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1、第一篇：微生物学第九章 一 名词解释 1体液免役: 指机体受抗原刺激后，来源于骨髓的一类小淋巴细胞进行增殖并分化 为浆细胞，由它合成抗体并释放到体液中以发挥其免疫作用。 2细胞免役: 机体在抗原刺激下, 一类小淋巴细胞发生增殖, 分化, 进而直接攻击 靶细胞或间接地释放一些淋巴因子的免疫作用. 3 抗原决定簇又称抗原表位，指位于抗原表面可决定抗原特异性的特定化学基团。 4组织相容性是指在不同高等动物个体间进行组织或器官移植时，供体与受体双方彼此可接受的程度。 5抗原抗原是一类能诱导机体发生免疫应答并能与相应的抗体或t淋巴细胞受 体发生特异性免疫反应的大分子物质。 6非特异性免疫 ：是机体的一般
2、生理防卫功能，又称天然免疫，它是在种系发育过 程中形成的，由先天遗传而来，是防卫任何外界异物对机体的侵入而不需要特殊的刺激或诱导 7特异性免疫 ：是机体生命过程中接受抗原性异物刺激后获得的免疫称为特异性免疫,又称获得性免疫,具有获得性、高度特异性和记忆性。 8菌苗与疫苗 ： 菌苗是指用细菌制成的生物制品。疫苗是指用病毒、立克次氏体或螺旋体等微生物制成的生物制品。 9表面抗原：指包围在细菌细胞壁外层的抗原，主要是荚膜或微荚膜抗原。10 疫苗vaccine 二填空 1一个微生物个体一的抗原成分相当复杂,它是由许多不同抗原组成的复合抗原,以细 菌为例其他抗原包括:菌体抗原,鞭毛抗原,表面抗原,菌毛抗
3、原 2主要的抗原抗体反应有:凝集反应,沉淀反应和免疫反应 三.选择 1下述细胞中能够产生抗体的是：(b) at细胞bb细胞cnk细胞d 巨噬细胞 2.下述细胞中不属于特异性免疫细胞是：(c) at细胞bb细胞cnk细胞d 抗原提呈细胞 四.问答 1 细菌的抗原种类有那些。 i. 表面抗原, 如荚膜抗原; ii. 菌体抗原, 如o抗原; iii. 鞭毛抗原, 如h抗原; iv. 菌毛抗原, v. 外毒素抗原和内毒素抗原 第二篇：微生物学实验 细菌群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法(direct microscopic count)、平板菌落计数法(
4、plate count)、光电比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然数法(most probable number mpn)以及膜过滤法(membrane filtration)等。测定细胞物质的方法有细胞干重的测定，细胞某种成分如氮的含量、rna和dna的含量测定，代谢产物的测定等。总之，测定微生物生长量的方法很多，各有优缺点，工作中应根据具体情况要求加以选择。 本实验主要介绍生产、科研工作中比较常用的显微镜直接计数法、平板菌落计数法和光电比浊计数法。 一 显微镜直接计数法 （一）目的要求 1明确血细胞计数板计数的原理。 2掌握
5、使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 （二） 基本原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、peteroff-hauser计菌器以及hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一
6、般用于牛乳的细菌学检查。显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。另外两种计菌器的使用方法可参看各厂商的说明书。 用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各列有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图l5-1。计数
7、室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(图152)；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为lmm，则每一个大方格的面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm，所以计数室的容积为0.lmm3(万分之一毫升)。 图151 血细胞计数板构造（一） 图152 血细胞计数板构造（二） a. 正面图；b.纵切面图； 放大后的方格网，中间大方格为计数室 1.血细胞计数板；2. 盖玻片；3.计数室 计数时，通常数五个中方格的总
8、菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成lml菌液中的总菌数。 设五个中方格中的总菌数为a，菌液稀释倍数为b，如果是25个中方格的计数板，则 1ml菌液中的总菌数=a/525104b=50000ab（个） 同理，如果是16个中方格的计数板， 1ml菌液中的总菌数=a/516104b=32014ab（个） （三）器材 1菌种 酿酒酵母 2仪器或其他用具 血细胞计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。 （四）操作步骤 l菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 2镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗
9、，吹干后才能进行计数。 3加样品 将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。 取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。 4显微镜计数 加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显微镜还要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易舌清楚计数室方格线，或只见竖线或只见横线。 在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5
10、10个菌体为宜。每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5清洗血细胞计数板 使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 （五）实验报告 l结果 将结果记录于下表中。a表示五个中方格中的总菌数；b表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数ab二室平均值菌数/ml 12345 第一室
11、 第二室 2思考题 (1)根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差力求准确? (2)某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计12种可行的检测方法。 二 平板菌落计数法 （一）目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 （二）、基本原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长
12、成的一个单菌落也可来自样品中的23或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。 （三）器材 1菌种 大肠杆菌菌悬液。 2培养基 牛肉膏蛋白陈培养基。 3仪器或其他用具lm1无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。 （四）操作步骤 l编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5ml无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2稀释
