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1、犬的人工授精技术,海洋畜牧兽医学院 徐继岳 xujiyue1982,发展史,1780年意大利生物学者斯帕兰兹尼（Abbe Spallanzani)用19g精液给母犬输精经过62天产出3只仔犬，这是用犬进行人工受精的开端，同时也正是由于这一成功的实验才揭开了家畜人工受精历史的序幕。 1782年罗西(Rossi)重复这种实验也得到4只仔犬。但是在以后的近100年间虽然其它家畜的人工受精技术得到迅速的发展，而犬的人工受精却很少有人问津。,原因： 可能有以下两个方面：其一是公犬一次射出的精子数比其它家畜少，最多够配2至3只母犬；其二是各品种协会对人工受精繁殖出来的犬血统不予承认（除非事前取得协会繁殖委
2、员会特准）。 直到本世纪随着实验用的比格犬的大规模繁殖需要，才使犬的人工受精技术得到了实际应用。,总结采用人工受精方法繁殖犬的情况不外以下四种： （1）由于生理上或心理上的原因使公母犬不能直接交配。 （2）由于公母犬双方所在的地理距离过远而不能直接交配。 （3）希望从某一杰出的公犬获得较多的后代。 （4）防止性病的传染。,犬的性成熟早于体成熟，一般小型犬成熟较早，大型犬成熟较晚。作为繁殖用犬，公犬须两周岁、母犬须20个月才适合初配。,母犬的生殖系统,（1）输卵管：短而细，长58cm，输卵管与子宫角的界限非常明显。 （2）子宫：子宫角直而细长，子宫体和子宫颈均较短。中等体形的成年母犬，子宫角背腹
3、稍扁，长1215cm，直径0.5一lcm。左右子宫角在骨盆联合前方自子宫体分出，位于腹腔内。妊娠后，子宫角中部弯曲并向前下方沉降，可抵达肋弓内侧。子宫体长23cm。子宫颈长1.52cm，后12突人阴道内，子宫颈管近乎垂直。 （3）阴道：阴道较长，在阴道前部，由于隆起的背侧纵褶几乎遮盖了子宫外口，以致导管不易插入子宫。,犬的发情和发情周期,（1）公犬的发情期 公犬无明显的发情期，性成熟的公犬，任何时期都可因性刺激而引起性欲。,（2）母犬的发情,母犬是单一发情动物，不反复发情，正常的每年发情两次，在每年春（35月间）、秋（911月间）各有一次。 母犬初次发情时，虽然已达到性成熟，但身体发育尚不完善
4、，实际管理中一般要求在母犬第2次发情时初配。而犬的初情时间，又因品种、饲养管理条件、遗传、环境等因素的影响而不同，早的有6月龄发情，晚的1518月龄发情，平均为1012月龄，发情周期大约为6个月。因此，我们一般在犬1618月龄时允许初配。,母犬发情的主要征候,1、行为变化 2、生殖道变化 3、卵巢变化,行为变化,食欲减少，烦躁不安，频频排尿，喜接近公犬； 发出求偶的吠叫，对周围事物反应迟钝； 阴户肿胀、潮红，流出伴有血液的红色黏液。,生殖道变化,发情期间，犬的阴唇肿胀，临近排卯时肿胀程度最高，然后渐渐消退。阴道的肌肉组织由紧张状态渐变为松驰，使阴道松软，变大，在排卵期变得最大，然后渐渐恢复正常
5、。同时，阴道壁和子宫内膜组织增生，伴随血液渗出，阴道流出血样物质，开始时呈暗红色或鲜红色，而后变淡，至排卵时呈淡淡的粉红色或无色，随后逐渐消失。,卵巢变化,卵巢上的卵细胞渐渐发育成卵子，分泌相应激素。,母犬的发情周期,可分为： 发情前期 发情期 发情后期 发情休止期。,各时期的表现,母犬的发情前期 一般为710日。表现为母犬外阴部充血肿大，从阴道中流出带有血液的黏液。 发情期 一般为412日。高峰期为发情期开始后的第13日到第17日。表现为外阴部充血肿胀显著，并分泌出带有黄红色的黏液，出血停止或减少，稍触其臀部，母犬就会将尾巴左右偏转，允许交配。高峰期是母犬的排卵期，是母犬交配的最佳时期，这一
6、时期交配，母犬最易受孕。 发情后期 表现为外阴部充血肿胀消失，一般维持大约2个月，然后进入发情休止期，如已怀孕，则进入妊娠期。 发情休止期 发情休止期在发情后期至下一个发情期之间，一般约为3个月。,母犬的发情鉴定,1 、血样液体监测法 2 、触摸观察外阴法 3 、阴道涂片镜检法 4 、公犬试情法 5、唾液检测法,1 、血样液体监测,在母犬发情期间，阴户会分泌出红色血样液体。日常管理过程中，从发现红色血样物质那天算起，待其颜色由深红色逐渐转淡，变为无色或粉红色时即可首次配种，最佳时间为颜色变为稻草黄色时。初产母犬一般在第1113 d；经产母犬在第911 d，随着母犬年龄的增长，其首次配种的时间逐
7、渐缩短。,2、触摸观察外阴法,母犬自发情之日起，阴门开始充血肿胀，逐渐肿胀到最大限度，随后阴户水肿程度开始减轻并变软，边缘刚开始收缩时即可配种。实际工作中，也可用手打开母犬阴户观察，当阴道内黏膜由深红或红色变成浅红色或桃红色时，以手触摸感觉阴道内壁及子宫颈口变柔软时配种较为合适。,3、 阴道分泌物涂片镜检法,母犬的阴道分泌物多是阴道上皮细胞，对发情期母犬外阴血性分泌物进行阴道涂片镜检，观察涂片中角化细胞数量，统计角化细胞占整个上皮细胞的百分率。当角化细胞数量占整个涂片细胞的80%以上时算起，第2 d即可确定为最佳配种时间。,分泌物检查采集,发情前期：在发情前期的初期的涂片上，上皮细胞主要是副基
8、细胞和小中间细胞，随后，副基细胞和小中间细胞逐渐减少，大中间细胞及角化上皮细胞的比例逐渐增加，偶见白细胞。,发情期：在发情期的阴道涂片上，观察到的主要是角化上皮细胞，根据角化的程度不同，有些角化上皮细胞还含有固缩的核，而另一些角化的上皮细胞核则完全消失。在发情期的末期，角化上皮细胞呈团块状或片状聚集，除角化上皮细胞外一般看不到其他细胞。,发情后期；发情后期阴道涂片的主要特点为可观察到大量的白细胞。在发情期的早期，可看到小中间细胞及大中间细胞。而在发情后期的晚期，白细胞的数量减少，副基细胞的数量将增加，且有时还可观察到细胞碎,泛情期；乏情期的阴道涂片上主要是小中间细胞及副基细胞，白细胞几乎不可见
9、。 排卵时间的确定：母犬排卵多发生在上皮细胞角化程度最高的第一天，白细胞完全崩解消失成不规则的碎片。阴道黏膜细胞层增生，表皮细胞80%-90%角化，核不明显。,4 、公犬试情,有少数母犬在发情期发情体征不明显，仅凭肉眼无法有效确定母犬合适的配种时间。此时宜采用公犬试情法来确定，以防止漏配。一般在母犬愿意接受公犬爬跨时的23 d后为最佳配种时间。 方法：发情期在母犬圈中放人1 只体质健壮、性欲旺盛、无恶癖的非种用公犬，发情的母犬表现出愿意接近公犬，弓腰举尾，后肢张开，频频排尿，有求偶动作等；没有发情的母犬不愿意接近公犬，没有求偶的动作，反而攻击试图爬跨的公犬。,5、唾液检测法,用干净的棉签在发情
10、犬的口腔内取少量唾液，将取得唾液的棉签按一个方向涂在载玻片上。风干约5分钟，让唾液干燥结晶。显微镜下观察。,当结果出现典型的羊齿状或松针状，主梗硬而粗分支密而长，为母犬的最佳配种期；但出现羊齿状和松针状不典型，主梗有弯曲，分支少而短则为配种期，可能受孕但是产子不多，可以停12d后再镜检；若出现气泡状则不能配种受孕。,结果判定,结果解读,图-1：图像呈密集交叉的羊齿状（蕨类植物叶状），约824小时，配种受孕可能性最大。 图-2：图像呈羊齿状（蕨类植物叶状）与斑点气泡状混合，提示为处在排卵期前或后的约12天，配种有可能受孕。 图3：图像呈斑点状或气泡状，为非排卵期。,这个是放大200倍左右的羊齿蕨
11、，下面的图片是放大400倍的羊齿蕨细节图。,附: 犬排卵检测仪器,这种仪器决定着大多数雌性动物的怀孕时期，因此它能够避免多次受孕，节约宝贵的时间，降低昂贵的兽医费。这是一个小型轻便的仪器，只需要一个 9 伏电力的电池。 排卵测定仪是检测动物阴道黏液的电阻变化。使用方便，只要把试管插入动物阴道，阅读显示数据就可以，并不需要任何专业技术。仪器的尾部是一个大大的容易把握的长柄，使得在使用时测试者很容易把握它，也有利于显示数据的阅读。 建议每天都做 1-2 次测试，连续几天，以保证检测的真实性。,操作方法,1、消毒探头 2、用纱布，棉花或卫生纸清洁探头.尤其是电极,清除电极上的粘液，粪便，尿液或毛。
12、3、发清除外阴的黏液以及毛发 4、把被测的犬放在容易测量的地方,使犬感到舒适,放松! 5、平缓插入外阴。插入大约一半长的探针，直到稍稍感到阻力-说明到宫颈口的位置.要根据具体品种和大小，选择插入的长度，宫颈口有最高浓度的粘液测量结果最准确。 6、插入探头最初在近似的角度45度 7、然后平缓插入. 8、然后旋转2-3半圈或完整的旋转1圈，使电极充分接触阴道粘液。不同地方测量结果都不一样，(不同时间分泌的黏液的测量都不一样)宫颈口测量结果最准确。因为宫颈口有比较新鲜(刚分泌)的黏液. 9、多测量几次,确保测量结果的准确! 10、平缓取出探头!,配种方法,配种方法 一般而言，犬在第1次配种后2 d，
13、需再配种1次，以提高母犬的受孕率，必要的时候在母犬接收配种期间可对母犬进行第3次配种。 1 、自然交配 2、 人工辅助交配 3、 犬的人工授精,1、 自然交配,将待交配的母犬和公犬放在一个开阔、僻静的地方，使公母犬有充分的时间相互了解和游戏，待公犬和母犬熟悉了以后，公犬即开始爬跨母犬，并完成交配。这种配种方法适用于有配种经验的公犬和母犬，配种时需要注意选择适当的交配时间、熟悉的交配场所，避免公母犬咬架和不必要的惊扰，有些犬还会选择偶像犬作为交配对象。,2、 人工辅助交配,犬的人工辅助交配方法多种多样，其技术核心是使公犬阴茎插入到母犬的外生殖道口，将精液输入到母犬子宫内部，完成精卵结合。 2.1
14、 拖举法将公母犬放在开阔、僻静、熟悉的地方，待公母犬之间熟悉以后，由一人保定母犬头部以防止母犬乱动和咬人，另一人由腹侧向上拖举母犬。当公犬爬跨时，通过拖举来调整母犬外生殖道口方向，使公犬阴茎顺利进入母犬外生殖道，以保证交配顺利完成。此法适用于大型犬，初次配种的公犬或母犬，公母犬体型相差太大等情况。需注意尽量选择犬熟悉的配种人员。,2.2 人工授精一般情况下，将采集好的精液进行初步检查，若符合授精要求即可将精液加入稀释液、等物质，以利于短时间的保存。然后，先将母犬保定，露出阴部，对犬的阴门及周围进行清洗、消毒。输精时一手分开阴唇，一手将输精管缓缓伸人到阴道内，边旋转边伸人，直到不能前进为止，然后
15、缓缓注入精液。输入完毕后倒提母犬10 min左右，以防止精液倒流。此种方法适用于公犬品质特别好时，或是由于非疾病原因造成母犬生殖障碍时。此外，在犬的发情配种期间还需要加强犬的运动和营养，注意饮水，提高犬舍及周围区域的消毒防疫水平，尽量不要使用激素类药物或其他对犬繁殖有伤害的饲料等，以保证犬群整体有较好的体况。,3、犬的人工授精,如果自然交配确实有困难，人工辅助也无法完成交配，或公母犬相距较远又需配种，或其他不能本交原因又非进行配种不可时，可实施人工授精。,操作方法,1、采精 2、检测精子活力 3、稀释 4、保存 5、输精,1、采精方法,（一）器材 1改制假阴道 用猪假阴道外壳截去两端，留用长约
16、15cm左右带气嘴的中间一段。内胎剪成长约20-25cm，安装后一端套上猪用乳胶漏斗，连接有刻度的10ml试管，收集精液用，或者在气温低的季节可用羊双层集精杯代用。装好热水后在气嘴上连接双联打气球，以便在采精过程中调节压力。 2手握采精器具 可用塑料或玻璃漏斗及1支10ml试管收集精液，也可用羊集精杯代用。 3输精器具 用羊输精器及开膣器代用。,（二）采精 1采精场地 应选择清洁、安静的室内进行采精，室内应配备专用的采精合。 2采精时间 最好安排在早、晚进行。 3公犬的调教 （1）在公犬熟悉的环境中，令其站在地板上或采精台上（地面、台面要防滑）。 （2）个别青年公犬不易调教时，可令其爬跨发情母犬采精，为防止母犬卧倒，可将母犬后躯抬高0.6m加以保定，或者由助手用左手或一个膝关节支撑在母犬的胸部下方。右手抱住母犬的头。,4采精方法,（1）手握采精法 右手戴上乳胶手套，按摩阴茎包皮和阴茎球，左手持集精杯在公犬左侧准备收集精液（气温低于20以下时，集精杯应需保温）。按摩阴茎包皮
