螺旋体、支原体、衣原体、立克次体综述

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1、螺旋体 支原体 衣原体 立克次体综述 第十六章螺旋体 螺旋体 spirochete 是一种细长 柔软 螺旋状 运动活泼的原核细胞型微生物 在分类学上的地位介于细菌与原虫之间 第一节分类 螺旋体目螺旋体科9个属 螺旋体 疏螺旋体 密螺旋体 脊螺旋体等 蛇形螺旋体科2个属 蛇形螺旋体 短螺旋体 钩端螺旋体科2个属 钩端螺旋体 细丝体 致病性螺旋体 致病性螺旋体主要有3个属钩端螺旋体属疏螺旋体属密螺旋体属等 第二节钩端螺旋体 一 临床意义钩端螺旋体是钩端螺旋体病的病原体 致病物质 内毒素样物质 ELS 脂多糖样物质 LLS 溶血素细胞毒性因子 CTF 细胞致病作用物质 2 所致疾病 钩体病 传染源及

2、储存宿主 带菌动物 我国主要为猪和鼠 传播途径 皮肤粘膜接触传播 易感人群人和动物临床表现发热头痛一身乏 眼红腿痛淋巴大 二 生物学特性 螺旋细密 规则 一端或两端呈钩状 有两根周浆鞭毛 运动活泼 G 但不易着色 Fontana镀银染色成棕褐色 营养要求高 需氧或微需氧 常用Korthof培养基 生长缓慢 最适温度28 30 在水及土壤中可存活数天至数月 对青霉素敏感根据属特异性抗原 群特异性抗原 型特异性抗原分25个血清群 273个血清型 三 微生物检验 一 检验程序 二 标本采集标本 10天内取血液 1周后取尿液和脑脊液 三 标本直接检查直接镜检 暗视野观察 Fontana镀银染色 棕褐色

3、核酸检测 特异DNA探针法 PCR 四 分离培养与鉴定 血液 尿液培养接种于Korthof培养基中培养后作暗视野检查 五 抗体检测1 显微镜凝集试验2 间接凝集试验 炭粒 1 8 乳胶 1 2 3 补体结合试验 血清效价 1 20 4 或取双份血清 抗体效价呈4倍增高 六 动物试验 第三节疏螺旋体属 有3 10个稀疏而不规则的螺旋 运动活泼对人致病的主要有伯氏疏螺旋体 回归热螺旋体 奋森螺旋体等伯氏疏螺旋体 莱姆病回归热螺旋体 回归热奋森螺旋体 口咽部炎症 一 伯氏疏螺旋体 一 临床意义1 致病物质 粘附素 外膜蛋白OspA LPS2 自然储存宿主 哺乳动物传播媒介 硬蜱3 Lyme病临床表现

4、 游走性红斑 二 生物学特性 长10 40 m 两端稍尖 周浆鞭毛有2 100根以上 与运动有关 Giemsa染色为淡紫色 镀银染色为棕褐色 营养要求高 微需氧 5 10 CO2促进生长 常用BSK培养基 生长缓慢 莱姆病的病原体 伯氏 伽氏 埃氏 三 微生物学检查 标本中病原体数量少 早期和晚期均难分离出螺旋体 2 分子生物学技术3 抗体检测 免疫荧光法及ELISA法检测病人体内的抗体 二 回归热疏螺旋体 流行性回归热 虱传回归热 病原体 回归热疏螺旋体 我国多见传播途径 体虱临床症状 高热反复发作3 9次 地方性回归热 蜱传回归热 病原体 杜通疏螺旋体等15种传播途径 软蜱储存宿主 啮齿动

5、物临床症状 高热反复发作3 9次 三 奋森螺旋体 1 体内正常菌群 寄生在口腔 齿龈及咽部2 协同引起奋森咽峡炎 牙龈炎 溃疡性口腔炎 口颊坏疽3 对青霉素 四环素等敏感 第四节密螺旋体属 分为致病与非致病两大类苍白螺旋体 苍白亚种梅毒性病地方亚种地方性梅毒非性病极细亚种雅司病非性病品他螺旋体 品他病 一 梅毒螺旋体 梅毒 由梅毒螺旋体 Treponemapalidum 感染而引起生殖器官 所属淋巴结和全身病变的慢性传染病 一 临床意义1 致病物质外膜蛋白 粘附作用表面粘多糖和唾液酸 形成荚膜样物质 透明质酸酶鞭毛 2 所致疾病 梅毒 先天性 母体通过胎盘传给胎儿获得性 性传播或医源性传播获得

6、性梅毒临床分期 分为三期 1 期 初期 梅毒 感染后3周左右局部出现无痛性硬下疳 感染性极强 2 期梅毒 发生于硬下疳出现后2 8周 全身皮肤 粘膜常有梅毒疹 全身淋巴结肿大 3 期 晚期 梅毒 发生感染2年后 病变可波及全身组织和器官 基本损害为慢性肉芽肿 病损内螺旋体少但破坏性大 先天性梅毒 母体经胎盘 产道通过传给胎儿 胎儿期 流产死胎 生后 锯齿形牙马鞍形鼻 一 生物学性状 1 形态与染色 细长螺旋状 两端尖直 与钩体相区别 在暗视野显微镜下可见 运动很活泼 为闪光白色 用Fontana镀银染色法 染成棕褐色 用Giemsa染色法 染成浅红色 生物学性状 2 电镜下观察 有细胞壁和细胞

7、膜 细胞壁外有包膜 细胞膜内为含细胞质和核质的螺旋形原生质圆柱体 绕着3 4根周浆鞭毛或内鞭毛 与运动有关3 不能人工培养基中生长繁殖 棉尾兔 4 抵抗力极弱 对温度和干燥特别敏感 4 3天死亡 4 保存3天血液就无传染梅毒的危险5 对青霉素 四环素敏感 微生物检查 检验程序标本采集 分泌物 穿刺液 组织块 标本直接检查 暗视野显微镜检查免疫荧光染色检查镀银染色检查核酸检测体外培养 迄今仍未解决抗体检测 实验室辅助诊断的重要手段 暗视野显微镜检查 初期梅毒 取下疳分泌物 二期梅毒取梅毒疹 病灶渗出物或局部淋巴结穿刺液 将上述检材置于玻片上用暗视野显微镜检查 如见有呈现运动活泼 沿其长轴滚动 屈

8、伸 旋转 前后移行等的螺旋体即有诊断意义 核酸检测 用PCR技术直接检测临床标本中梅毒螺旋体的特异性DNA片段 用于检测的引物和探针是编码外膜蛋白4 7kD的基因 其扩增产物经斑点印迹 或电泳以Southern印迹法鉴定 抗体检测 第一类非密螺旋体抗原血清试验 非特异性 用牛心肌的心脂质作为抗原 测定病人血清中的反应素 抗脂质抗体 初期梅毒病灶 阳性率为53 83 二期梅毒的阳性率可达100 晚期梅毒的阳性率58 85 胎传梅毒的阳性率为80 100 非密螺旋体抗原试验方法 性病研究所实验室 VDRL 玻片试验所用抗原 主要心卵磷脂和胆固醇待检血清经56 30min灭活 滴加于玻片 加等量抗原

9、液 5min充分混匀反应后观察结果有大片絮状凝聚物为 3 中等凝聚物为 2 细小凝聚物为 液体混浊为 非密螺旋体抗原试验方法 快速血浆反应素环状卡片试验 RPR 用活性炭吸附VDRL抗原 取待检血清加于环状卡内 加VDRL抗原致敏活性炭1滴 旋转摇匀8min 观察结果结果判断1 阳性反应 可见中等或较大的黑色凝聚物 2 弱阳性反应 可见较小的黑色凝聚物 3 阴性反应 可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物 RPR反应原理 当机体感染梅毒螺旋体后 经过一段时间潜伏期 在血清中产生一定数量的抗类脂质抗体 快速血浆反应素环状卡片试验 RPR 在抗原中加入炭颗粒 敏感性和特异性与VDRL试验相似 其优点为可不用

10、显微镜 观察结果 非梅毒螺旋体抗原试验方法 甲苯胺红不加热血清实验 TRUST 用甲苯胺红染料颗粒替代活性炭颗粒吸附VDRL抗原试验方法和结果判定相同阳性结果出现红色絮状凝集也可将标本倍比稀释进行半定量试验 密螺旋体抗原试验 密螺旋体抗原试验 特异性 用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性抗体由于梅毒螺旋体 雅司螺旋体等抗原性相似 所以用血清学试验不可能区别这些密螺旋体及其所致疾病 密螺旋体抗原试验方法 荧光密螺旋体抗体吸收试验 FTA ABS 1 反应原理 用Nichols株梅毒螺旋体抗原悬液涂成菌膜 吸附待检血清 经吸附剂除去非特异性抗体 的lgG抗体 再用荧光素标记的羊抗人lgG抗体 显示待

11、检血清中含有的抗螺旋体抗体 2 操作步骤 1 抗原片制备 Nichols株梅毒螺旋体抗原悬液 在玻片上涂直径为5mm的菌膜 干后甲醇固定 2 待检血清预处理 取50ul血清 经56 30分钟灭活 与200ul吸附剂混匀 37 作用30分钟 充分吸除非特异性抗体 3 夹心法荧光显色 吸附后的血清用磷酸盐缓冲液 PBS 作1 20 1 320的倍比稀释 将稀释后的血清分别滴加于抗原菌膜上 置湿盒内37 孵育30分钟 然后用PBS洗片 并将玻片在PBS中浸洗 洗3次 每次5分钟 吹干 各抗原反应片上滴加荧光素标记的羊抗人lgG抗体 置湿盒37 孵育30分钟 再用PBS按前法洗片 干后用甘油缓冲液封片

12、 3 结果判定 阳性 高倍视野 10条左右 出现荧光 则为 15条左右则为 约20条出现强荧光则为 阴性结果参照阴性对照血清判定为 或 密螺旋体抗原试验 梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验 FTA ABS DS 抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝检测 MHA TP 免疫印迹试验 immuno blottingtest 密螺旋体抗原试验 ELISA用Nichols株为抗原 以超声波击碎 此法可用于各期梅毒诊断 灵敏度为96 对感染血清灵敏度为95 与荧光抗体双吸收法 FTA ABS DS 比较 两法符合率为96 ELISA试剂具有价廉 保存时间久且稳定 4个月 等优点 是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法 WH

13、O推荐用VDRL RPR法对血清进行过筛试验 出现阳性者用FTA ABS FTA ABS DS MHA TP ELISA和免疫印迹试验等方法做确认试验 二 其他密螺旋体 有苍白密螺旋体地方亚种 极细亚种以及品他密螺旋体 分别引起地方性梅毒 雅司和品他病 大多发生于经济较落后地区的儿童 小结 梅毒螺旋体的特点 大细长 弯曲 柔软 运动活泼螺菌镀银染色获得性梅毒 3期 先天性梅毒不能培养检测 根据病史和现病史查梅毒螺旋体 查特异性抗体和非特异性抗体反应素治疗彻底青霉素 第十七章支原体mycopalsma无细胞壁 多形态 能透过滤菌器的 能在无生命培养基生长繁殖的最小原核细胞型微生物 因其生长后能形

14、成分枝长丝 故命名为支原体 呼吸道粘膜泌尿生殖道粘膜 支原体与细菌L型的区别 支原体自然界广泛存在在遗传上与细菌无关 独立的微生物 生长时需胆固醇等渗培养生长慢 菌落小DNA中G C 41mol L型由细菌诱导生成在遗传上与细菌相关 可回复 生长时不一定需胆固醇高渗培养生长快 菌落大DNA中G C 41mol 支原体分类与命名 柔膜体纲 支原体目 无胆甾原体科支原体科螺旋原体科 支原体属脲原体属血虫体属血巴尔通体属 对人致病的支原体 肺炎支原体 口咽部 人类原发性非典型性肺炎 人型支原体 泌尿生殖道 口咽部 轻度咽炎 生殖器支原体 泌尿生殖道解脲脲原体 泌尿生殖道 炎症和不育症 穿通支原体 A

15、IDS的辅助致病因子 临床意义肺炎支原体感染呈全球性 以温带为主该病经飞沫传染 间歇性 长期缓慢播散主要侵犯呼吸系统首先引起上呼吸道感染 然后下行引起气管炎 支气管炎 毛细支气管炎和肺炎可引起双侧肺炎和肺外并发症 肺炎支原体 Mycoplasmapneumoniae MP 形态结构大小 2 5 m 通过滤菌器 呈短丝状 尖端有一球状特殊结构 类似酒瓶状无细胞壁 仅有细胞膜 革兰染色阴性 Giemsa染色呈淡紫色细胞膜由三层结构组成 内外两层为蛋白质 中间为脂质 其中胆固醇含量多 占36 形态结构 支原体 培养特征 营养要求高添加10 20 血清 PH7 6 8 0 低于7 0死亡二分裂繁殖为主

16、 也有出芽 分枝等方法 生长慢 2 7天或2周 荷包蛋样菌落 抗原结构 糖脂抗原 特异性差细胞膜外层蛋白质抗原 P1蛋白等 是支原体的主要型特异性抗原抗原性可用GIT和MIT来鉴定GIT 生长抑制试验 growthinhibitiontest MIT 代谢抑制试验 metabolisminhibitiontest 生长抑制试验 支原体培养时 在培养皿上贴吸附有型特异性抗血清的滤纸片 看是否抑制生长 代谢抑制试验 支原体 含葡萄糖液体培养基 含有抗血清及酚红 酚红不变色 抗体与该支原体相应 支原体代谢受抑制 酚红变色 抗体与该支原体不对应 支原体代谢不被抑制 培养特性可在人工培养基上生长繁殖 但对营养要求较高 需要胆固醇和葡萄糖1 2周后出现菌落 固体培养基上呈草莓状 反复传代后呈 荷包蛋 状菌落能吸附豚鼠红细胞 产生溶血素半固体培养基上可见细小粒状菌落液体培养基中呈极浅淡的混浊生长 生化反应能利用葡萄糖 不水解精氨酸 不利用尿素可还原美蓝 可还原无色的TTC 氯化三苯基四氮唑 为红色这些生化性状可用来与其它支原体相鉴别 检验程序 图17 3标本采集 痰 咽拭 鼻咽洗液 支气管分泌物 以