《牛杀菌通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达(1)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《牛杀菌通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达(1)（104页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号 华中农业大学硕士学位论文 二53017O 密级 牛杀菌通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建 及其在大肠杆菌中表达 T h eC o n s t r u c t i o no fB a c t e r i c i d a l P e r m e a b i l i t y - i n c r e a s i n gP r o t e i n a n dD e f e n s i n sG e n eF u s i o nP l a s m i do fC a t t l ea n d I t sE x p r e s s i o ni n Ec o l i 研究生：胡伶俐 指导教师：
2、易建明教授 指导小组：易建明教授 杨利国教授 龚炎长教授 张淑君教授 霍立军教授 专业：动物遗传育种与繁殖 获得学位名称：农学硕士 研究方向：动物生殖生理与生物技术 获得学位时间：2 0 1 0 年6 月 华中农业大学动物科技学院 二O O 年六月 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否如需保密，解密时间年 月日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取褥的研究成 果尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师
3、对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究生签名：懒剥 时问：细p 年占月肜日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关予保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表传播学位论文的全 部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力 注：保密学位论文( 印涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文) 在解
4、密后适用于本授权书 学位论文作者签名：嘲黔伟j 导师签名： 易建哆 签名日期：坳年歹月，p 日 签名日期：2 9 ，D 年参月7 日 注：请将本袁商接装订住学侮论文的席页和目录之阀 牛杀菌，通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达 目录 目蜀乏I 中文摘要。1 A B S T R A C T 3 第一部分文献综述7 1 杀菌通透性增加蛋白的研究进展7 1 1 引言。7 1 2B P I 的发现与分布7 1 3B P I 的分子结构及作用机理8 1 4B P I 的生理功能9 1 5B P I 的应用前景1 2 2 动物防御素的研究进展1 3 2 1 引言1 3 2 2 防御
5、素的种类和分布1 3 2 3 动物防御素的分子结构特征1 8 2 4 动物防御素基因的染色体定位及其表达调控2 1 2 5 防御素的生理功能及作用机制2 2 2 6 防御素的应用前景2 6 3 目的与意义2 8 第二部分试验部分3 0 试验I 荷斯坦奶牛B P I 基因的克隆3 0 1 试验材料3 0 1 1 试验材料的来源3 0 1 2 限制性内切酶3 0 1 3 主要试剂及其配制31 1 4 主要仪器设备3 2 2 试验方法3 3 2 1 荷斯坦奶牛血液白细胞总R N A 的提取3 3 2 2 总R N A 的检测3 3 2 3 总R N A 的纯化3 4 2 4 反转录3 4 2 5e
6、D N A 看家基因的检测3 5 2 6B P I 基因的P C R 扩增3 5 3 7 3 9 ：；9 ：；9 3 9 4 1 4 5 4 6 4 7 4 7 肠杆菌中的表达、纯化和活 4 8 4 8 4 8 1 2 限制性内切酶4 8 1 3 主要溶液及其配制4 8 1 4 主要仪器设备4 9 2 试验方法5 0 2 1p E A S Y - T 1 - B P I 和p B l u e s c r i p t - B N B D 4 质粒的双酶切及其产物的回收5 0 2 2 表达载体p E r - 2 8 a ( + ) 的线性化及其双酶切产物的回收5 1 2 3 重组质粒p E T -
7、 B P I 的构建5 1 2 4 重组质粒p E T - B P I 的线性化及其双酶切产物的回收5 2 2 5 融合质粒p E T - B P I B N B D 4 的构建5 2 2 6 融合质粒p E T - B P I B N B D 4 在大肠杆菌中的诱导表达5 4 n 1 2 2 4 4 4 3 3 3 3 4 5 5 4 4 4 4 4 4 4 牛杀菌通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达 2 7 融合蛋白体外活性试验5 6 3 试验结果5 7 3 1p E A S Y - T 1 B P I 和p B l u e s c r i p t - B N B
8、D 4 质粒的双酶切及其产物的回收5 7 3 2 表达载体p E T - 2 8 a ( + ) 的线性化5 7 3 3 重组质粒p E T - B P I 的提取5 8 3 4 重组质粒p E T - B P I 测序结果5 9 3 5 重组质粒p E T - B P I 的线性化5 9 3 6 融合质粒p E T - B P I B N B D 4 的提取5 9 3 7 融合质粒p E T - B P I B N B D 4 双酶切鉴定6 0 3 8 融合质粒p E T - B P I B N B D 4 测序图6 l 3 9 融合蛋白的S D S P A G E 检测6 2 3 1 0 融合蛋白的W e s t e r nb l o t 鉴定6 3 3 1 1 融合蛋白的生物信息学分析6 3 3 1 2 融合蛋白体外活性试验6 7 4 J 、结。6 9 全文讨论7 0 1 基因的扩增7 0 2 融合表达载体的构建7 0 3 融合蛋白的表达
