《用znscdse量子点标记、激光共聚焦扫描法在微阵列芯片上进行免疫分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《用znscdse量子点标记、激光共聚焦扫描法在微阵列芯片上进行免疫分析（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分析化学的成就与挑战 用Z n S I C d S e 垦子点标记、激光共聚焦扫描法 在微阵列芯片上进行免疫分析. 孙宝全4 i衣光舜陈抽朴 声 谢文章2周玉样2 清华大学 化学系 之 清华大学生 物芯片开发中 心 北京 程 京2 1 0 0 0 8 4 ) 关锐词 C d S e / Z h S 量子点 纳米材料荧 光标记 三明 治免疫分析法 根 据量 子 限 制效 应. 当 月 得体荧 光 材料的 颗粒 直 径 减 小 至小 于 AS 子的 波 尔 直 径 ( 1 n m -1 0 n m ) 时， 这 时的 纳 米 粒子 称为 量 子点( Q u a n t u m D o t s ,
2、Q D s ) ， 其光 学 性 质 要 发生 较 大 变 化 m 。 例 如， Z n s 包 覆的c a s e ( C d WZ n S ) Q D s , 量 子 产率 达到3 5 % - 5 0 0/ a . 单 个量 子点 的 荧 光强度 相当 于2 0 个 r h o d a m i n e 6 G分子的强度， 灵敏度高， 可 进行单个量子点的 检测。 如 将其与生 物分子如D N A 抗体等连接， 可实 现单个生物分子的 检测。同 时 Q D不易 被光漂白 ， C d S e / Z n S光漂白 发射寿命 较长 ( 半 衰期r,2=960 s ) ， 约为d i o d a
3、m in e 6 G ( i 1 =1 0 s ) 的1 0 0 倍。 发 射 峰窄， 有利于 灵 敏度 和选 择性的 提高 。 激发 O CR 宽 ， S t o k e s 位 移 大， 有利 于 激 发 光 波长 的 选 择 和信 噪比 的 提高。 Q D s 是优良 的生物分子的荧光标记 材料， 具有有 民 高的灵敏度和很低的背景冈 。 本文报道了一种在微阵列芯片上用激光共聚焦扫描法进行荧光显相分析的免疫读出方法。 该方 法 采用的 是非 均 相夹心 三明 治 免疫 M V ， 其原 理如图 1 。 首 先 将 C d S e / Z n S ( Q D ) 共 公 打 奎 接 山 -
4、 f 门 动 月 吧 . 目。 勺目 目- 产y Y Y Y Y8h- an.斗 丫 . 肠。 勿 3 L ，c g m 目. 刘 ， . 岭二奄垃 比 目甲 曰 . . 圈， 非均相夹心三明 治免痊法 至检测抗体上。 用 L , D - 疏基玻拍酸对量子点表 面进行修饰， 通过使 L , ) - 疏基珑拍酸的疏基与 Q D s 表面锌原子共价连接， 将装酸基团连接至 Q D s 表面。 这 些 狡 基一 方 面 增 加了Q I 、的 水溶 解性，同 时还可以 与检测抗体的 胺基连接。 通过 水 溶性卜 乙 基 - 3 - ( 3 一 二甲 氨基丙基卜 碳 化二亚 胺 ( E D C ) 对Q
5、 D s 狡酸 进 行活 化， 并与 检 测抗体 的 胺基连 W ， 获 得Q D荧 光 标记的 检 M 抗体。 免疫分析在一块玻璃芯片上进行。用机器人微量 样品分配器将 3 - A基丙基三甲氧基硅烷点样于 玻璃芯片上，并在催化量的二异丙基乙胺存在下 进行反应，制成自 组装的单分子层胺基修饰的 微阵列玻璃芯片1 5 1 ，用戊二醛将芯片表面胺基 转化为醛基， 将抗体共价地连接至芯片上。芯片 上的 抗体专 属性地捕捉抗原。 然后用Q D标记的 检测抗体再专属性地与 捕捉的 抗原结 合。 形成三明 治型的 抗体 . 抗厦检测抗体的结合体。 用激光 共聚焦扫描法检钡 叮 三明治结合体的荧 光信号，
6、实 现了 微阵列芯片的 免疫分析。 使用牛血 清蛋白 消 除非专属性 干扰， 二极管激光器 ( 波长 5 3 2 r im ) 用于激发光源。 在本实 验条件下该方法的 检测 限为1 0 - m o 比。 用羊. 如 和人I g o样品 进行了Q D标记的1 如 的 专属性实验， 结果与三明治型 场J广月汁鱿 . 国 家自 然科学基金重点 项目 资 助课短。 一一一 全 W1; l* lt ,tti t 与 # k 键合专属性一致。 参 考 文 献 A l i v l s a t o s A P S c i e n c e , 1 9 9 6 , 2 7 1 : 9 3 3 C h a n W
7、 C W a n d N i e S 从 S c i e n ce , 1 9 9 8 , 2 8 1 : 2 0 1 6 蒋成 淦，陶 义训. 酶免 疫侧定法. 北京: 人民卫 生出 版社，1 9 8 4 G r a b a r e k Z a n d G e r g e ly J . A n a L B io d te n i ., 1 9 9 0 , 1 8 5 : 1 3 1 R e g n i e r F E a n d N o e l 几J . C h ro m a to g r . S c i , 1 9 7 6 , 1 4 : 3 1 6 1 l ti c ro m i n i
8、 a t u r i z e d i m m u n o a s s a y s u s i n g q u a n t u m d o t s l a b e l e d i m m u n o m o l e c u l e s 勿l a s e r c o n f o c a l s c a n n i n g f l u o re s c e n ce d e t e c t io n S u n B a o q u a n , 1 5 G u a n g s h u n C h e n D e p u -2 m e W e n z h a n g Z h o u Y u x ia 犷
9、 C h e n g J tn g ( 1 . D e p a r tm e n t o f C h e m is t ry , T s in g h u a U n i v e r s i t y , 2 . B i o c h i p R e s e a rc h a n d D e v e l o p m e n t C e n t e r , T s in g h u a U n iv e r s i ty , B e ij in g 1 0 0 8 4 ) A b s t r a c t : A n i m m u n o a s s a y r e a d o u t m e t
10、h o d b a s e d o n fl u o r e s c e n t i m a g i n g a n a ly s is w i t h l a s e r c o n f o c a l s c a n n in g w a s d e s c ri bed . T h e Z n S - c o a t e d C d S e q u a n t u m d o t ( Z n $ I C d S e Q D ) w a s l i n k e d t o a d e t e c t i o n a n t i b o d y . I m m u n o a s s a y
11、 w a s c a r r i e d o u t o n a g la s s c h i p u s i n g s a n d w i c h a s s a y a p p ro a c h , w h e re a n t ib o d y c o v a le n t ly b o u n d t o a g l a s s c h i p w a s a l lo w e d t o c a p t u r e a n t i g e n s p e c ia l l y . A ft e r w a r d s , t h e d e t e c t io n a n t i
12、 b o d y l a b e l e d w i t h Q D w a s a l l o w e d t o b i n d s e l e c t i v e ly t o t h e c a p t u r e d a n t i g e n . A l a s e r c o n f o c a l s c a n n e r d e t e c t e d t h e fl u o re s c e n t s i g n a l s o f t h e s a n d w i c h c o n j u g a t e . A d io d e l a s e r w a s
13、 u s e d t o e x c it e e f fi c i e n t ly t h e fl u o re s c e n t s i g n al s w h il e b o v in e s e r u m a l b u m i n w a s u s e d t o e l im i n a t in g n o n s p e c i fi c b i n d i n g s it e s . U s in g w a v e le n g th - m a t c h e d fl u o re s c e n t l a t e x s p h e re s a s
14、 a s t a n d a r d , it w a s e s t i m a t e d t h a t t h e fl u o re s c e n t i n t e n s it y o f a s i n g l e q u a n t u m d o t w a s e q u i v a l e n t t o t h a t o f 2 0 r h o d a m in e m o le c u le s . T h e d e t e c ti o n l i m it o f t h i s a p p ro a c h w a s u p t o 1 0 m o U
15、 L u n d e r c u rr e n t e x p e r i m e n t a l c o n d it io n . T h e s p e c i fi c it y o f t h e Q D s - l a bele d im m u n o g lo b u l in ( I g G ) w a s t e s 吸e d w it h g o a t i g G a n d h u m a n I g G s a m p l e s . T h e re s u l t 、 c o n s i s t e n t w i t h t h e b i n d i n g
16、 s p e c i fi c i t y i n a s a n d w ic h - t y p e a s s a y . T h e p o t e n t i al o f t h is m e t h o d t o f u n c t io n a s a s im p l e a n d e f fi c i e n t r e a d o u t s t r a t e g y f o r im m u n o a s s a y w a s d i s c u s s e d . K e y w o r d s : Z n S I C d S e Q u a n t u m d o t s F lu o r e s c e n t l a b e l w it h n a m o p a rt ic l e s S a n d
