实验一微生物实验课介绍与要求与环境、人体表面微生物检测

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1、微生物学实验课介绍与要求 及环境、人体表面微生物的检测 任课教师 程立忠（13888812282） 王绍辉（13888336373） 张理珉（13033364856） 余泽芬（13577093398） 教材用书 1沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（ 第三版）北京：高等教育出版社，1999 第四版已于2007年11月出版 主要参考书 1杜连祥，路福平主编微生物学实验技术 M北京：中国轻工业出版社，2005 2周德庆微生物学实验教程（第2版）M 北京：高等教育出版社，2006 3杨文博主编微生物学实验M北京：化 学工业出版社，2004 4赵斌，何绍江主编微生物学实验M北 京：科学出版社，200

2、2 5东秀珠，蔡妙英主编常见细菌系统分类和 鉴定方法M北京：科学出版社，2001 本次实验的主要内容本次实验的主要内容 1、明确实验课的目的； 2、实验课的内容介绍； 3、实验课的具体安排和要求； 4、实验安全知识介绍 5、实验室环境及人体表面微生物检测 实 验 内 容 一 微生物学实验课介绍 与安全教育 1、实验课的目的 掌握微生物实验的最基本操作掌握微生物实验的最基本操作 技术技术 相关技术得到充分训练（熟练相关技术得到充分训练（熟练 掌握最好）掌握最好） 读、想、学、会、用读、想、学、会、用 2 2、实验课的内容介绍、实验课的内容介绍 意义： 微生物学是生命科学中最基础的学科 之一，实验

3、技术的独特性和重要性。 促进了多个学科的建立和发展生 物化学、分子生物学、生物工程学、免 疫学、病毒学等等 广泛的应用基础理论研究、工业 、农业、环境、医学、食品等， 实验内容 无菌操作技术； 培养基的制备和消毒灭菌技术； 微生物的分离培养纯化技术； 菌种的保藏技术 微生物制片染色技术； 微生物数量和大小测定技术； 噬菌体的分离纯化及效价的测定； 微生物生理生化反应； 微生物DNA提取技术介绍； 免疫学技术介绍； 3 3、实验课的具体安排和要求、实验课的具体安排和要求 实验课学习要求实验课学习要求 实验过程的要求实验过程的要求 实验课安排实验课安排 良好的实验习惯良好的实验习惯 实验报告的形式

4、实验报告的形式 成绩的评定及组成成绩的评定及组成 实验课学习要求实验课学习要求 认真对待，做好预习，加强自主认真对待，做好预习，加强自主 抛砖引玉，增强学科联系抛砖引玉，增强学科联系 多发现问题，多和教师交流多发现问题，多和教师交流 注重原理，努力创新注重原理，努力创新 做到做到“ “读、想、学、会、用读、想、学、会、用” ” 实验过程的要求实验过程的要求 实验过程注意安全（具体介绍）实验过程注意安全（具体介绍） 操作时要预防空气对流操作时要预防空气对流 接种时不要走动和讲话接种时不要走动和讲话 认真做好环境卫生，做到认真做好环境卫生，做到“ “干干干干 净净进来，干干净净出去净净进来，干干净

5、净出去” ” 进出实验室要洗手进出实验室要洗手 实验课安排 根据教学计划，本门实验课程2学分， 4学时/周，14周共56学时，每学时45分 钟，每次课3小时；实验结果的观察是 实验过程的重要内容。 分组两人一组，登记联系电话； 穿白色实验服进入实验室； 每组准备记号笔和打火机各一个； 值日生由班委每次实验前委派； 下午实验课改在13：30上，上午的不上午的不 变。变。 良好的实验习惯良好的实验习惯 不迟到，不缺席，有事提前请假；迟到5分 钟以上以缺席计入实验习惯成绩； 爱护实验用具； 实验完成后认真清洗实验用具，并摆放整 齐； 离开实验室要经教师检查同意方可离开； 认真做好值日生工作，有人具体

6、负责安排 检查。 实验报告的格式 实验目的实验目的 实验原理实验原理 实验材料和器材实验材料和器材 实验方法和步骤实验方法和步骤 实验结果、数据实验结果、数据 分析讨论及思考题分析讨论及思考题 实验报告要求 1.每位学生准备规定式样的实验报告纸。 2.上课时每给出一次作业，就在下一次上 课前上交这一次的实验报告，不得拖延时间 ，否则后果自负。 3.报告要求写清楚实验目的、原理、步骤 、结果及思考题。希望简洁、工整。 4.本门课结束前，要求使用统一的封面， 把自己的所有实验报告按实验先后顺序装订 成一册，交给实验教师。 实验成绩 平时成绩（平时成绩（20%20%，安排于实验过程中，安排于实验过程

7、中 或或 期末进行操作考核）期末进行操作考核） 实验习惯（实验习惯（10%10%） 期末考试（期末考试（20%20%，笔试考试），笔试考试） 实验报告（实验报告（50%50%） 可能组织就实验内容进行答辩，替代可能组织就实验内容进行答辩，替代 期期 末考试末考试 实验用到仪器设备 显微镜（光学普通、相差、微分干涉差 、暗视野；电子扫描、透射）；高压蒸汽 灭菌锅（立式和卧式）；超净工作台、隔水式 恒温培养箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振荡培养 箱（旋转式和往复式）；旋涡振荡器；恒温水 浴锅；pH计；分光光度计（紫外、可见光、红 外、原子吸收等）；离心机；电泳仪、PCR仪 、发酵罐、酶标仪、冰箱；微波炉

8、等。 实验用到器械 试管（test tube） 德汉氏小管（Durham tube） 小塑料离心管，又称Eppendorf管 玻璃吸管（glass pipette） 微量吸管（micropipette） 微量加样枪 培养皿（petri dish） 三角烧瓶（erlenmeyer flask） 实验用到器械 载玻片（slide）和盖玻片（coverslip ） 滴瓶(dropper bottle) 接种工具接种环、接种针、接种钩 、接种铲、接种刀、涂布器（玻璃或不锈 钢制作）等。 常见的接种工具 （可根据要求自已定做） 常用玻璃仪器 实验室安全 实验教学过程中出现的各类突发事故和实验教学过程中出

9、现的各类突发事故和 事件主要有：事件主要有： 1、火灾； 2、触电； 3、跑（漏）水； 4、化学品伤害及中毒； 5、灼伤； 6、割（划）伤。 实验室安全实验室安全 事故处理要求事故处理要求 先保护好自身的安全，再施救 不要慌张，按安全预案处理 认真负责，不推缷责任 逐级上报，不隐瞒事故 (一)化学药品及溶剂的处理方法 1.1.在使用强酸或强碱时必需戴上安全手套，并戴在使用强酸或强碱时必需戴上安全手套，并戴 上安全眼镜。上安全眼镜。 2.2.有机溶剂，固体化学药品，酸、碱化合物均需有机溶剂，固体化学药品，酸、碱化合物均需 分类存放，挥发性之化学药品更必需放置于具有抽分类存放，挥发性之化学药品更必

10、需放置于具有抽 气装置的药品柜内。气装置的药品柜内。 3.3.高挥发性或易于氧化之化学药品必需存放于冰高挥发性或易于氧化之化学药品必需存放于冰 箱或冰柜之中。箱或冰柜之中。 4.4.强酸或强碱（包括废酸碱）不得存放于金属架强酸或强碱（包括废酸碱）不得存放于金属架 之上。之上。 (二)安全用电，防止事故 1.1.了解实验室总电源开关的安装位置。了解实验室总电源开关的安装位置。 2.2.不可用湿手操作电器，使用电工工具前确认其不可用湿手操作电器，使用电工工具前确认其 完好无损。完好无损。 3.3.严禁在实验室内私自接用电源。严禁在实验室内私自接用电源。 4.4.确保漏电保护器起作用，用电器外壳接好

11、地线确保漏电保护器起作用，用电器外壳接好地线 ，实验室无人时要切断电源。，实验室无人时要切断电源。 5.5.遇有电器失火，先要切断电源，再行灭火。遇有电器失火，先要切断电源，再行灭火。 6.6.人身触电，立即人工呼吸，再送医院，切忌打人身触电，立即人工呼吸，再送医院，切忌打 强心针。强心针。 （三）节约用水，防止跑漏 1.不用水时，随手关闭阀门。 2.废物废液不准倒在水槽内，实 验完了放水冲洗水槽和下水管， 勿使废液残留其中。 （四）安全用药，防中毒 1.使用化学药品前，要充分了解其化学性质、物 理性质和使用注意事项。 2.不能尝化学药品，也不能直接去闻化学药品， 避免用手直接去接触药品；使用

12、药品和实验结束后 立即用肥皂水洗手。 3.尽量不可在实验室进餐。 4.有毒或带剌激味的实验要在通风橱内进行，实 验期间要开排风扇，或开窗通风。 5. 做好废液处理，防止环境污染；发现中毒现 象，及时对症治疗，必要时送医院。 实验时需特别注意： 人身安全 防止割伤、灼伤，如有 发生，应用急救药品施治 。 意 外 对 策 学生衣服着火的对策 以灭火毡包裹 该同学，并使其在 地上滚动 其他同学立刻通知 老师。 实验室的窗帘布着火的对策： 取出灭火器，拔出安 全针。 把喷咀对准火源。 按掣使灭火器喷出二 氧化碳。 其他同学立刻通知老 师。 酒精溅在实验桌上并着火的对策： 利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用

13、沙盖着。 其他同学立刻通知老师。 学生打破了烧杯，被碎片割伤流血的 对策 以清水冲洗伤口。 贴上干净的消毒胶布。 其他同学立刻通知老师。 化学药品溅进学生的眼睛内的对策 用洗眼瓶以大量清水冲洗眼睛。 其他同学立刻通知老师。 一个学生在倾倒酸时意外地接触到酸 的对策 立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。 立刻通知老师。 实验物品常见警告标识符号 灭火器及其使用方法 实 验 内 容 二 实验室环境及人体表面实验室环境及人体表面 微生物的检测微生物的检测 一、目的要求 检查实验室空气中及各人手 上的微生物(细菌为主)，并加以统 计、比较和描述（数量、菌落形 态等）。 使学生认识到微生物无处不 在，以便

14、在以后的实验中重视无 菌操作。 二、实验原理 微生物广泛分布于室内外、水、空 气和土壤中； 通过对环境和人体表面微生物的检 测及观察，建立起“微生物无处不在 、无孔不入”的概念。 形成自身良好的卫生习惯，认识到 在微生物实验中无菌操作的重要性 。 平板培养基含有微生物生长所需的营养 成分，当不同来源的样品接种于培养基上 ，在适宜温度下培养，12天内每一菌体细 胞即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖， 形成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）； 每种微生物都有其特有的菌落形态，一 般情况下一个菌落对应一个微生物活细胞 ，这样就可以统计不同微生物在某样品中 的数量。 三、实验材料及器材三、实验材料及器材 牛

15、肉膏蛋白胨培养基平板 3个/组； 洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培 养箱等。 四、实验方法及步骤四、实验方法及步骤 （一）实验室空气中微生物检查（一）实验室空气中微生物检查 （二）手上微生物检测（二）手上微生物检测 1 1、取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板、取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板 ，打开上皿盖（皿盖扣放，开始计时，打开上皿盖（皿盖扣放，开始计时 ），使培养基暴露于空气中），使培养基暴露于空气中3030分钟，分钟， 盖上皿盖。盖上皿盖。 2 2、在、在3737下倒置培养下倒置培养24482448小时，小时， 观察结果，统计微生物数量。观察结果，统计微生物数量。 （一）实验室空气中微生物检查（一）实验室空气中微生物检