生物材料检验 实验一 尿肌酐和尿比重的测定

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1、实验一 尿肌酐和尿比重的测定,(一)尿肌酐的测定-分光光度法 肌酐又称肌酸酐,是肌酸和磷酸肌酸的代谢终产物,主要有肌肉中磷酸肌酸的非酶促反应生成,通过尿液排除体外,正常人每日尿中排出的肌酐量是恒定的,浓度随尿量的多少而变化,用来校正尿液浓度值。正常范围是0.41.3g/L。,实验目的 掌握碱性苦味酸法测定尿肌酐的原理;熟悉实验操作步骤和分光光度计的使用;了解尿肌酐的测定方法的注意事项。实验原理 肌酐与过量苦味酸在碱性条件下反应生成橙红色苦味酸肌酐后,在波长490nm处比色定量。,实验仪器与试剂 1.仪器 分光光度计,比色杯 2.试剂 饱和苦味酸溶液(15g/L) 氢氧化钠溶液(100g/L)

2、碱性饱和苦味酸溶液 盐酸 肌酐标准溶液,实验步骤 1.样品的采集和保存 按所接触毒物或其代谢产物所规定的采样时间,用50ml聚乙烯塑料瓶收集尿样,冷藏运输,于4摄氏度下可保存2周。 2.标准曲线绘制及样品的测定 样品处理:取0.1ml尿样至于10ml比色管中,加水至3ml 试剂空白:取3ml水置于10ml比色管中。 标准曲线的绘制:取6支10ml比色管,按下表配置标准溶液,向各管中加入2.0ml碱性苦味酸溶液,混匀,于室温下反应2030分钟。加5ml水混匀后,以零管做参比,波长490nm下测吸光值,在0.5小时内比色完毕。每个浓度测定3次,求平均吸光值。 测定:求标准曲线。 (肌酐)=1f (

3、肌酐)-尿中肌酐的浓度。 1-标准曲线上计算的肌酐浓度。 f-尿样稀释倍数,30.注意事项:1.注意非特异的色素原干扰。 2.温度在1520显色稳定,反应温度控制在30.,(二)尿比重的测定-光折射法 尿比重作为估计肾浓缩稀释功能的指标,与尿中水分、盐类及有机物的含量有关。常被用来校正尿液的浓度变化。我国推荐尿比重校正参照值为1.020. 实验原理 掌握尿比重的测定原理和过程;熟悉尿比重折射仪的使用。了解尿比重测定的注意事项。 实验原理 利用溶液中总固体量与溶液对光的折射率之间存在的相关性,以纯水做参考,测定尿液比重。,仪器与试剂 尿比重计 胶头滴管 尿杯 纯水实验步骤 1.样品采集和保存 2.尿样的测定 尿比重折射仪的调零:用纯水洗净棱镜表面并用软纸吸干。用胶头滴管滴23滴纯水在棱镜表面,按调零按钮调零。 尿样测定:洗净棱镜并吸干,滴23滴尿样。 测定数值即为尿样的比重值。,注意事项,1.尿液不可冷冻。会导致沉淀。2.尿样如浑浊,应离心后,取上清液测定。3.尿比重计每次使用都要用纯水调零。4.尿样比重范围1.0101.035,超出范围认为尿样不合格,应弃去重新采样。,

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