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1、第五模块 生物检测技术 第九章 药品的生物检定法 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 知识目标 理解热原检查法、细菌内毒素检查法的含义 ；掌握无菌检查法、微生物限度检查的主要 方法；理解药物异常毒性检查的方法 技能目标 能检查药物制剂的热原、细菌内毒素；能进 行药物的无菌检查；能测定药物的微生物限 度；能检查药物的异常毒性 学习目标 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 复习提问 1什么是管碟法？管碟法操 作的主要流程？ 2双碟的制备方法？ 学习目标学习
2、目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 新课大纲 本节主要内容： 热原检查: 1.简述 2.具体操作方法 内毒素检查: 1.简述 2.具体操作步骤 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 一、概 述 用整体动物的体内试验或离休 器官、组织、细胞等的体外试验来测定 药品生物活性，以反映其临床功能及效 价的一种方法。 1.生物检定法 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 常见药物 的生物检 定法 肝素 绒促
3、性素 缩宫素 胰岛素 洋地黄 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 二、热原检查法 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 含热原的注射液注入家兔体 内，引起体温升高40度以上 ，甚至出现昏迷、休克、死 亡的现象。 2.什么是热原反应？ 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 3.热原的基本性质？ 水溶性、不挥发性、 耐热性、滤过性 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课
4、内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 4.污染途径 溶剂带入 原料带入 容器用具带入 制备过程污染 灭菌 不完全 使用带入 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 5.除去方法 吸附法、离子交换法、 反渗透法、超滤、高温 、酸碱 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 6.检查方法 家兔致热实验法 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 7.具体 步骤 静脉注入药物，观察家兔体温升
5、 高情况，超过限度认为有热原反 应 供试用家兔 试验前的准备 检查法 结果判断 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 3只兔：1小时测1次，共3次 ，最高-最低升高的温度 结果：均升高在0.6度以下 且升高的总数在1.4以下 认为符合规定 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 智能热原仪 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容
6、新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 温度探头 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 本法是利用鲎试剂来检测或量化由革 兰氏阴性菌产生的细菌内毒素（单位 以EU表示），以判断供试品中细菌内 毒素的限量是否符合规定的一种方法 。 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝 胶法和光度测定法。 三、细菌内毒素检查法 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或 半定量内毒素的方法。 分为浊度法和显色基质法。 浊度法系利用检
7、测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊 度变化而测定内毒素含量的方法。可分为终点浊度 法和动态浊度法。 显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中 产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测 定内毒素含量的方法。可分为终点显色法和动态显 色法。 凝胶法 光度测定法 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 内毒素与鲎试剂起 反应产生凝胶，观 察到浑浊。 什么是鲎试 剂？ 什么是细菌内 毒素？ 1.凝胶法原理 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 来源：G-细胞壁外
8、膜上 的脂多糖（LPS）成分， 所以内毒素是化学成分不 是简单的生命体，所以灭 内毒素时应与其他成分区 分。 什么是细菌内毒素？ 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 化学结构： a b c a(o特异性多糖链)类似于抗原，亲水 性 b 核心多糖 c类脂A，疏水性，是生理活性中心， 实验证明，将a 和 b 切下来组合后与 c部分产生的效果相当，所以认为c是 生理活性部位。 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 特点：根据其特殊结构， 疏水基团易粘合在容器的
9、器 壁，而在水中的浓度就变低 ，另一方面疏水端相连结后 ，亲水端再与别的疏水端相 连而成大的集团，使其在水 中的分布不均匀，所以药典 规定在使用时要经过振荡及 混旋15分钟，并立即做下一 步操作，但这种现象只限于 人工提纯品。 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 与热原的关系：广义热原包 括内毒素、生物酶、蛋白质、 化学物质（后三种成分也有致 热作用，但不引起器质性的病 变），而狭义的热原就等于内 毒素（引起器质性的病变）。 所以药品检测时一般认为没有 内毒素，合格时，热原检测也 合格。 学习目标学习目标 复习提问复习提问
10、 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 分类： 分国家标准品：（简写RSE或 NSE）效价：9000，单位Eu,由 中检所生产，代号981就是指98 年1月生产。 和工作标准品：（CSE和WSE ）效价：100200，也有50或 70，单位Eu，到中检所购买， 是法定试剂。 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 拉丁文TAL（东方鲎）、 LAL（美洲鲎），血液是蓝 色（还有蝉）。被称为是活 化石，大约生活在4亿年前 至今，体态基本没有变化， 品种有10多种，但能作为 鲎试剂（血液变形细胞溶解
11、 物的无菌冷冻干燥品）用的 只有35个，主要生活在 日本沿海、中国沿海、北美 沿海，在中国是二级保护动 物，在日本是特级保护动物 。不能人工养殖。 什 么 是 鲎 试 剂 ？ 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 发现：1962年，美国的一个研究员 Bang在海滩散步，发现很多鲎（也叫大 王蟹）死了，他拿针管吸了海水，注入 一个活鲎体内，发现其很快死亡，1963 年写了一篇“鲎的一种致死疾病”文章，向 研究所反应，争取一些经费以此为主要 研究方向，他的助手年轻人levin和他一 起研究，发现G-细胞壁外膜上的脂多糖 （LPS
12、）成分引起鲎致死，共同发表文 章“鲎的酶反应机理”。 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 反应机理：鲎试剂中含有C、B 因子，在脂多糖存在时成为激活因 子，使凝血酶原变为凝血酶，又使 凝固蛋白原变为凝固蛋白（成凝胶 状），发生这样的生化反应。而口 服与输入血液的剂量相比100万倍 ，所以人口服内毒素不会发生发热 反应，另一方面口服时人体也有一 种屏障作用。日本认为血中 0.1Eu/ml,就会有发热反应。 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 凝胶法的灵敏
13、度低：0.5 Eu/ml，规格 ：0.1 ml 定量法高，0.06Eu/ml，工艺在凝胶法 基础上发展而来，0.6 ml，也有1.2和 3.1 ml。 检测方法区别： 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 内毒素小于0.03 Eu/ml的无菌 注射用水，鲎试剂反应的PH ：68，而工业生产要求为 PH：57，所以不能以企业 生产的灭菌 注射用水来作为 检查用水，必须是中检所指 定生产。药典规定凝胶法小 于0.03 Eu/ml，定量法小于 0.005 Eu/ml，买时要配套， 与鲎试剂买一个厂家生产的 。 关于检查用水 学习目
14、标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 内毒素检查法 内毒素鲎试剂检查用水 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 2.定量分析方法 预设限值法： OD为0.02 什么是OD? 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 OD： 就是吸光度，仪器采用透 光率下降到95%的点作为 反应时间临界点，将95% 取负对数正好是0.02 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课
15、小结本课小结 课后习题课后习题 3.实验前期工作 器材准备 所需试剂 用具的处理 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 稀释内毒素标准品 制备鲎试剂 制备标准曲线 生成标准曲线 4.具体操作 示例 头孢曲松钠注射液内毒素测定 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 稀释内毒素标准品 0.2ml 0.2 0.2 0.2 1.8ml水 1.8 1.8 1.8 100Eu/ml 10 1 0.1 0.01 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 制备鲎试剂 制备标准曲线 10支小管分加 0.1ml鲎试剂 2个 管阴 性加 水 8个管加内 毒素标准品 学习目标学习目标 复习提问复习提问 新课大纲新课大纲 新课内容新课内容 本课小结本课小结 课后习题课后习题 生成标准曲线 待最后一个浓度点的反应曲线 超过0.02限值后，用鼠标点
