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1、干扰素释放试验（ IGRAS）临床应用 南京医科大学第二附属医院 呼吸科 沈 红 contents 目录 1. 结核病的诊断现状 2. TB-IGRA产品介绍 3. TB-IGRA的临床应用 4. TB-IGRA检测方法及结果解释 3 结核病现状 结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(tubercle bacillus)引 起的一种慢性肉芽肿性炎。 以肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。也可见于全 身各器官。肺外结核占整个发病率的10%-20%，死亡率占 结核病全部死亡率的14.1%-17.6%。 全世界约三分之一的人群感染，2014年全球结核病报告 显示：2013年有900万新
2、发病例， 150万人死亡。 中国是结核病高发区，发病数居全球第二，现有600万活 动性肺结核，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类 传染病的前列。 电镜下的结核杆菌 World Health Organization.Global tuberculosis control:epidemiology,strategy, financing:WHO report 2011(WHO/HTM/TB/2011.16).Geneva:WHO,2011 2010年新发880万例结核患者，59%在亚洲，26%在非洲 发病人群前五位的国家 India(2.0 million2.5 million) (26%)
3、 China (0.9 million1.2 million) South Africa (0.40 million0.59 million) Indonesia (0.37million0.54 million) Pakistan (0.33 million0.48million). 38% 结核病现状及危害-传播范围广 World Health Organization.Multidrug and extensively drug-resistant TB (M/XDR-TB): 2010 global report on surveillance and response. WHO/HT
4、M/TB/2010.3. 逐年 增加 全球27个MDR-TB流行严重的国家之一，中国尤其严重 HIV 感染和艾滋病破坏了机体的免疫 系统，加剧了结核的发病， 1/3HIV病人死于结核 多菌耐药的结核菌感染率增加 贫困、移民等 细菌学涂片率低，2/3TB病人菌阴性 原 因 结核发病机理 LTBI 结核分枝杆菌（MTB） 暴露 感染 自愈 90% 不发展为结核病 Latency 2-5% 疾病进展 1% 活动性结核病 细菌全部被清除 一直存在活菌 需预防性服药 不需要预防性服药 Latency 潜伏 9% 复燃 注：感染后发病与否和机体易感性有关！ 5-10%HIV10% 治愈 l活动性结核： 发
5、病状态 l潜伏性结核感染（LTBI）：是宿主感染结核杆菌后 尚未发病的一种特殊状态 未根治 结核病的免疫主要是细胞免疫 Dheda K, et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450 11 耗时长4-8周 检出率低50% 涂阴检出低 22%-38% 肺外结核难 结核检测的方法比较 结核 诊断 X射线 分子诊断 涂片 镜检 细菌培养 特异性差 误诊肺炎、肺癌 肺外结核难 操作复杂 技术要求高 涂阴检出低 34% 肺外结核难 不能区分NTM 检出率低20% 肺外结核难 假阳/
6、假阴多； （涂阴45%/35% ） WHO建议禁用抗体检测 TST（结核菌素皮试） 不能区分卡介 苗接种者 不能区分NTM 48-72小时复诊 取样操作简便 检出率高（活动 结核和潜伏结核 ） 区分BCG、NTM 检测肺外结核 IGRA方法 接触史 临床症状 病原/病理 12 TB-IGRA Tuberculosis（结核TB） Interferon（干扰素） Gamma（ ） Release（释放） Assay（测定） 原理: 感染者体内被结核菌（TB）抗原致敏的效应T细胞， 在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大 量IFN- (细胞因子)。通过IFN- 的检测，判断结核感染
7、情况 。 contents 目录 1. 结核病的诊断现状 2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用 4. TB-IGRA检测方法及结果解释 APC T cell TB-IGRA方法介绍 细胞 因子 活化/细 胞因子 细胞 因子 ELISAELISPOT流式细细胞术术 细胞因子 活化标志物 IGRAs IFN-g release assay TNFa IFNg CK 体外刺激： RD1抗原 原理: 机体内被结核菌抗原致敏的效 应应T细细胞，在体外受到相同抗原的 刺激（在APC辅助下）后，会分泌 大量IFN- (细胞因子)。通过IFN- 的检测 ，判断结核感染情况。 两种TB-IG
8、RA比较 高孟秋,刘菲,纪滨英等.两种-干扰素释放分析在结核病临床诊断中的比较研 究.中华结核和呼吸杂志，2012，35（10）：762-765 TB-IGRA 产品特性 高灵敏度，检出率85%以上 高特异性 RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原 该抗原具 有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环 境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分支 杆菌影响 TNFa IFNg CK 国内外相关研究 TB-IGRA快速简便，是一种值得推广的检测方法： 张华，黄圣文，罗振元.结核分枝杆菌r-干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用.中华医学院
9、感染学杂志 2009年第19卷第14期 国内外相关研究 国内文章sensitivity 结核分枝杆菌-干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用90.24%（74/82） TB-IGRA与TST检测菌培阳性肺结核患者比较80.3%（118/147) -干扰素释放试验诊断结核分枝杆菌感染的临床意义88.64%（39/45） 结核分枝杆菌相关-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值90.7%（243/268） 两种结核分枝杆菌相关-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究90.9%（290/319） 体外释放酶联免疫法检测结核杆菌-干扰素的实验研究89.11%（90/101） 干
10、扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）用于检测结核分枝杆菌的优越性96.12%(99/103) 体外-干扰素检测结核分枝杆菌不同方法的应用价值比较90.1%(308/342 干扰素体外释放酶联免疫法在结核潜伏感染诊断中的价值88.6%(39/44) 国外同类试剂优势 A Three-Way Comparison of Tuberculin Skin Testing, QuantiFERON-TB Gold and T- SPOT.TB in Children Latent TB检出高 Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Releas
11、e Assay in Patients with Radiographic Lesions Suggesting Old Healed Tuberculosis Latent TB检出高 Estimating diagnostic accuracy of tests for latent tuberculosis infection without a gold standard among healthcare workers 特异性93.6% Clinical Utility of Interferon Gamma Assay in the Diagnosis of Tuberculosi
12、s灵敏度90%,特异性97% contents 目录 1. 结核病的诊断现状 2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用 4. TB-IGRA检测方法及结果解释 临床应用案例 肺结核辅助诊断： 某院呼吸科病人，男 临床症状：发热1周，咳嗽 检测结果：TB-IgG(-)，TB-IGRA（+）T-N的值是21.5pg/ml 结果分析：TB-IgG灵敏度低，易漏检。 临床诊断：肺结核 备注：2011年，WHO建议不再使用结核抗体检测结核感染 临床应用案例 肺外结核辅助诊断： 某院感染科，女，75岁 临床症状：发热数日，胸痛，干咳 检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养（
13、- ）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉快 结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低， TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结核 。 临床诊断：结核性胸膜炎 临床应用案例 肺炎与肺结核的鉴别诊断： 某医院呼吸内科，男，59岁 临床症状：肺部有胸水，高烧发热，初步认定肺炎，抗生素治疗 1周不见效果，高度怀疑结核。 检测结果：痰涂片（-），结核抗体（-），TB-IGRA（-） 结果分析：传统结核检测检出率在20%-40%，灵敏度低。IGRA检 出率在90以上，阴性排除意义高于涂片和抗体。患者继续用药 3周，病情好转。 临床诊断：肺炎
14、 23 MTB与其他杆菌感染的鉴别诊断： 某院呼吸内科病人，男 临床症状：发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难，乏力，多汗，关节疼 痛 检测结果：痰涂片（-），菌培（-），肺部X射线可见肺结节， 胸腔积液 诊断过程：该院诊断为结核但治疗无好转，患者转院检测IGRAs （-），试管凝集实验+，布病抗体+，确诊布氏杆菌感染，与 该院打官司胜诉。 结果分析：由于痰涂片和菌培检出率低，阴性也未能引起重视， 只凭X片和症状诊断为结核并治疗。治疗无效后，病人转院，检 测IGRAs阴性，考虑排除结核，且病人为牧民，确诊布氏杆菌病 。官司败诉后，该院才开始重视IGRAs检测。 最终确诊：布氏杆菌病 临床应用案例 MTB
15、与NTM的鉴别诊断： 某院感染科病人，男 临床症状：发热1周，咳嗽，少量痰 检测结果：两次痰涂片（+），两次TB-IGRA（-），肺部X射线 无异常，后经菌培鉴定为菌培（-） 结果分析：痰涂片不能区分非结核分枝杆菌，造成假阳性，而 TB-IGRA与菌培结果相符，对结核分枝杆菌有很好的特异性。 临床诊断：鸟型分枝杆菌感染 临床应用案例 NTM（非结核分枝杆菌）比例增高 u2000 年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ， 其中90% 为非结核分枝杆菌肺病。 uNTM 肺病的临床表现与结核病相似， 既可有全身中毒症状，亦 有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，20%-50%
16、 的病人 无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现难与肺结核病相鉴 别。 uPPD 试验：弱阳性多见，但不能鉴别MTB和NTM感染。 u细菌学检查：常规痰涂片无法鉴别MTB和NTM。 u培养特性：固体培养基上，NTM菌落常光滑，部分菌落有色素产 生，生长迅速，且在含PNB(对硝基苯甲酸)和含TCH (噻吩二羧 酸肼)选择性培养基上均可生长，而结核分枝杆菌只在TCH选择 性培养基上生长。 使用抗TNF药物前排查结核的意义 06.16.201126 发病率 /100.000 患者/年 Dixon W G et al. Ann Rheum Dis 2010;69:522528. Tubach et al. Arthritis 60: 1884-1
