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1、动物实验常用操作技术动物实验常用操作技术 郭芬芬郭芬芬 中山大学实验动物中心中山大学实验动物中心 动物实验系列培训之四 主要内容 一、一、 常用实验动物的保定、标记 二、实验动物的常规给药途径 三、实验动物的一般采血方法 四、实验动物的常用麻醉和处死方法 一、实验动物的抓取、保定一、实验动物的抓取、保定 大小鼠的抓取、保定大小鼠的抓取、保定： 将动物放置在鼠笼盖表面，一手向后牵 拉鼠尾，用另一手拇指和食指抓紧动物颈 背部的皮肤，将其提起翻转，用尾指或无 名指固定尾巴。 先用一只手抓取鼠尾提起，先用一只手抓取鼠尾提起，置于笼置于笼盖盖或实验台向后或实验台向后牵拉牵拉 将鼠体置于手心中，把后肢拉直
2、。将鼠体置于手心中，把后肢拉直。 可用无名指固定按住鼠尾可用无名指固定按住鼠尾 先用一只先用一只手抓取手抓取大鼠尾提起，大鼠尾提起，置于笼置于笼盖盖或实验台向后或实验台向后牵拉牵拉 在鼠在鼠有向前运动趋势时有向前运动趋势时，用另一手的拇指和食指抓住大鼠的用另一手的拇指和食指抓住大鼠的 两耳和颈部皮肤，提起、翻转两耳和颈部皮肤，提起、翻转 如如大鼠体积大鼠体积过过大大, ,可由第二个人协可由第二个人协同同固定后肢固定后肢 豚鼠的抓取和保定豚鼠的抓取和保定： 先用一只手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指 环握颈部，中指和无名指轻轻扣住胸廓或像抓取大鼠一样抓住 双耳和颈背部皮肤；另一只手托
3、住臀部。 注意：豚鼠较为胆小易惊，不宜强烈刺激和受惊，所以在抓取时，必须 稳、准和迅速；也不能单纯抓取背腹部。 兔的抓取和保定兔的抓取和保定： 一手抓取兔颈背部的皮肤，轻轻提起兔子，迅速用另一手掌托 住其臀部，然后用兔固定器保定。 先用一只手掌迅速扣住鼠背先用一只手掌迅速扣住鼠背 抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部， 中指和无名指轻轻扣住胸廓中指和无名指轻轻扣住胸廓 或像抓取大鼠一样抓住双耳和颈背部皮肤或像抓取大鼠一样抓住双耳和颈背部皮肤 用另一只手托住臀部用另一只手托住臀部 按住兔子的双耳和颈背部按住兔子的双耳和颈背部 一只手抓住兔子双耳和颈背部的毛皮
4、提起一只手抓住兔子双耳和颈背部的毛皮提起 一手抓取兔两耳及颈 背皮肤，提起 另一手托住臀部 将兔子放入盒式固定器内；露出头部将兔子放入盒式固定器内；露出头部 犬的抓取和保定：犬的抓取和保定： 可先抓取犬前肢，将犬拉至犬笼出口附近，用双手抓 住犬腋下前腿或双手环抱腹部的方法，将犬固定于犬固定 器中即可将犬保定 猴的抓取和保定：猴的抓取和保定： 捉取时应先握紧肘部以上的前臂，并把臂部反扭到背 后，同时使其双腿伸直即可将其保定，对于体型较大的猴， 捉取前可将猴麻醉然后再捉取。当猴位于猴笼中时可使用 笼具中的夹层将猴固定。 大小鼠常用标识方法大小鼠常用标识方法 短期标记法：短期标记法： 采用油性笔在动
5、物尾部划线或写阿拉伯数字标号法 适用于动物的临时标记 化学染色法：化学染色法： 常用染料：3-5%苦味酸、0.5%中性品红、2%的硝酸银溶液 根据实验动物数量采用单色或双色染料涂染动物体表不同 部位的皮毛，以作标记。 单色涂染法：单色涂染法： 动物数量在29以内，用一种化学染料（苦味酸） 涂染动物不同部位的皮毛 双色涂染法：双色涂染法： 动物数量超过29，需要编1099号时采用此 法，用两种不同颜色的染料涂染标识，即A化学染 料标识个位数，B化学染料以标识十位数 其他动物的标识法 豚鼠和兔：豚鼠和兔： 采用油性笔耳廓内侧标记法，即在豚鼠、兔耳部用油性 笔写阿拉伯数字进行标识 化学染色法，与大小
6、鼠染色法相同 猴、犬：猴、犬： 采取笼编号或组编号+动物号（或耳号、项圈号）相结合 三、实验动物常规给药途径 大、小鼠和豚鼠的灌胃 大、小鼠尾静脉注射 大、小鼠腹腔注射 兔子耳缘静脉注射 大、小鼠和豚鼠的灌胃大、小鼠和豚鼠的灌胃 将专用的动物灌胃针接在注射器上，吸入相应的待灌药液； 一只手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物抓取提起，保持体位为头高尾低 （头高位）； 另一只手持注射器，将灌胃针从动物嘴部侧面插入口中； 然后轻轻摆正灌胃针并沿口腔顶壁和咽后壁徐徐插入食道；针插入时应 无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针或将针拔出，以免 损伤或穿破食道以及误入气管。 一般将灌胃针插入小鼠34cm，
7、大鼠或豚鼠4-6cm 常用灌胃量：小鼠0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠为1-5ml。 常用灌胃针：大鼠16号或18号，小鼠9号或12号 大小鼠大小鼠 灌胃针灌胃针 一只一只手持注手持注射器，射器， 将灌胃针插入动物将灌胃针插入动物 口中，沿口腔顶壁口中，沿口腔顶壁 和咽后壁徐徐插入和咽后壁徐徐插入 食道。食道。 大鼠、豚鼠和小鼠一样的操作手法大鼠、豚鼠和小鼠一样的操作手法 大、小鼠尾静脉注射 先将动物固定在固定器中，使尾巴露出；先将动物固定在固定器中，使尾巴露出； 用用45455050的温水浸润尾部半分钟或用酒精擦拭使血管扩张和使表皮角的温水浸润尾部半分钟或用酒精擦拭使血管扩张和使表皮角
8、质软化；质软化； 用食指和中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇用食指和中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇 指再轻轻按住尾部；指再轻轻按住尾部； 右手持注射器，使针头与静脉平行（小于右手持注射器，使针头与静脉平行（小于3030度角），从尾下四分之一处度角），从尾下四分之一处 （约距尾尖（约距尾尖2 2- -3 3厘米）进针；厘米）进针； 见有血液回流到针头，先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静见有血液回流到针头，先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静 脉，可继续注入；脉，可继续注入； 注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血或以消毒棉签注射完毕后把尾部向
9、注射侧弯曲以止血或以消毒棉签( (棉球棉球) )止血。止血。 大小鼠固定器 用一只手的食指和中指从下面托起尾巴用一只手的食指和中指从下面托起尾巴， 以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇指再轻轻按住尾部。以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇指再轻轻按住尾部。 另一只另一只手持注射器，使针头与静脉平行（小于手持注射器，使针头与静脉平行（小于3030度角），从度角），从 尾下四分之一（约距尾尖尾下四分之一（约距尾尖2 2- -3 3厘米）处进针。厘米）处进针。 大鼠和小鼠一样的操作手法大鼠和小鼠一样的操作手法 针头进入血管后，可见回血针头进入血管后，可见回血 大、小鼠腹腔注射大、小鼠腹腔注射 以一只手抓
10、取和固定动物，使腹部向上，以及使鼠头稍朝下大以一只手抓取和固定动物，使腹部向上，以及使鼠头稍朝下大 约约1515度角（头低位）；度角（头低位）； 另一只手拿消毒酒精棉球（签）进行进针部位消毒；另一只手拿消毒酒精棉球（签）进行进针部位消毒； 接着将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下；接着将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下； 定住针头，缓缓注入药液；定住针头，缓缓注入药液； 若大鼠体积过大，可由两人协同进行腹腔注射。若大鼠体积过大，可由两人协同进行腹腔注射。 一只手抓取和固定动物，使腹部向上，并使一只手抓取和固定动物，使腹部向上，并使 鼠头稍朝下大约鼠头稍朝下大约1515度角（头低位）。度角
11、（头低位）。 另一只手将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下另一只手将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下。 大鼠和小鼠一样的操作手法大鼠和小鼠一样的操作手法 兔子耳缘静脉注射 将兔子保定于固定盒内，露出头部和双耳；将兔子保定于固定盒内，露出头部和双耳； 先拔去注射部位的被毛；先拔去注射部位的被毛； 用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈；用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈； 用消毒酒精消毒注射部位；用消毒酒精消毒注射部位； 一只手食指和中指托住注射部位的耳缘，大拇指顺势按在耳上面固定住兔耳；一只手食指和中指托住注射部位的耳缘，大拇指顺势按在耳上面固定住兔耳； 另一只手持另一只手持6 6号针头（连注射
12、器）尽量从静脉的远端刺入；号针头（连注射器）尽量从静脉的远端刺入； 当针头有回流血时，移动拇指于针头上以固定针头；当针头有回流血时，移动拇指于针头上以固定针头； 将药液以均匀的速度注入；将药液以均匀的速度注入； 注射完毕，拔出针头；注射完毕，拔出针头； 用消毒棉球（棉签）压迫针眼片刻。用消毒棉球（棉签）压迫针眼片刻。 用固定器保定兔子用固定器保定兔子 用手指弹动或轻揉兔耳用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈使静脉充盈；用消毒酒精消毒注射部位用消毒酒精消毒注射部位。 左手固定兔耳，右手持针（连注射器）尽量从静脉的远端刺入左手固定兔耳，右手持针（连注射器）尽量从静脉的远端刺入 操作完毕，操作完毕，用消
13、毒棉球（棉签）压迫针眼片刻用消毒棉球（棉签）压迫针眼片刻止血止血 兔耳部血管分布清晰，耳中央 为动脉，耳外缘为静脉。内缘静脉 深不易固定，故不用；外缘静脉表 浅易固定，常用。 实验动物的一般采血方法 采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血 量以及动物种类量以及动物种类 1. 1. 剪尾取血法剪尾取血法 2. 2. 眼球后静脉丛取血法眼球后静脉丛取血法 3. 3. 眼眶取血法眼眶取血法 4. 4. 心脏取血法心脏取血法 5. 5. 断头取血法断头取血法 6. 6. 颈动静脉、股动静脉取血法颈动静脉、股动静脉取血法 剪尾取血法：剪尾取血法： 将动物装入
14、固定器中，露出尾巴，用酒精涂擦或 用温水浸泡使血管扩张，剪断尾尖后，尾静脉血 即可流出，用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可 取到一定量的血液。取血后，用棉球压迫止血。 也可采用交替切割尾静脉方法取血。用一锋利刀 片在尾尖部切破一段尾静脉，静脉血即可流出， 每次可取0.30.5 ml，供一般血常规实验。 眼球后静脉丛取血法：眼球后静脉丛取血法： 左手持鼠，拇指与中指抓住颈部皮肤，食指按 压头部向下，阻滞静脉回流，使眼球后静脉丛充 血，眼球外突。右手持抗凝剂处理过的毛细采血 管，从眼眶内角刺入，沿内下眼眶壁，向眼球后 推进45 mm，旋转采血管，血液自行流出。 眼眶取血法：（又名摘眼球取血法）眼眶取
15、血法：（又名摘眼球取血法） 左手持鼠，拇指与食指捏紧头颈部皮肤，使 鼠眼球突出，右手持弯镊或止血钳，钳夹一侧眼 球部，将眼球摘出，鼠倒置，头部向下，此时眼 眶血液流出，直至流血停止。此法由于取血过程 中动物未死，心脏不断跳动，一般可取鼠体重4 5的血液量，是一种较好的取血方法，但只 适用一次性取血。 心脏取血法： 将动物麻醉，仰卧固定于鼠板上，用剪刀将 心前区毛剪去，用碘酒、酒精消毒此处皮肤，在 左侧第34肋间用左手食指摸到心搏，右手持连 有45号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺， 当针头正确刺入心脏时，鼠血由于心脏跳动的力 量，血自然进入注射器。 断头取血法：断头取血法： 实验者带上棉手套，用左手抓紧鼠颈部 位，右手持剪刀，从鼠颈部剪掉鼠头迅速 将鼠颈端向下，用
