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1、1 C8学习目标 1 肠科菌分类与主要种类 属 通性 检验一般程序2 沙门菌所有内容掌握3 大肠菌鉴定依据 致病性大肠菌分组 卫生细菌学意义4 志贺菌鉴定依据 标本采集注意5 变形菌 鼠疫菌 克雷伯菌特点 2 第八章肠杆菌科第1节概述 一 分类与命名31个属 120多个菌种 P102表8 1 对人类致病力强的四种 属 埃希菌 志贺菌 沙门菌 耶尔森菌 与医院感染有关的八种条件致病菌 属 枸橼酸杆菌 克雷伯菌 肠杆菌 泛菌 沙雷菌 变形杆菌 普罗威登菌 摩根菌 其他 巴特维菌 布丘菌 西地西菌 爱德华菌 欧文菌 爱文菌 哈夫尼亚菌 克卢瓦菌 勒克菌 勒米诺菌 穆勒菌 肥杆菌 普拉奇菌 光杆菌 普
2、城菌 兰恩菌 塔特姆菌 致病杆菌 约根菌 3 为了量化肠杆菌科成员在临床标本中出现的概Farmer等根据60篇文选中的资料 提出了一个 相关频率 relativefrequency 0 10级的评估法 相关频率10 最常见的细菌 1种 大肠杆菌相关频率8 十分常见的细菌 2个种 肺炎克雷伯菌 奇异变形杆菌相关频率7 常见菌 弗氏枸橼酸杆菌 阴沟肠杆菌 产气肠杆菌 粘质沙雷菌 产酸克雷伯菌等相关频率6 有时可见 如异型枸橼酸杆菌 聚团肠杆菌 蜂窝哈夫尼亚菌等 4 相关频率5 不常见 如液化沙雷菌 产碱普城菌 无丙二酸盐 枸橼酸杆菌等相关频率4 少见 每年至多几次 如迟钝爱德华菌 红色沙雷菌 摩氏
3、摩根菌等相关频率3 很少见 一年以上遇到1次 如坂崎肠杆菌 弗氏耶尔森菌 雷极普城菌相关频率2 十分罕见 大多数实验室1年也不见到1次 如戴氏西地西菌 痰踏特姆菌等相关频率1 已知只有少数临床分离物 如无花果沙雷菌 赖氏西地西菌相关频率0 临床标本中未曾发现只从环境 昆虫和无脊柱动物中分离 如产粘变形杆菌 致病杆菌属等 5 二 临床意义 致 化脓性疾病 肺炎脑膜炎菌血症以及伤口 泌尿道和肠道的感染 还是医院感染重要病原 1 人类肠道外感染 大 肺克 产酸克 产 阴 黏质沙雷菌 伤口 泌尿道 呼吸道和中枢神经系统感染 医院感染 鼠疫2 人类肠道感染 埃 志 沙 耶急 慢性肠道感染 食物中毒 旅行
4、者腹泻 肠热症 6 肠科常见菌致病性比较属名所致疾病致病因素埃希菌属肠外感染肠道感染菌毛 K 肠毒素 内沙门菌属伤寒 副伤寒 肠热症 Vi Ag 内 肠毒素菌 败血症胃肠炎携带者志贺菌属细菌性痢疾 急 慢 携带者菌毛 内 外毒素耶尔森菌属鼠疫肠炎菌 败血症FI V W pgm C F Pu T 内 鼠毒素枸橼酸杆菌属腹泻菌血症脑膜炎脑脓肿内克雷伯菌属肺炎肠炎菌血症脑膜炎泌尿道感染荚膜变形杆菌属泌尿道感染菌血症脑膜炎肠炎食物中毒菌毛 内 7 三 生物学特性 1 形染结构特征 G 杆菌 多有周H 有菌毛 无芽胞 部分菌株有荚膜 包膜 2 培养特性 兼 低求 液培混浊 多用 选择鉴定培养基 如 SS
5、 EMB MAC 中国兰等 3 生化反应活跃 触 氧 葡F硝 G 杆 定科依据 痢疾志贺菌1型 发光致病杆菌触 欧文菌 致病杆菌 臭鼻杆菌 多源杆菌属和耶尔森菌属某些菌株硝酸盐 经典 KIA MIU IMVCUSPLOA靛甲伏枸尿硫苯赖鸟精 8 4 Ag结构 复杂 O Ag 菌体抗原 LPS 内毒素 耐热 H Ag 鞭毛抗原 Pro 不耐热 表面Ag ViAg KAg等 可阻止O AgAb反应 5 抵抗力 不强 耐胆盐 9 四 M学检验 一 标本采集肠外标本 取自感染部位 肠道标本 早期新鲜脓血黏液 二 检验程序 三 标本直接检查 难以鉴别 四 分离培养生化 常规 试剂盒 与鉴定血清学分子生物
6、学 五 抗菌药物敏感试验 六 抗体检测 10 G 杆菌鉴定一般操作流程 标本 分离培养 G染色镜检 G 杆菌 SS MAC EMB 中国兰 普 血 纯培养 KIA MIU H L 增菌培养 初步多价血清凝集 GN SF TT 葡O F 氧化酶 触 硝酸盐 F 接种肠杆菌科细菌生化编码鉴定管 15E 血清学玻片凝集 多价 O K H单价 编码册 各菌鉴别特点 11 分离培养 选择性培养基原色 SS红 EMB淡紫兰 MAC淡红 中国兰紫蓝特点 加抑制剂促进剂 乳糖指示剂致病菌 非 乳 无色菌落 有色菌落非致病菌菌落颜色 SS MAC 远藤氏 红色EMB 紫蓝带金属光泽中国兰 紫蓝 12 生化反应K
7、IA 克氏双糖铁斜面原色 为浅红色 PH7左右 中性红指示剂用途 1 增菌2 生化反应 结果判断 斜面 乳糖 黄 红 底层 葡萄糖 黄有气裂 黄 红 动力 穿刺线模糊 清晰 H2S 黑柱 无 MIU 动力吲哚尿酶原色 黄红色 酚红指示剂结果判断 1看穿刺线 M 2看颜色 红U 3加I试剂红I 13 鉴定步骤 定科 属 种 群 型 1 定科 触 氧 葡F硝 G 杆周H或无2 定属 1 依PAD VP试验结果分三组PAD VP第一组 埃志沙枸爱第二组 克肠哈泛沙耶第三组 变摩普 2 依PAD 葡萄糖酸盐试验结果分三组 变普摩克肠沙哈埃志沙枸爱耶苯丙氨酸脱A酶 葡萄糖酸盐 14 肠杆菌科主要致病菌生
8、化特性比较表属名生化反应葡乳动IMVCUSLOA埃希菌属 沙门菌属 志贺菌属 耶尔森菌属 15 第二节埃希氏菌属种类 大肠杆菌 1885年德Escherich发现一 临床意义致病物质 侵袭力 K 菌毛 内 肠毒素 LT ST 所致疾病 肠道外感染 各种 炎 肠道内感染 腹泻 16 五组致病性大肠杆菌比较 1955年Neter提出肠致病性大肠杆菌概念 种类及英文缩写致病因素疾病产毒素性大 定植因子抗原 CFA或称粘附素 儿童急性腹泄 ETEC肠毒素 ST及LT 似霍乱肠毒素 旅游者腹泄肠致病性大 粘附因子 EAF 流行性婴幼儿腹泄EPEC微量ST LT 又称 EPEC肠炎 夏季腹泄 婴儿霍乱 肠
9、侵袭型大 侵袭力 毒力标记Ag 肠炎 似志贺氏菌 EIEC食物中毒肠出血型大 志贺氏菌样毒素 出血性肠炎EHEC N Cell 肠毒 肠道聚集 粘附性大 外毒素小儿顽固性腹泄EAggEC 似志贺氏菌样毒素 损伤肠细胞 旅行性腹泄 17 二 生物学性状 1 G 短小杆菌周H有菌毛微荚膜 2 低求 普平长灰白菌落 血平 溶血选择性培养基呈有色菌落 SS MAC粉红色 EMB蓝紫色 金属光泽3 葡乳麦甘 蔗 IMVCUS KIA 斜A底A 气 MIU 4 抗原 O K H 18 三 微检标本 程序 报告 致病性大肠杆菌检查 18分离培养 生化反应 血清学分型 毒力检测EPEC 生化反应 血清学分型
10、O H分型 ETEC 生化反应 血清学分型 肠毒素LT ST检测EIEC 生化反应 血清学分型 毒力测定 生化似志 H 乳 迟 葡 但赖 L 鉴别 醋酸盐 葡萄糖胺利用 粘质酸盐产酸 毒力试验 Sereny 豚鼠眼结膜试验 EHEC 生化反应 血清学分型 O157H7最常见 山梨醇麦康凯 SMAC 培基 动 山 无色菌落 19 大肠埃希菌鉴定依据1 先确定为肠科菌 G 杆状cb 触 硝 葡F2 菌落扁平有色不透明3 KIA 底A 气斜A无黑柱 MIU IMVCUSLOA 详细生化反应结果查编码册得埃希氏菌属4 致病大肠菌鉴定 血清学反应分型 毒力检测 20 第三节沙门氏菌属一 分类种类 P11
11、3表8 7二 临床意义致病物质 侵袭力 Vi Ag 内毒素 致肠热症主要因素肠毒素 类似ETEC的LT及志贺菌ST所致疾病 胃肠炎 食物中毒 鼠 猪 肠炎沙门菌菌 败血症 猪 丙 鼠 肠炎沙门菌肠热症 伤寒 甲乙丙副伤寒菌带菌者免疫性 牢固 CMI 21 三 生物学性状 1 G 杆菌周H 菌毛 2 抗原 O H 表面 Vi M 5 抗原3 变异性 S R H O 位相 V W变异4 菌落无色或淡或中心黑 小 半透葡麦甘 乳蔗 IMVCUSLOA KIA 斜K底A或A 气 MIU 5 抵抗力 不强 22 23 各抗原特点Ag菌体 O 鞭毛 H 毒力Vi化学成分糖 脂 蛋蛋白质LPS存在部位菌体表
12、面鞭毛O以外特异性较低 分群一相高 二相低用噬菌体分型与Ab凝集颗粒状絮状热耐敏敏其它每种菌有数种OAg 酒精石炭酸破坏少数初分离甲醛可固定时有人工培养消失Vi 可阻止OAg Ab凝集 并有抗吞噬作用 24 常见沙门菌的抗原组分组菌名O抗原H抗原 1相 2相 A组甲型副伤寒沙门菌1 2 12a B组乙型副伤寒沙门菌1 4 5 12b 1 2鼠副伤寒沙门菌1 4 5 12i 1 2C组丙型副伤寒沙门菌6 7 Vic 1 5猪霍乱沙门菌6 7c 1 5D组伤寒沙门菌9 12 Vid 肠炎沙门菌1 9 12g m 25 四 微检 一 标本采集原则 1 依病程不同采相应标本 第1 2周 血液 第2 3
13、周 粪便和尿液 全程可取骨髓 2 未用药前采 无菌器皿装 及时送与检 二 检验程序 三 标本直接检查显微镜检查抗原检测 胶乳凝集法 四 分离培养与鉴定 26 增菌液 SF 亚 GN TT 四 胆汁葡萄糖肉汤 血骨髓标本 分离培养基 MAC EMB SS亚硫酸铋琼脂 BS 适于伤寒沙门菌 孔雀绿琼脂 其他沙门菌 27 鉴定病原体检查分离鉴定 形态 菌落 生化反应血清学鉴定 玻片凝集定抗原1 以A F多价O诊断血清定属原则2 用沙门氏菌单价因子O诊断血清定群3 确定鞭毛抗原以分型 先一相后二相 4 查Vi Ag特异抗体的检查 WT 原理 方法 结果 报告 28 WT原理 直接试管凝集试验 测抗体及
14、效价 抗原 伤寒菌0 H 甲副H 乙副H 4种 方法 影碟WJ12及实验课 结果 凝集程度 效价结果解释注意 影碟KJ20 Eg 12345678效价 TO TH PA PB 诊断 29 或 TH 伤寒 H 或 PA 则 感染副甲可能性大 O 单项 或 PB 副乙 H 则 伤寒 副伤寒早期或沙门氏菌属其他细菌感染引起的交叉反应 H 则 感染伤寒 副伤寒的可能性小 TH 伤寒 O H 或 PA 则 曾经感染副甲 H 单项 或 PB 副乙或非特异性回忆反应 H 三项同时 则 疫苗接种的结果 30 Eg 30病人 甲乙丙丁戊己庚辛TO1 3201 6401 3201 6401 401 401 401
15、 40TH1 801 12801 801 401 3201 801 401 320PA1 401 801 1601 401 401 6401 801 160PB1 401 401 401 6401 801 401 3201 160诊断 31 伤寒沙门氏菌鉴定依据 1 符合肠杆菌定科依据 G 杆 葡F 氧 触 硝 2 菌落典型 SS EMB MAC 中国兰等选择性培养基 生长出无色或淡黄色或中心黑色 半透明菌落 3 生化符合 KIA底A无气斜K 葡 乳 MIU IMVCUSLOA 微量生化编码检索查为伤寒沙门氏菌 4 玻片凝集试验 能与沙门氏A F多价O诊断血清 Vi血清 O9 Hd因子血清凝集
16、 32 第四节志贺氏菌属一 分类A B C D四群 志 福 鲍 宋 二 临床意义致病因素 内 菌毛 外 志1和2型 所致疾病 菌痢 典型急性非典型中毒性慢性携带者免疫性 不牢固 33 三 生物学特性1 形态结构G 短小杆菌 无荚无H有菌毛2 Ag O 型与群特异性抗原 K 表面抗原 3 变异性 S R 耐药性 4 培养特性 低求一般条件 液体培基 均匀混浊 SS琼脂等 低凸齐无色半透易变 型生化 葡 乳 动 KIA底A无气斜K MIU IMVCUSLOA 5 抵抗力 低 敏酸 34 四 M检验 一 标本采送原则 发病早期 服药前 采脓血粘液便 粪尿要分开 及时送与检 存于30 的甘油缓冲盐水中 保存液 二 检验程序 三 标本直接检查显微镜检查 抗原检测 核酸检测 四 分离培养与鉴定增菌液 GN 分离培养 SS MAC EMB XLD 35 鉴定初步鉴定 形态结构菌落生化最终鉴定 全面生化 血清分型鉴别试验 志 大 志 动力 L 糖 黏多糖 醋酸盐 C 志 沙 动力 硫化氢 血清凝集志 类志邻单胞 动力氧化酶 血清学鉴定 志A D多价 A1 2 B1 6 C1 6 宋 毒力试验 豚鼠眼结
