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1、血血清清丙丙氨氨酸酸氨氨基基转转移移酶酶I IF FC CC C 推推荐荐方方法法 测测定定作业指导书作业指导书 1 1 实实验验原原理理 国际临床化学学会 IFCC 推荐的紫外连续监测法 ALT L 丙氨酸 酮戊二酸 丙酮酸 L 谷氨酸 丙酮酸 NADH H L 乳酸 NAD H2O 加入磷酸吡哆醛 P 5 P 是为了稳定 ALT 活性 避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性 偏低 如心肌梗死 肝病和特别监护病人的结果 1 2 2 标标本本 2 1 病人准备 12 小时禁食 2 2 类型 血清 肝素或EDTA 血浆 3 3 标标本本存存放放 3 天内的活性损失 2 8 保存 LDH
2、 乳酸脱氢酶 10 15 25 保存 17 标本稳定性 20 保 存至少可稳定 4 周 4 4 标标本本运运输输 常温条件下保存运输 5 5 标标本本拒拒收收标标准准 标本溶血 细菌污染的标本 6 6 实实验验材材料料 6 1 试剂 申能 ALT 测定试剂盒 货号 141 27017170 1 试剂 1 6 64ml 试剂 2 6 16ml 6 1 1 试剂组成 试剂 1 R1 Tris 缓冲液 pH 7 5 100mmol L L 丙氨酸 500mmol L LDH 乳酸脱氢酶 1200U L 试剂 2 R2 a 酮戊二酸 15mmol L NADH 0 18mmol L 磷酸吡哆醛试剂 G
3、ood s 缓冲液 pH9 6 0 7mmol L 磷酸吡哆醛 0 09mmol L 6 1 2 试剂准备 试剂为即用式 6 1 3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2 8 若 无污染 可稳定至失效期 试剂不可冰冻 6 1 4 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长 有浊 度 或者未开盖的液体有沉淀时 表明试剂已变质 不 能继续使用 6 1 5 注意事项 试剂中含叠氮钠 0 95g L 为防 腐剂 不可入口 避免接触皮肤及粘膜 应采取必要的 预防措施使用试剂 6 2 校准品 使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准 具体参见生化检验校准品和 质控品 SOP 文件
4、 6 3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品 SOP 文件 7 7 仪仪器器 奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8 操操作作步步骤骤 8 1 项目基本参数 参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 SOP 文件 8 2 仪器操作步骤 参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪操作规程 SOP 文件 9 9 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0 质质量量控控制制 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析 以2S 为质控 警告限 3S 为失控限 绘制质控图 判断是否在控 质控规则参见生化室室内质控操作规程 SOP 文
5、件 1 11 1 计计算算方方法法 以 TruCal U 复合校准品 ALT 校准值 校准仪器后 在病人结果可报告范围内 仪器直接报告 可靠的检测结果 以U L 报告 1 12 2 参参考考值值范范围围 4 不含磷酸吡哆醛 含磷酸吡哆醛 女性 31U L 10 35U L 男性 41U L 10 50U L 参考值因性别 年龄 饮食和地域的不同而有所差 别 根据好的实验室经验 每个实验室应建立自己的参 考值 1 13 3 临临床床意意义义 1 1 2 2 丙氨酸氨基转移酶 ALT 旧称谷 丙转氨酶 GPT 天门冬氨酸氨基转移酶 AST 旧 称谷草转氨酶 GOT 它们是氨基转移酶类的典型代 表
6、氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给 酮酸的反 应 ALT 是肝脏的特异性酶 仅在肝胆疾病时显著升高 而 AST 水平的升高和心肌或骨骼肌损伤 以及肝组织损 害等都有关 因此同时进行ALT 和 AST 的检测 可用 于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤 AST ALT 比率用 于肝病的鉴别诊断 比率 1 和严重肝病有关 常见慢性肝病 1 14 4 操操作作性性能能 14 1 线性范围 4 800U L 14 2 精密度 精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法 AU1000 批内精密度小于 3 总精密度小于 3 用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则 不含磷酸吡哆醛 批内 精密
7、度 n 20 x U L s U L CV 天间 精密度 n 20 x U L s U L CV 样品 1 22 80 703 08 样品 1 22 21 386 22 样品 2 42 60 681 60 样品 2 44 81 172 62 样品 3 99 30 920 92 样品 3 1011 021 00 含磷酸吡哆醛 批内 精密度 n 20 x U L s U L CV 批间 精密度 n 20 x U L s U L CV 样品 1 33 30 992 96 样品 1 33 81 253 71 样品 2 72 11 361 88 样品 2 72 02 042 83 样品 3 1331 7
8、61 32 样品 3 1282 772 16 14 3 方法学比较 不含磷酸吡哆醛 本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒 y 与某商品化试 剂盒 x 同时对 78 个样品进行 ALT 活力检测 将检 测结果作方法学比较 其统计结果如下 y 1 00 x 0 00U L r 0 999 含磷酸吡哆醛 本公司含磷酸吡哆醛的试剂盒 y 与某商品化试剂 盒 x 同时对 80 个样品进行 ALT 活力检测 将检测 结果作方法学比较 其统计结果如下 y 1 00 x 0 00U L r 0 994 14 4 灵敏度 本试剂的检测限为4U L 14 5 病人结果可报告范围 4U L 800U L 1 15 5 超超
9、出出范范围围结结果果处处理理 本法对 ALT 活力检测的最大 A min 在 340 334nm 为 0 16 在 365nm 为 0 08 当样品测定值超过上限时 应将样品用9g L 氯化钠 溶液作 1 9 稀释 重新测定 结果乘以10 1 16 6 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7 方方法法局局限限性性 17 1 本法对 ALT 活力检测的最大 A min 在 340 334nm 为 0 16 在 365 nm 为 0 08 当样品测定 值超过上限时 应将样品用9g L 氯化钠溶液作 1 9 稀释 重新测定 结果乘以10 17 2 干扰物质 当样品中抗坏血酸浓度 1704 m
10、ol L 胆红素浓度 684 mol L 血红蛋白浓 度 4 00g L 甘油三酯浓度 22 6mmol L 时没有观察 到干扰 1 18 8 补补救救措措施施 当仪器发生故障时 迅速联系仪器厂 家进行维修 1 19 9 参参考考文文献献 1 Thomas L Alanine aminotransferase ALT Aspartate aminotransferase AST In Thomas L editor Clinical Laboratory Diagnostics 1st ed Frankfurt TH Books Verlagsgesellschaft 1998 p 55 65
11、 2 Moss DW Henderson AR Clinical enzymology In Burtis CA Ashwood ER editors Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3rd ed Philadelphia W B Saunders Company 1999 P 617 721 3 Bergmeyer HU Horder M Rej R International Federation of Clinical Chemistry IFCC Scientific Committee Analytical section approved
12、recommendation 1985 on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase L alanine 2 oxoglutarate aminotransferase EC 2 6 1 2 J Clin Chem Clin Biochem 1986 24 481 95 4 Lorentz K Rohle G Siekmann L Einfuhrung der neuen Standardmethoden 1994 zur Bestimmung der katalytischen Enzymkonzentrationen bei 37 DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995 26 190 2 2 20 0 其其他他 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按 检验科废物处置管理规定 执行
