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1、梅毒的实验室诊断 检验科 常会忠 梅毒是一种几乎可以侵犯全身所有器官 ，而产生多种症状和体征的慢性传染性 疾病。 十六世纪初由欧洲传入亚洲，后蔓延我 国。梅毒又称为杨梅疮、广东疮、疳疮 、下疳、霉疮等。 本草纲目：“杨梅疮，古方不载，亦 有无病者；近时起于岭南，传及四方。” 第一部论述梅毒最完善的专著：霉疮 秘录明代 陈同成 我国解放后，基本上消灭了此病，但近 年来又有新的病例发现 n病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白 密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum) 苍白亚种 梅毒 苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒 极细亚种 雅司病 密螺
2、旋体属 品他螺旋体 品他病 梅毒螺旋体的生物学特性 1、直径 0.100.15m，有814个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。 2、原生质圆柱体上紧绕着34根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。 3、G-，但不易着色。Fontana镀银染色呈棕褐色 。 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉 素、四环素、红霉素等抗生素敏感。 梅毒螺旋体 梅毒的传播途径 n1、直接性接触 n2、血液传播：输血 n3、垂直传播：胎盘传播。 n4、间接传播：日常用品、接吻、哺乳、 医疗器械等途径。 梅毒的分期 梅毒螺旋体皮肤或粘膜局部繁殖 淋巴管 附近淋巴结 局部
3、无任何症状 1440天(潜伏期平均3周) 入侵部位炎症反应 初疮（硬下疳）一期梅毒 不治疗48周 自然消失 一期潜伏梅毒 期（初期）梅毒： 期（初期）梅毒： 期梅毒（包皮硬下疳）期梅毒 （巨大下疳） 部位：绝大部份在外生殖器。 形态：园形或椭园形，直径约12cm，边界清楚，周围稍隆起， 内含大量梅毒螺旋体，传染性极强。 特点: 常单个；触诊有软骨样感；无痛可自愈。 梅毒螺旋体血液 人体免疫作用 大部分螺旋体被杀死其余的螺旋体繁殖 低热、浅表淋巴结肿大 皮肤粘膜疹 骨骼、眼晴、神经系统等的炎症症状 不治疗 症状可自然消失，呈现潜伏状态 二期潜伏梅毒 二期梅毒 期（中期）梅毒 期（中期）梅毒 n发
4、生于硬下疳出现后28周。 n皮疹泛发对称，一般无自觉症状 n梅毒疹和淋巴结中，存在大量梅毒螺旋体。 期梅毒（玫瑰疹）期梅毒（梅毒疹） 二期复发 梅毒可反 复出现 2年后 晚期 梅毒 侵犯 皮肤粘膜 骨骼 心血管系统 神经系统 期（晚期）梅毒： 期（晚期）梅毒： n基本损害为慢性肉芽肿 n病损内螺旋体少但破坏性大 期梅毒（树胶肿） 期梅毒（溃疡坏死） 梅毒的实验室检测方法 n显微镜检测法： （1） 暗视野显微镜检查 （2） 镀银染色检查 n血清学检测法： 非梅毒螺旋体抗原血清试验 （1）VDRL(性病研究实验室试验)：需灭活 （2）USR（不加热血清反应素试验） （3）RPR(加速血浆反应素环状
5、卡片试验) （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验) 梅毒螺旋体抗原血清试验 （1）FTA-ABS （2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）发光法 （5）胶体金法 暗视野显微镜检查 n标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等 皮损的渗出液、淋巴结穿刺液 n方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。 n结结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发发光, 其螺旋 较较密而均匀。运动动方式： 伸缩缩其螺旋间间距 离而移动动（主要方式）蛇行式旋转转式 n评评价： . 简单、可靠。 . 早期：硬下疳（梅毒血清学试验仍阴性）。 . 阴性不能排出患梅毒的可能性 暗视野显微镜下的梅毒螺旋体 螺旋体检查是诊断
6、早期现症梅毒的最好方 法 ，WHO指定其为性病实验室必备项目之一 镀银染色检查 n基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶 液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体 n结果：棕褐色的梅毒螺旋体 血清学检测法 梅毒螺旋体侵入人体后产生： 抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素 。 两种抗体 抗梅毒螺旋体抗体： 非梅毒螺旋体抗原血清试验 nTRUST（甲苯胺红不加热血清试验） n基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆 固醇等组成的抗原中加入甲苯胺红 ，与待检血清中的反应素结合，形 成肉眼可见的红色絮状物。 非梅毒螺旋体抗原血清试验 n定性试验 (1)加样：吸取50微升血清（浆）放在卡片 圈中，并均匀地涂布在整
7、个圈中。 (2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头 加1滴抗原。 (3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟 (1005)转/分钟，立即在亮光下观察结果 非梅毒螺旋体抗原血清试验 n定量试验 （1）稀释液准备：在圈内加入50微升 生理盐水（根据需要确定稀释度），勿 将盐水涂开。 （2）加样：吸取50微升血清与各圈中生 理盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。 （3）同定性试验中的(2)、(3)。 非梅毒螺旋体抗原血清试验 n凝集反应强度分级： 3+4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮。 2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较清亮。 1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。 ：圆圈内仅见红
8、色集中于中央一点或均匀分散。 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 稀释倍数 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 阳性K 阴性K 生理盐水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - - 样 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0弃50.0 - - 阳性血清(ul) - - - - - - 50.0 - 阴性血清(ul) - - - - - - - 50.0 抗原悬液(ul) 50 50 50 50 50 50 操作步骤 VDRLUSRRPRTRUST 抗原成分心磷脂、卵磷 脂、 胆固醇 同前+EDTA+氯 化胆碱 同前+E
9、DTA+氯 化胆碱+活性炭 同前+EDTA+氯化 胆碱+甲苯胺红 抗原稳定性不稳定,1天 稳定4 8 保存12个月 稳定4 8 保存12个月 稳定4 8 保存12个月 血清试验前处理 需灭活不需灭活不需灭活不需灭活 反应板及结果 判断 玻片，肉眼或 显微镜 玻片，肉眼或 显微镜 纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼 注释 唯一用于检查脑 脊液的试验，诊 断神经梅毒 结果容易判断结果容易判断 一期敏感性 （未经治疗） 74%-87%77%-88%77%-99%77%-99% 二期敏感性 （未经治疗） 100%100%100%100% 晚期敏感性 （未经治疗） 98%99%98%99% 四种非特异性试验方法比
10、较 TPHA n基本原理：用超声裂解梅毒螺旋体制备 抗原，致敏鸡红细胞，其致敏细胞与待 检血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体结 合，产生肉眼可见的凝集。 操作步骤 n 1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量 反应板孔内，第1孔100微升，第24孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25 微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升 至第4孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致 敏颗粒25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖
11、湿盒，孵育2 h，或放4冰箱过夜观察 结果。 结果判断 n 1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为 有效试验。 n 2. 观察凝集反应强度：分级如下。 4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环 。 ：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。 TPHA 梅毒血清试验影响因素： 非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学 梅毒螺旋体抗原血清学实验梅毒螺旋体抗原血清学实验 感染因素感染因素 细菌性心内膜炎细菌性心内膜炎 传染性单核细胞增多症传染
12、性单核细胞增多症 软下疳软下疳 麻风麻风 病毒性肝炎病毒性肝炎 疟疾疟疾 传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症 莱姆病莱姆病 结核、麻风、麻疹、疟疾、水痘结核、麻风、麻疹、疟疾、水痘 支原体或肺炎双球菌肺炎支原体或肺炎双球菌肺炎 非感染因素非感染因素 妊娠妊娠 结缔组织病，结缔组织病， 如系统性红斑狼疮如系统性红斑狼疮 使用毒品使用毒品 甲状腺炎甲状腺炎 恶性肿瘤恶性肿瘤 结缔组织病，如系统性红斑狼疮结缔组织病，如系统性红斑狼疮 多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤 慢性肝脏损害慢性肝脏损害 各种试验的敏感性和特异性 n 敏感性（%） 特异性（% ） 一期 二期 隐性 晚期 TRUST 86 100 98 73 98 TPHA 76 100 97 94 99 TP-Ab 84 100 100 96 97 结果判读 TRUST TPHA TP-Ab 临床意义 初期梅毒早期或排出 + + + 现症梅毒 + 生物学假阳性 + + 现症梅毒 + + 梅毒经治疗后 + 梅毒经治疗后 不同情况的对策 n如果为阴性，推荐6周后和3个月后再次复查。 如果不能保证其后的随访检查，建议进行预防 性抗梅治疗 n如果性伴的梅毒血清学检查阳性，应立即开始 抗梅治疗 n如果性伴无法立即做血清学检查，也应进行预 防性抗梅治疗 n早期梅毒传染性强，因此在3个月之内有过性 接触者，无论血清学检查结果如何，都应考虑
