《分子生物学及其检验-名解&amp；ampamp；问答（复习资料版）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子生物学及其检验-名解&amp；ampamp；问答（复习资料版）（22页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、<p>基因（分子）诊断：采用分子生物学的方法，在水平或水平对基因的结构和功能进行分析，从而对疾病做出诊断的方法。基因组学：对所有基因进行基因组作图、核算序列分析、基因定位、和基因功能分析的一门基因组：一个单倍体生物所有的全部。结构基因：编码或蛋白质的核苷酸序列。转录单位：从启动子到转录终止子之间的节段。基因表达：是指携带的遗传信息通过转录传递给，通过翻译将基因的遗传信息在细胞内合成具有生物功能的各种蛋白质过程。基因表达调控：指对基因组中某一基因或一些功能相近的基因表达的开启、关闭、和表达强度的直接调节。开放阅读框（）：始于起始密码子并终于终止密码子的一串密码子组成的核苷酸序列。启动
2、子：与聚合酶识别、结合和转录起始所需的序列。序列： 5 一端在起始密码子上游311处，含短序列，容易与16 3" 一端含序列互补配对的序列称为序列操纵子：由一组功能相关的结构基因连同其上游调控序列共同构成一个转录单位。重复基因：一段序列有2个或2个以上，可以编码两种或两种以上多肽链。质粒：细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。断裂基因：基因组由编码序列和非编码序列间隔组成。重复序列：多拷贝的相同或近似片段。分段基因组：病毒基因组由数条不同的核酸分子组成，多见于病毒。重组：不同来源的，通过磷酸二酯键连接而重新组合成新的分子的过程。重组技术：在基因水平上，将
3、目的在体外重组于能自我复制的载体分子上，然后将重组导入宿主细胞中进行增生，以获得大量的片段或得到相应的蛋白质产物的过程。限制性核酸内切酶：识别和切割双链分子特异序列的核酸水解酶粘性末端：指限制酶错位切开两条对称轴互补双链所产生的末端平末端： 指限制酶错位切开两条对称轴互补双链所产生的末端回文结构：指双链分子上按对称轴排列的反向互补序列载体：携带目的片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运转工具多克隆位点（）：指具备多个限制酶的单一识别位点克隆载体：能够携带目的片段进入宿主细胞进行扩增获得大量目的的一类分子表达载体：能够携带目的片段进入宿主细胞进行扩增和表达，获得目的蛋白质产物的一类分子增强子：能加强
4、其上游或下游基因转录的序列遗传密码：上按5到3方向排列的每三个核苷酸称遗传密码多顺反子：一个结构基因转录产生一条，编码几条功能相关的多肽链单顺反子：一个结构基因转录产生一条，编码一条多肽链的生成顺式作用原件:凡能激活或阻遏基因转录的序列反式作用因子：与顺式作用元件直接或间接相互作用，能调节基因转录活性的蛋白质因子。基因组文库：指含有某种生物全部基因随机片段的重组克隆群。文库：经逆转录酶催化生成后，再将这些装入载体构建成的含各种克隆的克隆群克隆： 聚合酶在扩增目的的同时能不依赖模板在扩增产物两端加上两个游离的“A”，与切口处人工加上游离的“T”的载体即T载体连接，这种克隆方式称定向连接：使外源片
5、段定向插入到载体分子中的克隆方案感受态细胞：细胞膜结构改变，通透性增加并具有摄取外源能力的细胞转化：将质粒或以质粒为载体的重组分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过逆转录：以为起始材料经逆转录产生，再以为模板进行的扩巢式：先用一对外侧引物扩增含目的的大片段，用扩增产物作为模板再用第二对内侧引物再进行扩增，大大提高扩增效率和产物的特异性。多重（）：在一个反应体系中加入多对引物，同时扩增出多个核酸片段，由于每对引物扩增的片段长度不同，可用电泳加以鉴别。不对称：使用两种不同浓度的引物进行，生成单链用于测序。：将产物双链（）变性为单链()，加样于非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，由于分子在凝胶中的电泳
6、迁移率与其分子量和空间结构有关，而空间结构又与序列有关。因此，电泳结束后，带位置的差异即可反映出产物序列的差异。荧光定量：通过荧光信号对过程中的产物量进行实时监制，精确计算出的初始模板量循环阈值（）：扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。核酸分子杂交技术：用标记的已知或片段（探针）来检测样品中未知核酸序列（形成异源双螺旋），再经显影或显色的方法，将结合核苷酸序列的位置或大小显示出来。探针：是指能与特定核酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸链。印记杂交：检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的分子。印记杂交：检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的
7、分子。菌落杂交：检测固定在膜上，经裂解从菌落体释放的分子。斑点杂交：检测固定在膜上的或分子。原位杂交：是以特定标记的已知序列的核酸分子作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其检测的方法。印记：检测经凝胶电泳分离并转移至膜上的蛋白质分子。基因芯片（芯片，微阵列）：将大量的片段有序的，高密度的排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。多态性：由于不编码蛋白质的区域和没有重要调节功能的区域发生中立突变，这些中立突变构成的变异称为多态性。：存在于非编码区或内含子中，以三个核苷酸为重复单位的高度多态性序列，是一个非常重要的遗传标记。：单个核苷酸变异而形成的分子多态。：由于基因的突变导致某一限制性
8、内切酶的酶切位点序列产生或消失，经电泳分离出大小不同的片段。病毒癌基因：是病毒从宿主中获得的、以不同方式融合进入病毒结构基因中，使靶基因发生恶性转化的特定序列。细胞癌基因：存在于生物正常细胞基因组中与病毒癌基因结构相似的基因，激活或可导致疾病的发生。抑癌基因：存在于正常细胞中的一类可抑制细胞过度增长与增值的基因，有潜在的抑癌作用。当此类基因有突变、缺失、失活时，可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。染色体与质粒分离原理：利用染色体与质粒变性复性差异，加碱后两者都变性再加酸质粒分子小，可复性，在用酚抽提反应原理：依据变性与复性原理，在模板，引物和四种存在对的条件下，依赖于聚合酶的酶促反映，有变性退
9、火延伸三个步骤载体具备条件:能自主复制，具备筛选标记，具备多克隆位点，（拷贝数高，有较高遗传稳定性，分子量小，易于转化，配备与宿主细胞相适应的调控元件如启动子，增强子）引物设计原则：1两条引物分别位于被扩增片段的两端，与模板正负链序列3末端互补。2长度为1840个核苷酸。3两条引物之间不应存在互补序列，避免形成引物二聚体。4引物的碱基组成应平衡。5引物的5端可被修饰。化学裂解法测序：原理1.用放射性核素标记待测侧链末端即3末端 2.将标记分为G，C4个反应体系 3.用不同的化学试剂处理不同反应体系，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的片段的混合物 4.电泳分离，通过放射自显影可读
10、出序列原核表达载体分为：非融合型表达载体，分泌型表达载体，融合蛋白表达系统核酸分子杂交按作用方式可分为 固相杂交（菌落原位杂交，斑点和狭缝杂交，印记杂交，印记杂交）液相杂交（吸附杂交，发光液相杂交，液相夹心杂交，复性速率液相杂交）原理：野生型等位基因的变性为单链，等位基因特异探针和通用探针分别与之杂交，由于野生型等位基因特异探针与通用探针与靶序列完全互补，连接酶将它们连接成一条链，突变型等位基因通用探针与靶序列没有完全互补，因此连接酶不能将它们与通用探针连接起来。信号放大技术检测方法：液相杂交检测方法，杂交捕获系统和支链检测技术遗传性疾病分子诊断：直接诊断策略，基因多态性连锁分析，基因突变的定
11、量，基因表达分析，检测性描述乳糖操纵子的正负调控：结构：调节基因+启动子+操纵基因+结构基因；负调控：无乳糖时：调节基因表达，形成诱惑性调节，并与操纵基因结合，阻止了转录；有乳糖时：调节基因表达，形成有活性调节，但有活性的四聚体在小分子物质的变构调节的作用下，失去活性，形成无活性的四聚体，无法与操纵基因结合，基因能顺利的转录；正调控：低葡萄糖时，浓度，与结合成复合物，结合在位点，促进结构基因的转录；要让乳糖操纵子表达的基础：高乳糖、低葡萄糖质粒的特征：结构：时环状超螺旋分子；自我复制；质粒具有不相容性，不同的质粒里同一个子细胞，彼此竞争，只有一种质粒稳定存在；可扩增性；可转移性：质粒可以从一种
12、宿主细胞导入另一种宿主细胞；带有选择性标记：氨苄青霉素蓝白斑筛选：在的诱导下，产生具有完整酶活性的-半乳糖苷酶，将无色的水解为蓝色产物，形成蓝色菌落，当外源基因插入Z基因的克隆位点，无-互补能力，形成白色菌落，成为蓝白斑筛选核酸的分离与纯化遵循的原则：保持核酸一级结构的完整性；尽可能提高核酸品质的纯度核酸分离用酚抽提法，原理，以含，酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，用8.0的饱和分抽提获得粗制品核酸的纯化常用的方法：琼脂糖凝胶电泳法A260280是什么标志：核酸纯度标志，纯1.8 纯2.0 核酸浓度的鉴定：紫外分光光度法（适用于浓度大于0.25的核酸溶液）：核酸具有共轭双键，对波长26
13、0左右的紫外光有教强的吸收特性；在波长260的读数，可用来计算样品中核酸的浓度，每的钠盐的吸光度值为0.02；A260=1时，双链含量为50；单链或含量为40；单链寡核苷酸含量为33在基因组的琼脂糖凝胶电泳中，发生拖尾，提示什么：少量降解在点的琼脂糖凝胶电泳中，点样孔附近有着色带说明什么：有少量存在分离纯化后的的保存：一般将保存于0.8的缓冲液中，减少的脱氨反应，抑制酶的活性，使在-70，可储存5年以上分离纯化后的的保存：是抑制酶，加入焦炭酸二乙酯，等碱裂解法提取质粒时，溶液、，酚氯仿，无水乙醇，70%乙醇溶液的作用：溶液()：为二价金属离子螯合物，可以螯合酶激活所需要的2+、2+等二价金属离
14、子，从而抑制酶的活性，并且有降低细胞膜稳定性的作用；溶液()：使变性、解聚和降解酶的活性，主要作用是降解细胞反复化脂质和，使其具有结合的物质沉淀，从而达到分离作用；酚：一种强蛋白变性剂，可使变形、沉淀，也可抑制酶的活性；(8.0)：使能顺利进入水相而避免其滞留于蛋白质层；无水乙醇：有盐的条件下，沉淀核酸，利用核酸与K、及铵根等阳离子形成盐，屏蔽了带负电43-集团，使核酸分子聚集在一起而不溶于有机溶剂的特性；70%、75%的乙醇洗涤：盐类可使核酸沉淀，但往往含有少量共沉淀的盐，用其洗涤出去盐类试述反应原理既反应体系：变性退火延伸荧光定量原理：反应体系中加入荧光集团利用荧光信号对过程中的产物量进行
15、实时监测，将待检样品与一系列稀释的标准对照一起扩增，获得过程的动力学曲线，通过标准曲线精确的计算出初始模版浓度荧光定量中荧光产生机制：探针类（探针）；非探针类：荧光染料与所有的双链结合，对没有选择性、特异性没有探针类好探针：包括一对引物和一条探针，探针只与模板特异性结合，其结合位点在两引物之间，5有荧光报告基因3荧光卒灭基因。随进行，酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，外切酶活性将探针切断，报告集团原理淬灭集团，产生荧光信号。 重组技术的目的和基本步骤：目的：获得目的基因的大量拷贝，进一步获得表达产物；基本步骤：分离载体和目的基因；切割载体和目的基因；连接载体和目的基因形成一个重组；转化：将重组导入受体细胞；筛选出含有重组的阳性克隆作为基因工程重组技术的克隆载体所具备的条件：具有复制能力，保证重组在宿主细胞内独立复制；具有筛选标志：抗药性、酶基因；具有多克隆位点供外源片段插入；具有较高的遗传稳定性；具有较多的拷贝数；分子量小，易于转化；（表达载体的条件）配备与宿主相适应的调控元件，如启动子、增强子和前导序列重组技术基本步骤：目的基因获取载体的选择将肽</p>
