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1、发酵工程学科的进展 第四次全团发酵工程学术讨论奢论文集 益生菌对一些致病菌抑制作用的研究 于海，邢锋锋，汪志君 ( 扬州大学食品科学与工程学院，扬州2 2 5 0 0 1 ) 擅耍：丰文的主要内容是研究从市譬的破奶中筛选得到的五株乳杆菌对大膊杆菌，涉门 氏酋及幽门蜱麓杆菌的抑制作用。实验的结果显示3 7 恒温培养2 4 小时。五椿乳杆苗在 大肠杆菌、涉几氏菌厦幽门螺旋杆菌的培养基上均产生大小不同的抑酋圈，通过对抑制田直 径的测定及观察，发现其中一株乳杆菌( Y D 2 5 1 7 ) 对三者致病菌的抑制作用蕞强，并明显强 干对照苗( Y D 2 4 1 0 ) 关键阕：乳杆蕾I 大膀杆菌；沙门
2、氏菌I 幽门螺旋杆苗I 抑制作用 前言 人体内的肠道茵群在一定情况下可危害人体健康，即若肠道菌群平衡失调，则对人 体有益的菌群明显减少而影响人体的正常机能，或是对人体有害的病源菌相当活跃，在 肠道内大量繁殖，释放毒索，破坏机体组织，引起肠道功能紊乱，从而使人出现种种病 态如大肠杆菌可导致人腹泻；幽门螺旋杆菌，易引起慢性胃炎和消化性溃疡；沙门氏菌 感染后可引起急性胃肠炎等疾病。 益生菌最早由梅契尼柯夫在1 9 0 7 年提出的发酵乳制品有助于健康长寿的理论发展 而来的，而益生菌的定义是在1 9 6 5 年由L i l l y 提出的，指对饲养动物肠道菌平衡有益的 促进物或微生物。之后关于益生菌的
3、概念不断完善，现代的益生菌的定义是由G u a r m e r 于1 9 9 8 年提出的，指。当摄人一定量时对宿主健康有作用的微生物深入活体“。 益生菌是一类活的微生物，主要是作为肠道内固有菌群的补充，以帮助机体消化和 防止有害微生物的过度生长，起到促进机体健康的作用。 本文主要研究通过从市售的酸奶中筛选得到的一株乳杆菌对对大肠杆菌、沙门氏菌 及幽门螺旋杆菌的抑制作用。 1 材料与方法 1 1 菌株 供试菌株l 筛选得到的乳杆菌Y D 2 5 0 1 ，Y D 2 5 0 8 ，Y D 2 5 1 1 。Y D 2 5 1 7 ，Y D 2 5 3 2 对照菌株l Y D 2 4 1 0 (
4、 H a n s e n 公司) 致病性大肠杆菌Y Y - 2 1 由医学院提供 幽门螺旋杆菌1 1 6 3 7 ( 中国疾病预防控制中心) 沙门氏菌由扬大生技学院提供 1 2 培养基 于海等：益生苗对一些致病菌抑制作用的研究 改良M R S 培养基( g L ) ：蛋白胨1 0 0 、牛肉浸膏1 0 0 、酵母浸膏5 o 、葡萄糖2 0 0 、 吐温8 01 o g 、磷酸氢二钠2 0 9 、三水醋酸钠5 o 、柠檬酸三铵2 0 、硫酸镁0 2 5 、硫酸铵 0 0 5 、蒸馏永1 0 L 、调试溶液p H 至6 5 ，( 固体培养基再加1 5 琼脂) ，在1 2 1 ( 2 ，灭菌 1 5
5、 分钟。 L B 培养基( g L ) ：氯化钠1 0 0 、酵母提取物5 0 、胰蛋白胨1 0 0 。调p H 7 0 ，在 1 2 1 ，灭菌1 5 分钟。 营养肉汤培养基( g L ) ，牛肉浸膏5 0 胰蛋白胨1 0 O ，氯化钠5 ，K 2 H P O , 3 H ：O 2 6 ，蒸馏水1 0 0 0 ，调p H 7 4 。 营养琼脂培养基( g L ) t 牛肉浸膏3 0 。胰蛋白胨5 0 ，琼脂1 5 0 ，蒸馏水1 0 0 0 ，调 p H 7 4 。 1 3 乳杆菌浓度的测定 将上述五株乳杆菌接种到M R S 液体培养基内，培养1 8 2 4 h 后，测其O D 6 0 0
6、值，以 M R S 液体作空白对照。当O D 6 0 0 在0 5 左右时，其活菌数达2 1 0 8 1 0 。c f u m l 。 1 4 致病性大肠杆菌殛沙门氏菌 将大肠秆菌及沙门氏菌接种于营养肉汤中，3 7 C 培养1 8 h 后，传2 3 代。平板计数 法计活菌数。控制其活菌数在1 0 e f u m l ，此浓度易致病。 1 5 幽门螺旋杆菌 将冻融后的幽门螺旋杆菌接人S k i r r o w 氏培养基表面，置于密封罐年3 7 培养，抽 成真空，充人C o z 及M 。 1 6 对致病菌抑制作用的测定 1 6 1 对大肠杆菌的抑制作用 分别吸取乳杆菌菌液、大肠杆菌的菌液I m L
7、 于无菌试管中，加人M R S 液体培养基 4 m L ，3 7 培养1 8 h ，之后将混合培养液稀释，取l o 、1 0 、1 0 、1 0 _ 6 四个稀释度，用伊 红美兰培养基计数其中大肠杆菌的活菌数。 1 6 2 对沙门氏菌的抑制作用 抑菌性能观察：吸取活化好的沙门氏菌菌液l m L 在营养琼脂培养基上均匀涂开， 3 7 固定培养苗落3 0 m l n ，在平板上打直径为4 r a m 、深3 r a m 的孔，将供试菌液注至满孔， 不可溢出孔外，于3 7 培养2 4 h 观察、测量抑菌圈直径 同时用对照菌株Y D 2 4 1 0 作对 照，三次重复。 判定标准：抑菌圈直径4 m m
8、 为不敏感：直径5 8 m m 低度敏感 8 - - 1 2 r a m 中度敏 感；直径，1 2 r a m 为高度敏感。 1 6 3 对幽门螺旋杆菌的抑制作用 幽门螺旋杆菌菌落的洗脱和比浊：用生理盐水将培养皿表面的茵落洗脱下来同麦 氏标准比浊管进行比浊，确定菌数的浓度，使其浓度控制在1 0 5 c u m L 。 吸取幽门螺旋杆菌菌液0 5 m L 于培养基放置1 h ，待表面的菌液固定后打孔，孔直径 4 r a m ，孔深3 r a m ，将供试菌液注至满孔，不可溢出，于3 7 微需氧环境培养4 8 h ，观察结 果、测量抑菌圈直径，三次重复 第四次全国发酵工程学术讨论会 判定标准：抑菌
9、圈直径4 r a m 为不敏感：直径5 8 r a m 低度敏感；8 1 2 m m 中度敏 感；直径，1 2 r a m 为高度敏感。 2 结果与分析 2 1 对大肠杆菌的抑制作用 大肠杆菌和乳酸菌菌液混合培养2 4 h 后，稀释计数其中的活菌数。结果见表1 。 从表1 可以看出，供试菌株与大肠杆菌混合培养2 4 h 后，大肠杆菌的菌数均有所下 降，下降的程度因菌株不同各异。以Y D 2 4 1 0 抑制大肠杆菌的对照看来，下降程度最大 的为Y D 2 5 1 7 ，说明该菌有明显抑制大肠杆菌生长的能力f 而菌株Y D 2 5 0 1 、Y D 2 5 0 8 和 Y D 2 5 1 1 对
10、大肠杆菌的抑制作用与对照菌株相似：菌株Y D 2 5 3 2 抑菌能力相对较差。 2 2 五株乳杆菌对沙门氏菌的抑制作用 通过营养琼脂平板扩散法，每株菌株 做3 个平皿，每个平皿打3 个孔，观察孔 内乳杆菌通过琼脂渗透向周围扩散生长 的情况。发现孔洞周围有透明的抑菌圈出 现说明供试乳杆菌对沙门氏菌有抑制作 用，测定发现不同的菌株出现的抑菌圈大 小不等，说明不同乳杆菌对沙门氏菌的的 抑制能力亦不相同，对沙门氏菌抑制作用 袭l 不同菌株对大肠杆菌的抑制作用 菌株活菌数 Ec o l i Y D 2 4 1 0 + Ec o l i Y D 2 5 0 l + E c o l i Y D 2 5 0
11、 8 + Ec o l i Y D 2 5 1 1 + Ec o i l Y D 2 5 1 7 + Er o l l Y D 2 5 3 2 + E c o l i 9 0 1 0 7 9 0 1 0 5 O 1 0 2 0 1 0 1 _ 2 1 0 0 1 4 10 7 最强的为菌株Y D 2 5 1 7 。抑菌圈直径1 3 m m l 而菌株Y D 2 5 0 1 、菌株Y D 2 5 0 8 和菌株 Y D 2 5 1 1 对沙门氏菌的抑制效果仅决于菌株Y D 2 5 1 7 ，分别为1 0 m m 、1 2 m m 和1 0 r a m , 菌 株Y D 2 5 3 2 抑菌效果最
12、差，直径为6 r a m ，低于对照菌株Y D 2 4 1 0 的抑菌直径8 m m 。 2 3 对幽门螺旋杆菌的抑制作用 通过营养琼脂扩散法，每株菌株做3 个平皿，每个平皿打3 个孔，观察孔内乳杆菌通 过琼脂渗透向周围扩散生长的情况，发现孔洞周围有里深绿色的抑菌圈出现，说明供试 乳杆菌菌株对幽门螺旋杆菌有抑制作用，涮定发现不同的菌株出现的抑菌圈大小不等， 说明不同乳杆菌对幽门螺旋杆菌的的抑制能力亦不相同，对幽门螺旋杆菌的抑制作用最 强的为菌株Y D 2 5 1 7 ，抑菌圈直径为1 2 8 r a m ，而菌株Y D 2 5 0 1 、菌株Y D 2 5 0 8 和菌株 Y D 2 5 1
13、1 对幽门螺旋杆菌的抑制效果仅决于菌株Y D 2 5 1 7 ，分别为1 0 m m ，l l m m 和9 m m ； 菌株Y D 2 5 3 2 抑菌效果最差，直径为5m m ，低于对照菌株Y D 2 4 1 0 的抑菌直径8 r a m 。 3 结论 通过研究五株菌Y D 2 5 0 1 、Y D 2 5 0 8 、Y D 2 5 1 1 、Y D 2 5 1 7 和Y D 2 5 3 2 对三种致病菌大肠 杆菌、幽门螺旋杆菌和沙门氏菌抑菌作用，结果表明菌株Y D 2 5 1 7 对上述三种致病菌均 有明显的抑制作用，而菌株Y D 2 5 0 1 、Y D 2 5 0 8 和Y D 2
14、5 1 1 对三种致病菌的抑制作用与对 照苗Y D 2 4 1 0 相似，菌株Y D 2 5 3 2 对三种致病菌的抑制作用低于对照菌Y D 2 4 1 0 。 于海等：益生菌对一些致病菌抑制作用的研究 1 1 7 参考文献 1 张小平顾瑞茬益生菌发酵牛韧乳对致病苗抑制作用的研究中国乳品工业2 0 0 5 ，3 3 ( 3 ) t 1 0 - 1 2 2 张英春，张兰威王静等盎生苗功能特性研究中国乳品工业2 0 0 6 3 4 ( 2 ) ；1 3 一1 5 C3 马萍盏生菌对鸡大脑杆苗的抑崩试验甘肃畜牧兽医2 0 0 6 3 6 ( 2 ) ：2 4 - 2 5 【4 王建国车兰娟益生茁拮抗大肠杆菌0 1 5 7 ：H 7 感染研究进展国外医学( 流行病学传染病学分册) 2 0 0 3 ，L 3 2 ( 6 ) I3 6 4 3 6 ， 5 C h i a r a C L I m ，L y n i A e t t e R F e r g u s o n lA n d G e r a l d W ，T a n n o c kM 0 1 N U t r oF o o d R e 2 0 0 5 t4 9 6 0 9 6 1 9
