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1、食用菌菌种制作技术 食用菌生产技术课程组 第一节 菌种生产类型及生产流程 第二节 一级菌种制作技术 第三节 二、三级菌种制作技术 食用菌菌种制作技术 第一节 菌种生产类型及生产流程 一、菌种概念 二、菌种生产类型 三、菌种生产流程 四、菌种生产场所及设备 一、菌种概念 广义：是指以保藏、试验、栽培 和其它用途为目的，具有繁衍能力， 遗传特性相对稳定的孢子、组织或菌 丝体及其营养性或非营养性的载体。 菌种是一种重要的生物资源，椐其使 用的目的不同，可以分为保藏用菌种、试验 用菌种和生产用菌种。 从食用菌栽培的角度而言，所谓的菌种 就是指生产用菌种。 狭义狭义：是指以适宜的营养培养基为是指以适宜的
2、营养培养基为 载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养 基质和菌丝体的联合体。或者说是指人基质和菌丝体的联合体。或者说是指人 工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯 菌丝体。菌丝体。 菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性 状的优劣直接影响到生产的成败。状的优劣直接影响到生产的成败。 制种工作的成败制种工作的成败 ，既影响到菌种场的，既影响到菌种场的 经济效益与信誉，又间接关系到菇农的利益经济效益与信誉，又间接关系到菇农的利益 。 制作菌种并非易事，需要有丰富的技术制作菌种并非易事，需要有丰富的技术 经验及
3、企业管理知识。经验及企业管理知识。 二、菌种生产类型二、菌种生产类型 食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养 的方式来生产的，在生产上通常把菌种分的方式来生产的，在生产上通常把菌种分 为一级菌种、二级菌种和三级菌种。为一级菌种、二级菌种和三级菌种。 菌 种 一级菌种 二级菌种 三级菌种 从孢子分离培养或组织分离 培养获得的纯菌丝体。 由一级菌种扩大繁殖成的 菌丝体。 由二级菌种扩大繁殖成的菌丝 体，是直接用于栽培的菌种。 三者之间的关系三者之间的关系 菌种类型菌种类型制种容器制种容器培养基培养基菌株来源菌株来源用途用途要求要求 一级菌种一级菌种 （试管种（试管种 、母
4、种）、母种） 试管试管 PDAPDA、 PSAPSA 种菇（孢种菇（孢 子或菌肉子或菌肉 组织）组织） 扩制二级种扩制二级种 菌种保藏菌种保藏 纯度高，质量纯度高，质量 好，绝对无杂好，绝对无杂 菌菌 二级菌种二级菌种 （原种）（原种） 菌种瓶菌种瓶 固体培固体培 养基养基 一级菌种一级菌种 扩制三级菌扩制三级菌 种种 纯度高，质量纯度高，质量 好，无杂菌好，无杂菌 三级菌种三级菌种 （栽培种（栽培种 ） 罐头瓶、罐头瓶、 菌种袋菌种袋 固体培固体培 养基养基 二级菌种二级菌种 用于栽培用于栽培 高纯度，高质高纯度，高质 量，无杂菌量，无杂菌 菌种生产流程菌种生产流程 种菇 一级菌种 二级菌种
5、 三级菌种 栽培 菌种为何要 经过三级逐 步扩大培养 ？ 三、菌种生产工艺流程 斜面 一级种培 养基制备高压灭菌接种培养 筛选 提纯原始种 中试后确 定一级种保存 孢子或组织分离 一级种转管、扩大 菌种瓶 二级种培 养基制备高压灭菌接种培养二级菌种 罐头瓶 菌种袋 三级种培 养基制备高压或 常压灭菌 接种三级菌种栽培培养 菌种制作流程 一级菌种（配制培养基灭菌接种培养 ） 二级菌种（配制培养基灭菌接种培养 ） 三级菌种（配制培养基灭菌接种培养 ） 栽 培 菌种制作的四个基本环节菌种制作的四个基本环节 配制培养基 灭菌 接种 培养 四、菌种生产场所及设备（现场）四、菌种生产场所及设备（现场） （
6、一）菌种场设计基本要求 1、确定制种级别及规模 良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工作 的连续性等都有很高的要求。在菌种生产中，由于前一级菌 种是后一级菌种的种源，前一级菌种出现质量问题比后一级 菌种出现质量问题危害更大。因此对生产和供应较前级菌种 厂家的条件和责任的要求更高。 目前，我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理 行政法规。今后，各菌种厂在制定规划时，应根据本身的技 术力量及设备条件，确定适宜的菌种生产级别和规模。 2、制种场地的选择 水、电、路三通，远离禽舍、畜栏、厕所等污 染源。 3、菌种场设置要求 菌种场应设原辅料仓库，原料处理场地，洗涤 室，配料室，灭菌室，冷
7、却室，接种室，培养室, 质检室和菌种储藏室。 4 4、菌种场的平面布局、菌种场的平面布局 应根据微生物易于在空气中传播及其 传播的特点规划厂房，布设流水线，以使 制种的工艺流程既便于流水作业，节约劳 力和投资，又有利于对微生物传播的控制 ，提高菌种生产的成品率。下面分别介绍 简易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。 （二）制种基本设备及常用物品（二）制种基本设备及常用物品 配制培养基设备：切片机、粉碎机、过筛机、 拌料机、装瓶或装袋机 灭菌设备：高压灭菌锅（手提式、立式、卧 式）、常压灭菌灶 接种设备：净化工作台、接种箱、接种室 培养设备：培养箱（电热恒温、恒温恒湿）、 培养室、培养架、空调 菌种
8、保藏设备：电冰箱、贮藏室（二、三级菌种 ） 1、制种设备 2、基本器具 玻璃器皿 衡量器具 基础设备 3、基本药品 注意事项！注意事项！ 配置必要的生产设备。 生产能力与生产设备配套 选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑 料袋、消毒药品等低值易耗品。 复习思考题复习思考题 1 1什么叫培养基？培养基可分为哪几种类型？什么叫培养基？培养基可分为哪几种类型？ 2 2什么叫菌种？菌种可分为哪几种类型？什么叫菌种？菌种可分为哪几种类型？ 3 3菌种为什么要经过三级逐步扩大培养？菌种为什么要经过三级逐步扩大培养？ 4 4简述菌种生产的基本过程？简述菌种生产的基本过程？ 第二节第二节 一级菌种制作技术一级
9、菌种制作技术 一、一级菌种的制作流程一、一级菌种的制作流程 二、一级菌种培养基的配制二、一级菌种培养基的配制 三、一级菌种培养基的灭菌三、一级菌种培养基的灭菌 四、菌种分离及纯化四、菌种分离及纯化 五、出菇试验（鉴定）五、出菇试验（鉴定） 六、转管及培养六、转管及培养 七、菌种保藏七、菌种保藏 一、一级菌种制作流程一、一级菌种制作流程 1 1概念概念 一级菌种是第一次用孢子分离法、组织分离一级菌种是第一次用孢子分离法、组织分离 法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转 管扩大后的菌丝体。管扩大后的菌丝体。 2 2用途及要求用途及要求 一级菌种是菌种生
10、产的基础，一级菌种质量一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量 的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量 ，对食用菌生产产生根本的影响。，对食用菌生产产生根本的影响。 3 3、制种过程：主要包括下列几个程序：、制种过程：主要包括下列几个程序： 培养基的配制培养基的配制培养基的灭菌培养基的灭菌菌种的分离菌种的分离 纯化（提纯）纯化（提纯）转管扩大转管扩大培养培养一级菌种一级菌种 二、一级菌种培养基的配制 1、培养基的概念及分类 根据食用菌对营养、水分、酸碱度的要求，人为配制成 的供食用菌生长发育的基质。 类 型 天然：天然有机物 合成：已知成分的化学药品
11、 半合成：？ 原料 来源 状态 液体：营养液 固体 固体：天然固体原料 固化：加1.5%2%琼脂 表面 形状 斜面培养基 平板培养基 概念 2、一级菌种培养基常用配方 PDA培养基 PSA培养基 马铃薯（去皮） 200g 马铃薯（去皮） 200g 葡萄糖 20g 蔗糖 20g 琼脂 1823g 琼脂 1823g 水 1000ml 水 1000ml PDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基， 适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种 广泛培养基，也是一种基础培养基。 注：一级菌种培养基配方众多，可参考课本或其他书籍 。 粉状 条状 属天然植物多糖 融点96以上 凝点40 以下
12、 冷水中不溶 透明度好、粘着力强 不被微生物分解利用 特性 煮沸20min，取定量滤液 制马铃 薯滤液 滤液沸时加入，融后加余料 融化琼脂 调节pH值 勿污管口，控制装量 分装试管 准备灭菌 包扎成捆 1%NaOH或HCl 3.一级菌种培养基的配制过程 三、一级菌种培养基的灭菌三、一级菌种培养基的灭菌 （一）灭菌与消毒的概念（一）灭菌与消毒的概念 灭菌：灭菌：是应用物理和化学方法杀灭物是应用物理和化学方法杀灭物 品表面和内部所有的微生物，是一种彻品表面和内部所有的微生物，是一种彻 底的灭菌方法。底的灭菌方法。 消毒消毒：是应用物理和化学方法使欲消是应用物理和化学方法使欲消 毒的物品表面和孔隙内
13、绝大部分微生物毒的物品表面和孔隙内绝大部分微生物 致死，是一种不彻底的灭菌方法。致死，是一种不彻底的灭菌方法。 （二）灭菌与消毒的方法 1、常用的灭灭菌方法 火焰灭菌用于金属器具，火焰灼烧至红（在火焰2/3处烧） 干燥箱灭菌 用于玻璃器皿（培养皿、试管、三角瓶、吸管）等。洗净晾干包装放入干燥箱升温160 170，保持12h 关闭电源，自然降温60以下打开干燥箱取出灭菌物品，尽快使用。 干热灭菌 湿热灭菌 常压灭菌 间歇灭菌 第一次蒸，100保持1 h 28-37下培养24 h 第二次蒸，100，保持1 h 培养24 h 第三次蒸，100，保持1 h。不常用的原因：灭菌一锅需要34天时间，且冬天
14、需要 保温。 持续灭菌 蒸，100保持1214 h（方法：攻头，控中间，保尾）。 普遍采用，特别用于大规模塑料袋制种和塑料栽培筒的灭菌。 注意：常压灭菌锅要设计合理，主要是灭菌彻底与否、燃料费用、周转速度、劳动强度 、污染率的高低，直接影响经济效益。 高压灭菌 手提式高压灭菌锅：用于一级菌种培养基灭菌。 卧式或立式高压灭菌锅：用于二、三级菌种培养基灭菌。 2、常用的消毒方法 空间消毒 药液喷雾 药剂薰蒸 紫外线照射 0.25%的新洁尔灭，5%的石碳酸，0.25%的多菌灵等。 用量不小于30ml/m3；雾粒越细越好；适时更换药液（防止抗药性）。 1020ml的甲醛+58g的高锰酸钾/ m3；气雾
15、消毒盒，26g/ m3； 照30min后，再过30min开照明灯 器具消毒 药液浸泡 煮沸消毒 75%的酒精；药物揩擦 煮沸20min以上 培养料消毒熟石灰拌料；杀菌剂拌料（0.1%0.2%的多菌灵）；巴氏消毒（发酵） 分离材料消毒75%的酒精棉球擦拭；0.1%升汞浸泡0.51min无菌水冲洗3次无菌纸吸干 （三）一级菌种培养基的灭菌 1灭菌设备 手提式高压灭菌锅 2灭菌要求 1.1kg/cm2，121 保持2030min 手提式高压灭菌锅 3操作过程 加水装锅盖盖加热当压力升为 0.5kg/cm2时排放冷空气正式升压保压 （1.1kg/cm2，121，保持20-30min）停 止加热自然降压至零排放余汽开
