血尿液肌酐Cr测定作业指导书

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1、血血尿尿液液肌肌酐酐 C Cr r 测测定定作作业业指指导导书书 1 1 实实验验原原理理 Vitros CREA 试剂是一种干燥 多涂层的 在透明 的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片 将一滴患者样品滴于干片上 分布层会使之均匀地 分布 随后 肌酐扩散至试剂层并水解为肌酸 这样生 成的肌酸在肌酸氨基水解酶的作用下转化为肌氨酸和尿 素 肌氨酸又在肌氨酸氧化酶的作用下氧化生成甘氨酸 甲醛和过氧化氢 最后 过氧化氢催化白色染料生成呈 色剂 测定方式 两点比色法 波长 670nm 测试时间和温度 37 约 分钟 反应过程 肌酐氨基水解酶 肌酐 水 肌酸 肌酸氨基水解酶 肌酸 水 肌氨酸 尿素 肌

2、氨酸氧化酶 肌氨酸 氧气 水 甘氨酸 甲醛 过氧化氢 POD 过氧化氢 白色染 料 呈色剂 2 2 标标本本 2 1 病人准备 无特殊 2 2 样品类型 血清 肝素锂 钠和 EDTA 抗凝血浆 定时收集的 稀释后的尿样 2 3 标本采集与处理 2 3 1 血清和血浆样品 特别要注意的是 不要用注射营养液的针管采集样 品 样品采集后 4 小时内要离心标本 吸出血清 处 理时要将其当成生物污染品 2 3 2 尿液样品 定时或随时采集的尿液 测试前将1 份样品加 20 份试剂级别的水进行稀释 将测试结果乘 以 21 就得到原始样品中尿素氮的浓度 冷藏的样品 不能立即测试 处理样品时要将其当成生物污染

3、品 3 3 标标本本的的存存放放 血清 血浆室温下最多5 天 冷藏 最多 30 天 冷冻保存可超过30 天 尿液样品室温下 最多 3 天 冷藏最多 5 天 18 可长期保存 4 4 标标本本的的运运输输 样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发 5 5 标标本本拒拒收收的的标标准准 污染 抗凝剂 防腐剂不符合要 求 标本放置时间过长 6 6 试试验验材材料料 6 1 测试 Cr 所需的物品包括 Vitros 化学定标物 Kit1 Vitros 特制质控液 Vitros 7 BSA 稀释液 强生厂家提供原装进口 试剂盒外包装上标明了测试项 目名称 试剂标签代码 有效期限和储藏温度 6 1 1 试剂

4、组成 干片成分 反应成份有肌酐氨基水解 酶 肌酸氨基水解酶 肌氨酸氧化酶 过氧化酶和白色染 料 其它成份有染色物质 粘合剂 缓冲剂 稳定剂 表面活性剂 螯合剂及交叉连接剂 干片标记 试剂盒 外包装上标明了测试项目名称 试剂标签代码 有效期 限和储藏温度 6 1 2 试剂准备 从冰箱中取出干片盒 在将干片盒打 开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室 温状态 18 28 因此从冰箱中取出的试剂盒至少要 在室温下要放置 60 分钟 而冷藏的试剂盒至少要在室 温下放置 30 分钟 去除内包装后立即将干片盒放入仪 器的储藏器中 说明 在试剂盒达到室温后的24 小 时之内必须将其装入仪器中 6

5、1 3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒 存储在 18 或低于该范围 在机内干片储藏器中的干片盒 在仪器上放置时间 不能超过 2 周 否则要更换新试剂 当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时 可将干片盒留在储藏器中 出现以下 情形要做质控检测 仪器关闭时间超过2 小时 再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒 如果储藏正确 Vitros Cr 干片可保质到包装盒上标明的有效期限 参 见 VITROS250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存 SOP 文件 6 1 4 变质指示 超过有效期的试剂干片不能使用 6 1 5 注意事项 为避免干片盒打开以前其内包装受损 不能摔打干片盒 不要让尖利物刺入内包装 6

6、2 校准品 用 Vitros 化学定标物 Kit 1 血清 尿 液都用相同的定标液 不过各自的SAVs 值不同 有 关标准液的配制 使用及保存的配制 保存和稳定的详 情 可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品 SOP 文件 6 3 质控品 使用 Vitros 特制的质控物品 若使用 其它的一些质控物品 当与别的GLU 测试方法比较时 就会出现差异 如 用人血清 血浆混合物分离制成的 质控物品 含有高浓度防腐剂 稳定剂和其它化学添加 剂的质控物品 乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使 用 有关质控液的配制 保存和稳定的详情 可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品 S

7、OP 文件 7 7 仪仪器器 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化分析仪 具体测试程序请参阅操作手册的介绍 8 8 操操作作步步骤骤 将试剂复温后直接放入仪器 样品编程 仪器 5 分后自动打印结果 具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 SOP 具体定标程序 参阅操作 手册的相关章节内容 何时进行定标 在维护和 保养时更换了仪器的重要部件 质控结果持续超 出线性范围内时 详情参阅操作手册 管理条例 上指定的时间 在美国 CLIA 要求至少每 6 个月定标 一次 9 9 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0 质质量量控控制制 操作建议 将质控物质当成生物污

8、染 品来处理 将质控液与患者样品同时进行测试 每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况 选择质控浓度来检 查与临床的相关性 其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容 有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测 IQCT 的内容 在每一批标本中都应把质控血清 做为未知标本进行分析 以2S 为质控警告限 3S 为 失控限 绘制质控图 判断是否在控 质控规则参见生 化室室内质控操作规程 SOP 文件 1 11 1 计计算算方方法法 以用 Vitros 化学定标物校准仪器后 在病人结果可报告范围内 仪器直接报告可靠的检测结 果 以 mmol L 报告 1 12 2 参参考考值值范范围围 国际单位 mo

9、l L 血清 血浆 男性 62 106 女性 71 133 尿液 24 h 尿样 7000 25000 mol day 此参考范围是测试一批健康成人 然后取靶值附近 95 的结果计算所得 参考值因性别 年龄 饮食和地 域的不同而有所差别 根据好的实验室经验 每个实验 室应建立自己的参考值 1 13 3 临临床床意意义义 血清和尿液中的肌酐是正常人体肌肉 组织代谢的产物 与饮食变化无关 男性血清肌酐含量 高于女性 由于尿肌酐主要通过肾小球排泄 不被肾小 管重吸收 所以测定血清和尿液中的肌酐浓度可以检查 肾小球的通透率 急性或慢性肾衰竭 尿路阻塞 肾血流减弱 休 克 脱水 横纹肌炎都可造成血清肌酐

10、浓度上升 虚 弱和肌肉量减少可造成肌酐浓度降低 运动会使肌酐 廓清率升高 但当尿量减少时该指标不可靠 1 14 4 操操作作性性能能 14 1 线性范围 血清 4 1238 mol L 尿液 84 30639 mol L 乘以稀释倍数 21 倍的结果 14 2 精密度 在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度 结果反映了该方法的精密度 当仪器维护 周 围环境 干片处理和保存 质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性 日间精密 度 血清血清 x mo l L s mol L CV 室间精 密度 n 20 天 x mol L s mol L CV 样品 1 n 7

11、9 870 9 样品 1 870 91 4 样品 2 n 78 5234 4 样品 2 5238 81 8 日间精密 度 尿液尿液 x mo l L s mol L CV 室间精 密度 n 22 天 x mol L s mol L CV 样品 1 n 88 616097 8 样品 1 6160168 82 7 样品 2 n 88 8830135 样品 2 8830211 12 6 样品 3 n 88 12373 257 3 样品 3 12373491 94 0 样品 4 n 88 18827 218 5 样品 4 18827398 62 1 日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运

12、行两次 然后对测试结果进行统计计算 室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次 然后对测试结果进行统计计算 14 3 方法学比较 用 Vitros700 仪器和高效液相色谱参考方法分别测 试相同血清或尿样品 对比结果显示Vitros 方法的 准确度良好 用 Vitros250 仪器与 Vitros700 仪器测 试相同的血清 尿液样品 对比结果显示Vitros250 方法的准确度良好 血清 Y 1 03X 7 07 r 0 999 N 52 检测范围 80 1176 mol L 尿液 Y 1 04X 439 35 r 0 999 N 59 检测范围 2714 27793 mol L 14 4

13、灵敏度 本试剂的检测下限为血清4 mol L 尿液 84 mol L 乘以稀释倍数 21 倍的结果 14 5 特异性 经测试 以下物质对Vitros CREA 干 片法均无干扰 偏差 0 1mg dL 352 mol L 时 在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇 报 1 17 7 方方法法局局限限性性 17 1 本法线性上限为血清1238 mol L 尿液 30639 mol L 乘以稀释倍数 21 倍的结果 如果样 品中 Cr 浓度超出系统的测试线性范围 请按下列步骤 进行稀释 血清或血浆用Vitros 7 BSA 稀释 尿液 用生理盐水 重新测试 将测试结果乘以稀释倍数 就 得

14、到原始样品中 Cr 的浓度 17 2 干扰物质 血清 血浆 肌酸 当肌酐浓度为 1 5 mg dL 133 umol L 肌酸大于 8 mg dL 707 umol L 时 结果就会出现 DP 标志 因为肌酸浓度太高引起底物缺乏 没有 DP 标志 则是因为肌酸浓度小于 0 15 mg dL 13 umol L 当 肌酐浓度为 14 mg dL 1237umol L 肌酸大于 1 mg dL 88umol L 时 结果就会出现 DP 标志 而 没有 DP 标志的结果偏差小于 2 脯氨酸 患者注 射含脯氨酸的营养液会使结果升高 0 2 mg dL 18 umol L 因此 不能用静脉注射营养液的针

15、管采样 多巴酚丁胺 强心药 静脉注射多巴酚丁胺时采集的 样品会有明显的负偏差 83 ug mL 的多巴酚丁胺会使 原先 4 8 mg dL 的肌酐浓度降至 2 7 mg dL 利多卡 因 由于利多卡因和N 乙基甘氨酸 NEG 代谢的影 响 使用利多卡因做长期治疗的病人 结果会升高至多 1 0 mg dL 88 umol L 安乃近为 1 13umol L 当肌酐浓度为 88umol L 时 结果平均偏差为 53umol L 1 18 8 补补救救措措施施 仪器出了故障可联系仪器厂家 进行紧 急修理 如一时不能修好 则用OLYMPUS AU1000 生化 分析仪测定病人标本 1 19 9 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0 其其他他 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 SOP 文件处理