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1、实验十八 脂肪含量及油脂品质检测一、目的与要求1、掌握油脂提取方法；2、学习实际样品的分析方法,通过对食用植物油脂主要特性的分析，包括试样的制备分离提纯、分析条件及方法的选择、标准溶液的配制及标定、标准曲线的制作以及数据处理等内容，综合训练食品分析的基本技能；3、掌握鉴别食用植物油脂品质好坏的基本检验方法。二 实验原理与相关知识食用植物油脂品质的好坏可通过测定其酸价、碘价、过氧化值、羰基价等理化特性来判断：1、油脂酸价：酸价（酸值）是指中和 1.0g 油脂所含游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。酸价是反映油脂质量的主要技术指标之一，同一种植物油酸价越高，说明其质量越差越不新鲜。测定酸价可以评定油脂
2、品质的好坏和贮藏方法是否恰当。中国食用植物油卫生标准规定：酸价，花生油，菜子油，大豆油4，棉子油1。2、碘价：测定碘价可以了解油脂脂肪酸的组成是否正常有无掺杂等。最常用的是氯化碘乙酸溶液法（韦氏法）。其原理：在溶剂中溶解试样并加入韦氏碘液，氯化碘则与油脂中的不饱和脂肪酸起加成反应，游离的碘可用硫代硫酸钠溶液滴定，从而计算出被测样品所吸收的氯化碘（以碘计）的克数，求出碘价。常见油脂的碘价为：大豆油 120141；棉子油 99113；花生油 84100；菜子油97103；芝麻油 103116；葵花子油 125135；茶子油 8090；核桃油140152；棕榈油 4454；可可脂 3540；牛脂 4
3、048；猪油 5277。碘价大的油脂，说明其组成中不饱和脂肪酸含量高或不饱和程度高。3、过氧化值：检测油脂中是否存在过氧化值，以及含量的大小，即可判断油脂是否新鲜和酸败的程度。常用滴定法，其原理：油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算含量。中国“食用植物油卫生标准（GB2716-85）”规定：过氧化值（出厂）0.15%。4、羰基价：羰基价是指每千克样品中含醛类物质的毫摩尔数。用羰基价来评价油脂中氧化产物的含量和酸败劣度的程度，具有较好的灵敏度和准确性。我国已把羰基价列为油脂的一项食品卫生检测项目。大多数国家都采用羰基价作为评价油脂氧化酸败的一项指标。常
4、用比色法测定总羰基价，其原理：羰基化合物和 2，4二硝基苯胺的反应产物，在碱性溶液中形成褐红色或酒红色，在440nm 波长下，测定吸光度，可计算出油样中的总羰基价。中国食用植物油卫生标准规定：羰基价20 mmol/kg。三、仪器与试剂（一）实验室提供下列仪器和试剂1、仪器：碘量瓶、250mL 各种分析天平、分光光度计、10ml 具塞玻璃比色管、常用玻璃仪器。2、试剂（1）酚酞指示剂（10g / L）：溶解 1g 酚酞于 90 mL（95%）乙醇与 10 mL 水中。（2）氢氧化钾标准溶液C（KOH）=0.05mol/L。（3）碘化钾溶液（150g/L）：称取 15.0g 碘化钾,加水溶解至 1
5、00 mL,贮于棕色瓶中。（4）硫代硫酸钠标准溶液（0.1mol / L）：按 GB601 配制与标定。（5）韦氏碘液试剂：分别在两个烧杯内称入三氯化碘 7.9g 和碘 8.9g，加入冰醋酸，稍微加热，使其溶解，冷却后将两溶液充分混合，然后加冰醋酸并定容至 1000mL。（6）三氯甲烷（分析纯）。（7）环己烷（分析纯）。（8）冰乙酸（分析纯）。（9）可溶性淀粉（分析纯）。（10）饱和碘化钾溶液：称取 14g 碘化钾,加 10 mL 水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中。（11）精制乙醇溶液：取 1000mL 无水乙醇，置于 2000mL 圆底烧瓶中，加入 5g铝粉、10g 氢氧化钾，
6、接好标准磨口的回流冷凝管，水浴中加热回流 1h，然后用全玻璃蒸馏装置，蒸馏收集馏液。（12）精制苯溶液：取 500mL 苯，置于 1000mL 分液漏斗中，加入 50mL 硫酸，小心振摇 5min，开始振摇时注意放气。静置分层，弃除硫酸层，再加 50mL 硫酸重复处理一次，将苯层移入另一分液漏斗，用水洗涤三次，然后经无水硫酸钠脱水，用全玻璃蒸馏装置蒸馏收集馏液。（13）2，4-二硝基苯肼溶液：称取 50 mg2，4-二硝基苯肼，溶于 100mL 精制苯中。（14）三氯乙酸溶液：称取 4.3g 固体三氯乙酸，加 100mL 精制苯溶解。（15）氢氧化钾乙醇溶液：称取 4g 氢氧化钾，加 100m
7、L 精制乙醇使其溶解，置冷暗处过夜，取上部澄清液使用。溶液变黄褐色则应重新配制。（二）学生自配及标定试剂1、氢氧化钾标准溶液（0.05mol / L）的标定：（按 GB601 标定或用标准酸标定）。2、中性乙醚乙醇（2+1）混合液：按乙醚乙醇（2+1）混合，以酚酞为指示剂，用所配的 KOH 溶液中和至刚呈淡红色，且 30s 内不退色为止。3、 三氯甲烷冰乙酸混合液的配制： 量取 40ml 三氯甲烷，加 60ml 冰乙酸，混匀。4、淀粉指示剂（10g / L）配制：称取可溶性淀粉 0.50g，加少许水，调成糊状，倒入 50ml 沸水中调匀，煮沸至透明，冷却。5、硫代硫酸钠标准溶液（0.0020m
8、ol / L）配制：用 0.1mol / L 硫代硫酸钠标准溶液稀释。四、实验内容（一）酸价测定（参照 GB/T5009.372003）1、分析步骤称取 3.00g5.00g 混匀的试样，置于锥形瓶中，加入 50mL 中性乙醚乙醇混合液，振摇使油溶解，必要时可置于热水中，温热使其溶解。冷至室温，加入酚酞指示剂 2-3 滴，以氢氧化钾标准滴定溶液滴定，至初现微红色，且 0.5min内部退色为终点。2、结果计算 =56.11 (1)式中：X试样的酸价（以氢氧化钾计），单位为毫克每克（mg/g）；V试样消耗氢氧化钾标准溶液体积，单位毫升（mL）；C氢氧化钾标准溶液实际浓度（mol/L）；m试样质量，
9、单位为克（g）；56.11与 1.0mL 氢氧化钾标准溶液C（KOH）=1.000mol / L相当的氢氧化钾毫克数。计算结果保留两位有效数字。（二）碘价测定（韦氏法）1、分析步骤：试样的量根据估计的碘价而异（碘价高，油样少；碘价低，油样多），一般在0.25g 左右。将称好的试样放入 500mL 锥形瓶中，加入 20mL 环己烷冰乙酸等体积混合液，溶解试样，准确加入 25.00mL 韦氏试剂，盖好塞子，摇匀后放于暗处 30min 以上（碘价低于 150 的样品，应放 1h；碘价高于 150 的样品，应放2h）。反应时间结束后，加入 20mL 碘化钾溶液(150/L)和 150mL 水。用 0.
10、1mol / L 硫代硫酸钠滴定至浅黄色，加几滴淀粉指示剂继续滴定至剧烈摇动后蓝色刚好消失。在相同条件下，同时做一空白实验。2、结果计算式中：试样消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；空白试剂消耗硫代硫酸钠的体积，mL；C硫代硫酸钠的实际浓度，mol / L；m试样的质量，g；0.12691/2 的毫摩尔质量，g/mmol。（三）过氧化值的测定（参考 GB/T5009.372003 第一法）1、分析步骤称取 2.00g3.00g 混匀（必要时过滤）的试样，置于 250mL 碘瓶中，加30mL 三氯甲烷冰乙酸混合液，使试样完全溶解。加入 1.00mL 饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻摇匀 0
11、.5min，然后再暗处放置 3min。取出加 100mL水，摇匀，立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液（0.0020mol/L）滴定，至淡黄色时，加 1mL 淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失为终点，用相同量三氯甲烷冰乙酸溶液、碘化钾溶液、水，按同一方法，做试剂空白试验。2 结果计算试样的过氧化值按式（3）和式（4）进行计算,X-1.=,(V2V1)C0.1269-m.100X2=X178.8式中：X1试样的过氧化值，单位为克每百克（g/100g）；X2试样的过氧化值，单位为毫摩尔每千克（mmol/kg）；V1试样消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）；V2试剂空白消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体
12、积，单位为毫升（mL）；C硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol / L）；m试样质量，单位为克（g）；0.1269于 1.00mL 硫代硫酸钠标准滴定溶液c（）=1.000 mol / L相当的碘的质量，单位为克（g）；78.8换算因子。计算结果保留两位有效数字。3、精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。（四）羰基价测定（参考 GB/T5009.372003）1、分析步骤精密称取约 0.0250.5g 试样，置于 25mL 容量瓶中，加苯溶解试样并稀释至刻度。吸取 5.0mL，置于 25mL 具塞试管中，加 3mL 三氯乙酸溶液及 5m
13、lL2，4-二硝基苯肼溶液，仔细振摇混匀，在 60C 水浴中加热 30min，冷却后，沿试管壁慢慢加入 10mL 氢氧化钾-乙醇溶液，使成为二液层，塞好，剧烈振摇混匀，放置 10min。以 1cm 比色杯，用试剂空白调节零点，于波长 440nm 处测吸光度。2、结果计算试样的羰基价按式（5）进行计算。式中：X试样的羰基价，单位为毫摩尔每千克（mmol/kg）；A测定时样液吸光度；m试样质量，单位为克（g）；试样稀释后的总体积，单位为毫升（mL）；测定用试样稀释液的体积，单位为毫升（mL）；854各种醛的毫克当量吸光系数的平均值。结果保留三位有效数字。3、精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。
