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1、医学免疫学实验,实验一 免疫学应用、固有免疫,.,三峡大学医学院生物病原与免疫学系 吴红艳,实验内容,一、讨论： （一）免疫学应用（预防、诊断、治疗） （二）固有免疫的组成、功能 二、示教 （一）常见各类疫苗 （二）小吞噬、大吞噬 （三）血脑屏障 三、操作 （一）人中性粒细胞噬菌实验 （二）鼠尾静脉注射及血脑屏障,（一） 免疫学应用,免疫预防：如各类疫苗 免疫诊断：如已知抗体鉴别未知细菌 免疫治疗：破伤风抗毒素,1. 固有免疫（innate immunity） 非特异性免疫/先天性免疫/天然免疫 概念：机体在长期种系进化过程中形成的天然防御功能，机体的第一道防线。 该系统与生俱来，发生非特异性
2、抗感染效应 并清除体内损伤、衰老或畸变的细胞 参与适应性免疫应答,INNATE IMMUNE SYSTEM,（二） 固有免疫的组成、功能、检查方法,固有免疫,组织屏障,体表屏障：物理、化学、生物屏障,内部屏障：血脑屏障、血胎屏障。,中性粒细胞、单核/巨噬细胞、 DC、NK、 NKT、 T、B-1B细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸性粒细胞等。,固有免疫分子：补体、细胞因子、抗菌肽、 溶菌酶、乙型溶素等。,固有免疫细胞：,2. 固有免疫系统的组成,INNATE IMMUNE SYSTEM,物理屏障：皮肤黏膜、肠蠕动、呼吸道上皮纤毛运动、尿液冲洗。 化学屏障：汗腺分泌的乳酸、皮脂腺分泌的不饱和脂肪酸
3、、胃酸、呼吸道和消化黏液中的溶菌酶、抗菌肽、补体等。 生物学屏障：皮肤黏膜寄生的正常菌群，如大肠杆菌可分泌细菌素抑制厌氧菌和革兰氏阳性菌定居和繁殖。,体表屏障,内部屏障：血脑脊液屏障,软脑膜、脉络丛,INNATE IMMUNE SYSTEM,血胎屏障：绒毛膜滋养层细胞 + 基蜕膜,INNATE IMMUNE SYSTEM,固有免疫分子,补体 细胞因子 急性期蛋白 抗微生物肽 溶菌酶 乙型溶素,固有免疫细胞,吞噬细胞(phagocyte) 中性粒细胞(neutrophil) 单核细胞和巨噬细胞 树突状细胞 特殊淋巴细胞 自然杀伤细胞(natural killer, NK) NK T细胞 B-1
4、B细胞 其它固有免疫细胞 肥大细胞(mast cell) 嗜碱性粒细胞(basophil) 嗜酸性粒细胞(eosinophil),中性粒细胞（多形核白细胞）,Bone marrow,HSC,Neutrophils in blood circulation,tissues,inflammation,抗感染 抗肿瘤 维持自身耐受 参与特异性免疫： 参与特异性免疫的启动 影响特异性免疫的强度 影响特异性免疫的类型,3. 固有免疫的功能,二、示教,（一）常见各类疫苗 （二）小吞噬、大吞噬 （三）血脑屏障,葡萄球菌,鸡红细胞,巨噬细胞,血脑屏障,三、操作,（一）人中性粒细胞噬菌实验 （二）鼠尾静脉注射及
5、血脑屏障（见示教,1. 人中性粒细胞噬菌实验,取肝素抗凝剂0.02ml（25单位/ml）入凹玻片。 无名指采血0.02 ml 至有肝素的凹玻片中，混匀。 加入一滴葡萄球菌菌液，混匀。 凹玻片置铺有纱布的有盖容器内（此容器先放37温箱中预温） 37温箱孵育20分钟。 制作血涂片，室温干燥。 均匀滴加3滴吉姆萨染液A，染色1分钟。 均匀滴加6滴吉姆萨染液B，染色3分钟。 洗涤后室温干燥。 镜下观察，计算吞噬百分率 。,实 验 步 骤,血推片方法,血涂片质量评价,均匀滴加3滴吉姆萨染液A，染色1分钟。 均匀滴加6滴吉姆萨染液B，染色3分钟。,染色方法,血涂片观察区域选择,葡萄球菌,鸡红细胞,巨噬细胞,吞噬百分率=,有吞噬现象的吞噬细胞总数,观察到的吞噬细胞总数,100%,思考题： 一、试述大、小吞噬细胞的吞噬对象各有哪些？吞噬细胞的吞噬过程及吞噬后果。 二、哪些因素可以影响吞噬细胞吞噬活性? 三、体液中存在哪些杀菌物质?它们是如何起作用的?,
