐骨神经后再分离两腿。5游离坐骨神经 取蟾蜍腿一条，用玻璃分针在大腿背面内侧沿坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间）分离肌肉，暴露坐骨神经。向上将梨状肌及其附近的结缔组织剪断，然后用玻璃分针沿脊柱自
6、上而下轻柔游离坐骨神经腹腔部（坐骨神经呈亮白色束状），用眼科剪刀剪断神经的所有分支，在近脊柱处穿线结扎，从脊柱根部将坐骨神经剪断。也可以不结扎、不剪断神经，而保留一小块与神经相连的脊柱（约0.5cm0.5cm左右），供握持神经用。6游离股骨 将游离的坐骨神经轻轻搭在腓肠肌上，切断膝关节周围的大腿部肌肉，把股骨刮干净，然后剪去股骨小头并保留余下的股骨（约11.5cm），以便在固定神经肌肉标本时使用。7完成标本 用眼科镊子（或小剪刀）在跟健下方穿一洞，向上游离腓肠肌至膝关节处。穿线结扎腓肠肌跟健，左手提线，在结扎线远端剪断跟健。将膝关节以下的小腿其余部分全部剪去。以上过程应注意避免损伤神经，并随时
7、滴加任氏液。至此即完成一个坐骨神经-腓肠肌标本的制备。8检查标本的兴奋性：用被任氏液浸湿的锌铜弓接触坐骨神经，如腓肠肌迅速收缩，则表示标本的兴奋性良好，可供有关神经肌肉生理实验用。【实验要求与注意事项】1熟悉蟾蜍手术器械的使用方法，了解蟾蜍腿部的局部解剖及坐骨神经的走行。2避免损伤蟾蜍背部的腺体（尤其是眼后的大腺体），防止其分泌物溅入眼内或污染标本。3勿剪破蟾蜍内脏，并及时清洗手及用过的器械；已剥去皮肤的组织应避免接触蟾蜍皮肤或其他不洁物；以防标本被污染。4游离神经、肌肉时不可过度牵拉，应避免用手指、金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分，更不能用自来水冲洗标本。5制备过程中应经常向标本上滴任氏
8、液，防止神经因干燥而失去正常兴奋性。标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟，使标本兴奋性稳定。6移动制备好的标本时，先将游离的神经搭在腓肠肌上，再用双手分别提拿跟键和股骨断端，防止神经受力过重。【写出下列器械的用途】 1. 粗剪刀(scissors) 2.手术剪（surgical scissors）3.眼科剪（ophthalmic scissors）4.手术镊（surgical forceps）5.眼科镊（ophthalmic forceps）6.探针（metal probe）7.玻璃分针（glass disselting tool）8.锌铜弓（bimetal electrode）9.蛙钉（fro
9、g nail）10.双极电极（stimulating electrode）【BL-410生物机能实验系统的使用】 1. BL-410生物机能实验系统是生理学实验中常用到生物信号记录仪器，其工作的基本原理是：首先将原始的生物机能信号进行放大、滤波等处理，然后对处理的信号通过模数转换进行数字化并将数字化后的 信号传输到计算机内部，计算机通过生物机能实验系统专用的软件对接收到的信号进行实时处理，并进行生物机能信号的波形显示和存储。 2. BL-410生物机能实验系统有多种配件，其中，生理实验中常用到的换能器有 和 。前者的原理是将生物张力信号转换成电信号输出；后者的原理是将压力的变化转化成电阻的变化
10、产生信号输出。 3. 软件的启动，只需双击Windows操作系统桌面上的“ ”图标即可启动BL-NewCentury程序。【实验结果】 用铅笔画出蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的示意图。 要求：（1）形象、美观。 （2）各个部位比例合适。 （3）标注出各个部位的名称。【回答下列问题】 1. 损毁脑和脊髓后的蟾蜍有何表现？若破坏脊髓不彻底，蟾蜍的四肢会有什么表现？为什么？2. 为什么在本实验中应经常给标本滴加任氏液？实验二 刺激频率与肌肉收缩的关系Experiment 2 The relationship between Stimulation frequency and muscle contrac
11、tion同组人姓名（the name of the students in the same group） 。日期（date）： 年 月 日【实验目的】观察有效电刺激频率与肌肉反应形式的关系【实验原理】单收缩：当给肌肉一个阈上剌激时，肌肉即发生一次收缩反应，称为单收缩。单收缩的全过程可分为潜伏期、收缩期和舒张期。蟾蜍腓肠肌的单收缩约历时0.12秒，若给肌肉两个以上有效剌激，且使每两个剌激的间隔时间大于该肌肉单收缩的总时程，则肌肉将出现一连串各自分离的单收缩。复合收缩：若增加刺激频率，使每两个剌激的间隔时间小于该肌肉单收缩的总时程，则引起肌肉的收缩可以总和起来，出现连续的收缩，称为复合收缩。包括
12、不完全强直收缩和完全强直收缩。不完全强直收缩：剌激间隔短于单收缩时程而长于收缩期，即新的收缩发生于前次收缩的舒张期，肌肉的收缩反应可以融合，出现持续的锯齿状收缩曲线。完全强直收缩：继续增加剌激频率，使剌激间隔短于收缩期，每次新的收缩都产生于前次收缩的收缩期中，肌肉的收缩反应完全融合而出现一持续的收缩曲线。强直收缩产生的肌张力要比单收缩强34倍。【实验对象】蟾蜍或蛙【实验器材和药品】BL-410生物机能实验系统、张力换能器、刺激电极、蛙类手术器械、铁支架、培养皿、滴管、任氏液等【实验方法】1、制备坐骨神经腓肠肌标本，在任氏液中浸泡10min左右，使其兴奋性较稳定。2、仪器标本连接（1）将张力换能
13、器固定在铁支架上，肌肉标本的股骨固定于激动器上，腓肠肌跟腱的结扎线连于张力换能器的受力片上，连线应松紧适宜，并与桌面垂直，张力换能器的输入端接BL-410系统的1通道插孔。（2）把坐骨神经轻轻提起，放在刺激电极上。（3）BL-410系统操作 依次选定“实验项目”“肌肉神经实验”“刺激频率与反应的关系 ”。 在弹出的“设置刺激频率与反应关系实验参数”对话框中选择“现代实验”或“经典实验”。若选定“经典实验”，系统将按照设置输出三组不同的刺激；若选定“现代实验”，系统以初始频率为基础，按频率阶梯数值递增刺激频率。观察收缩形式的变化。【注意事项】1. 每两次刺激之间必须让标本休息15秒。2. 经常给标本滴加任氏液以维持兴奋性于良好状态。3. 张力换能器有标志的面朝上,防止出现负张力.【实验结果及分析】 1. 打印或画出实验所记录的结果 要求：（1）用铅笔画图 （2）标记处图形所对应的刺激频率和刺激强度 2. 根据所得实验结果，讨论分析不同刺激频率对肌肉收缩的影响机制。【回答下列问题】 1. 不同的肌肉，引起完全强直收缩的刺激频率是否相同？为什么？ 2. 同一块肌肉，其单收缩、复合收缩和强直收缩的高度是否相同？为什么？实验三 期前收缩和代偿间歇Experiment 3 premature systole and compensatory pause同组人姓名（the
