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1、DB DB33浙江省质量技术监督局 发布2008-01-28实施2007-12-29发布水产品中泰乐菌素A残留量的测定高效液相色谱法Determination of tylosin A residues in aquatic productshigh performance liquid chromatographyDB33/T 6732007浙江省地方标准ICS67.050X 041DB33/T 6732007前 言本标准的附录A为资料性附录。本标准由浙江省水产标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：农业部渔业环境及水产品质检中心（舟山）、浙江海博食品有限公司。本标准主要起草人：陈雪昌、
2、王坚强、陈伟斌、郝云彬、郑斌。1水产品中泰乐菌素A残留量的测定 高效液相色谱法1 范围本标准规定了水产品中泰乐菌素A残留量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水产品可食部分中泰乐菌素A残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理样品在碱性条件下用乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，反相色谱柱分离，紫外检测器检
3、测，外标法定量。4 试剂与材料实验用水应符合GB/T 6682中一级水标准。试剂除有实验要求外，其余均为分析纯。4.1正己烷。4.2乙酸乙酯。4.3乙腈。4.4磷酸：（85%）。4.5磷酸二氢钾。4.6磷酸氢二钾。4.7磷酸盐缓冲液（pH8.0）：准确称取磷酸二氢钾0.52 g和磷酸氢二钾16.73 g，加水定容至500 mL。4.8流动相用磷酸盐缓冲液（pH2.5）：0.01 mol/L，准确称取1.36 g磷酸二氢钾，加适量水溶解，以磷酸调pH为2.5，定容至1000 mL。4.9泰乐菌素A标准品：纯度98%。4.10泰乐菌素A标准贮备液：准确称取适量的泰乐菌素A标准品，用乙腈配制成100
4、 mg/L的标准贮备液。避光冷藏保存，保存期为一个月。4.11泰乐菌素A标准工作液：用流动相稀释成各质量浓度的标准溶液0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L，现配现用。5 仪器与设备5.1 液相色谱仪：配紫外检测器。5.2 组织捣碎机。5.3 均质机：大于10 000 rpm。5.4 离心机：7 000 rpm。5.5 旋转蒸发器。5.6 旋涡混匀器。5.7 天平：感量0.01 g和0.0001 g。5.8 pH计5.9 聚丙烯离心管：50mL、10mL。6 分析步骤6.1 取样鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去头、去壳、去附肢，取可食部
5、分；蟹、中华鳖等取可食部分；取适量样品经组织捣碎机捣碎，放置密闭容器-18 以下冷冻贮存备用。6.2 提取称取样品10 g（精确至0.01 g），于50 mL聚丙烯离心管中，加入5 mL磷酸盐缓冲溶液（4.7），均质30 s，再加入25 mL乙酸乙酯均质30 s，以6000 rpm离心5 min，乙酸乙酯层移入250 mL旋转蒸发瓶中。加入25 mL乙酸乙酯于离心管中，重复提取1次，合并乙酸乙酯于250 mL旋转蒸发瓶。6.3 净化将提取液于40 水浴旋转蒸发至近干，加入1 mL乙腈溶解残渣后，移入10 mL聚丙烯离心管中，加入2 mL正己烷涡旋振荡15 s萃取脱脂，7000 rpm离心5 m
6、in，弃去正己烷层，下层液体经0.45 m微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。7 测定7.1 色谱条件7.1.1 色谱柱：ODS C18，5 m，4.6 mm 250 mm或同类型号色谱柱。7.1.2 柱温：35 。7.1.3 流动相：乙腈磷酸盐缓冲液（4.8）=40+60，（V/V）。7.1.4 流速：1.0 mL/min。7.1.5 进样量：20 L。7.1.6 检测器波长：280 nm。7.2 标准曲线制作取泰乐菌素A标准贮备液，用流动相稀释成浓度为0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L的标准工作液。分别取20 L进样，以峰面积
7、为纵坐标，以标准样品中泰乐菌素A含量为横坐标，绘制标准曲线。7.3 色谱测定取样品滤液20 L进样，记录峰面积，保留时间为5.2min。从标准曲线查得样品提取液中泰乐菌素A的含量。如果上机液浓度超过线性范围，用乙腈稀释后进行测试。8 计算样品中泰乐菌素A的含量按公式（1）计算。.（1）式中：X样品中泰乐菌素A的含量，单位为毫克每千克（g/g）；C样品溶液中泰乐菌素A的浓度，单位为毫克每升（g/mL）；m样品质量，单位为克（g）；V样品溶液体积，单位为毫升（mL）。注：检验结果保留2位有效数字。9 方法检出限、回收率和精密度9.1 方法检出限本方法检出限为0.05 mg/kg。9.2 回收率在0.05 mg/kg2.5 mg/kg的添加浓度下的回收率为70%110%。9.3 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。附录 A（资料性附录）泰乐菌素A色谱分析图泰乐菌素A，保留时间：5.2min，浓度：5.0 g/mL图A.1泰乐菌素A标准品色谱图3
