崇德和合博学敦行 食品微生物实验 之 革兰氏染色 主讲：曹冠华 崇德和合博学敦行 背景小知识 • 革兰氏染色法是细菌学中广泛使 用的一种鉴别染色法，这种染色 法是由一位丹麦医生 汉斯克里斯蒂安革兰 （Hans Christian Gram，1853年－1938年）于 1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌 与克雷白氏肺炎菌之间的关系 • 经革兰氏染色后，可将细菌分为革兰氏阳性 菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-） 崇德和合博学敦行 背景小知识 • 革兰氏阳性菌通常对青霉素类、第一（或 第二）代头孢菌素、万古霉素、克林霉素 等高度敏感 • 革兰氏阴性菌对第三代头孢菌素（头孢他 啶等）、氨基糖苷类（庆大霉素等）多粘 菌素等高度敏感 • 根据细菌的革兰氏染色性质，有利于对疾 病做出诊断同时也可做为选用抗生素的 参考 崇德和合博学敦行 一、实验目的及要求 • 1、了解革兰氏染色的原理 • 2、掌握革兰氏染色的方法 • 3、学会观察及描述细菌的形态结构 崇德和合博学敦行 二、革兰氏染色的基本原理 G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同，经两 种不同的染料处理后，呈现出不同的颜色， 从而加以区分。
革兰氏阳性菌细胞壁结构图（左边）和为革兰氏阴性菌 细胞壁结果图（右边） 崇德和合博学敦行 二、革兰氏染色的基本原理 • G+的细胞壁主要有肽聚糖形成的网状结构 组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理 时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变 小，细胞壁通透性降低，使结晶紫-碘复合 物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈 蓝紫色 崇德和合博学敦行 二、革兰氏染色的基本原理 • G-的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含 量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解， 细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物 容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染 上了复染剂（番红）的颜色，因此呈现红 色 革兰氏阴性菌结构图 崇德和合博学敦行 三、实验器材及试剂 • 器材： • 显微镜、酒精灯、载玻片、接接环等 • 菌种： • 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 • 药品： • 初染液：草酸铵-结晶紫 • 媒染液：碘液 • 复染液：番红溶液 • 脱色液：95%乙醇等 崇德和合博学敦行 四、操作步骤及要点 涂片 加热干燥 固定 结晶紫初染 水洗 碘液媒染水洗 95% 乙醇脱 色 水洗 番红复染 水洗 镜检 1min 1min 1min 30sec 崇德和合博学敦行 革兰氏染色操作视频 崇德和合博学敦行 操作要点 1、在涂片区滴上香柏油，用油镜观察。
2、加热干燥固定时的温度不要太高，否则细 胞壁会受到损伤，细胞变形 3、掌握好乙醇脱色时间，将载玻片上面的水 甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流 出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒 钟，立即用水冲净酒精 崇德和合博学敦行 操作要点 • 4、如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性 菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳 性菌此外，菌龄也影响染色结果，如阳 性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自 行溶解了，都常呈阴性反应过于密集的 细菌，也常常呈假阳性 崇德和合博学敦行 五、染色结果 大肠杆菌平板菌落图 大肠杆菌电镜图 大肠杆菌革兰氏染色图 （G-） 崇德和合博学敦行 五、染色结果 金黄色葡萄球菌 电镜图 金黄色葡萄球菌革兰 氏染色图 （G+） 金黄色葡萄球菌平板 菌落图 崇德和合博学敦行 六、思考题 • 1．涂片后为什么要进行固定?固定时应注意 什么? • 2．试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意 义 。