【2017年整理】病理解剖技术

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1、病理解剖学技术(The technique of Pathology哈尔滨医科大学病理教研室金晓明,序: 病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮,缺一不可,互为依存,互相促进,两者的结合决定病理学的发展。,病理学的技术主要体现在几个结合上1.传统病理学技术与现代生物新技术相结合2.宏观、脏器、组织、细胞、超微与分子基因不同层次技术相结合3.形态、机能与代谢变化相结合4.定性、定位与定量观测相结合5.实验研究技术与临床应用技术相结合6.技术的基本原理与具体方法相结合7.基本技术知识与作者实践经验相结合,病理学的发展与使用的工具和方法的更新密切相关1.用解剖刀剪等进行尸体检查,开展了器官病理学2

2、.显微镜发明百年之后,建立了细胞病理学3.电子显微镜的问世,发展了超微病理学4.免疫组织化学促进了免疫病理学的发展5.分子生物学带动了分子病理学的兴起6.计算机及其网络的应用,将病理学走向信息病理学时代,传统病理学技术: 传统的Formalin固定,石蜡切片和HE染色技术仍是病理学的基本技术,大量应用与基础和临床病理学日常工作中,保证和提高常规质量和现代设备水平十分重要。,第一章:病理解剖技术一、病理解剖的意义 病理解剖技术是病理学的基础之一,是病理学不可分割的一部分。 通过病理解剖收集病理教学及科研资料是其中一个途径,大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。 病理解剖是通过解剖尸体观察和发

3、现死者器官、组织的病理变化,找出主要病变,分析判断直接死亡的一个重要方法。,二、病理解剖室的设备和器械1. 设备:1解剖室的设计要求 最好位于太平间; 室内面积要大,必须有两个门; 地面用水磨石,四周有排水沟或地漏; 室内通风好; 有消毒室,男女更衣室,浴室等。,2解剖台的设计 高低和大小要合适 台面可用水磨石或不锈钢 有条件可购置能够升降的解剖台 解剖台可带有抽气的功能等,水磨石台面的解剖台,水磨石台面的解剖台,不锈钢台面的解剖台,病理解剖器械,2. 器械:,3. 清洁、消毒和个人保护1病理解剖室的清洁和消毒2病理解剖器械的清洁和消毒3个人保护等,三、病理解剖的方法和步骤1. 病理解剖前的准

4、备 主要办理一切手续,非常重要。2. 体表检查,体表检查,尸斑,尸僵,3. 胸腹腔检查1切口2腹腔检查3胸腔检查,腹腔有渗出液,心包积液(血液,气管周围血液,液体称量,4. 内脏器官的取出及检查 一般有两种方法:1各脏器分别取出法 是病理解剖最常用的方法2多脏器联合取出法 此法比较简单,可保持各器官的完整性。,心脏,表面充血,绒毛心,双肺和支气管,肝脏,表面有结节,胰腺,出血改变,肠管,出血,脑,脑干出血,第二章 病理大体标本的制作一、大体标本的收集、取材、固定和保存1.大体标本的收集 通过尸体解剖和活体组织(包括外科手术切除标本和活体组织穿刺标本检查时发现并收集。2.大体标本的取材,取材室条

5、件:通风要好,必须有排风设备;固定的组织取材前要用流水充分冲洗;排水要远离住宅区等,不同器官的取材和固定不同:1实质性的器官:如肝、脾等 要注意,实质器官不容易被固定液所穿透。,肝癌,肝癌,肝癌,肝癌,2空腔器官:如胃、肠等 取材时要看全层,保持粘膜、肌层和浆膜全层的组织。,胃癌,呈菜花状,切面的形状,胃癌,溃疡型,切面的形状,切面的形状,浸润性至浆膜,溃疡型胃癌,溃疡型胃癌,切面的形状,浸润性至浆膜,3肺 肺组织比较疏松,固定液容易渗透。 肺组织的取材要清楚的了解各叶肺组织所伴随的支气管。,A:主支气管B:叶支气管,肺和气管周围的淋巴结,肺癌肺门型,肺癌肺门与周围之间,肺癌周围型,肺癌空洞型

6、,4)其它类型 外科手术标本常见: 乳腺癌 子宫颈癌 肠癌 卵巢肿瘤等,乳腺癌,乳腺癌,乳腺癌,乳腺癌,子宫颈癌,子宫颈癌,子宫颈癌,子宫颈癌,切面,3.大体标本的固定1固定的目的: 将受检组织尽快地侵入固定液内,使组织和细胞的固有成分迅速凝固,防治自溶和腐败,使其保持与生活状态有相似的结构,以利于切片和观察。2固定液的选择:A.甲醛(Fomaldehyde,又称福尔马林,其浓度在4,它是一种还原剂,极易挥发,散发出强烈的刺激性气体,使人流鼻涕、流眼泪,呼吸道有异物感。B.95酒精(乙醇,除具有固定组织的作用外,尚有脱水作用。,3固定液的特性 甲醛固定液渗透力强,固定均匀,对组织收缩较小,并能

7、增加组织韧性的优点,而且可以保存组织内的脂类物质,对组织的主要作用为硬化和防腐。 酒精可以保存组织内的糖类物质及尿酸结晶,不过,它常使组织明显收缩,且使脂类物质溶解。,4. 大体标本的脱水、包埋和切片 为能制成满意的切片,固定后的组织还要经过脱水、透明、浸蜡及包埋等一系列程序。1脱水:目的是将固定了的组织内水分除去。以便使切片时的支撑物(石蜡充分进入组织内。常用的是酒精。2透明:目的是使能与石蜡结合溶解的媒介剂进入组织,进而将不能与石蜡结合的脱水剂置换出来,并使组织透明。常用的是二甲苯。,3浸透和包埋:可使组织具有一定的硬度和韧度,便于切成薄的切片。常用的石蜡溶点为6062,有时为保存更多的抗

8、原成分。可采用低溶点石蜡(4850 。4切片切片机类型: 旋转式切片机 滑动式切片机,旋转式切片机,5. HE(Hematoxin Eosin,HE染色1苏木素染色配方: 苏木素 1g 纯酒精 10ml 钾明矾 20g 蒸馏水 200ml 氯化汞 0.5g2伊红染色配方: 伊红 0.5-1g 蒸馏水 99ml,HE染色法:1苏木素染色57分钟;2自来水冲洗多余的染液;31盐酸酒精分化数秒钟,使细胞核呈紫蓝色4自来水中充分洗涤;51氨水中数秒,至返蓝;6自来水中至蒸馏水冲洗;71的伊红染色,3分钟左右; 结果:细胞核呈紫蓝色,细胞浆呈粉红色,基底膜,胶原纤维及肌纤维呈粉红色。,HE切片,第三章

9、特殊染色 HE染色虽是一种快速、经济、且易掌握的方法,但它不能回答病因学、Z组织发生及发病机制等方面的许多问题。而特殊染色可以协助解决病理诊断问题。,目前市场上有配制好的特殊染色试剂,介绍常用的几种特殊染色1. 脂肪染色 主要用于心、肝、肾的脂肪变性,动脉粥样硬化,以及因脂肪栓塞导致的死亡病例鉴定等。1试剂配制:苏丹染液 苏丹III或苏丹IV0.5g,70%乙醇250ml,丙酮250ml。2染色方法:(1标本常规甲醛固定后流水冲洗12h;(2用滤纸吸干标本表面的水分,把标本放入苏丹III染液中浸泡30min;(3用70乙醇分化,以脂肪组织呈橙黄色,其它组织不着色为佳;(4水洗后浸存在5甲醛液中

10、,为了防腐可加入适量的防腐剂。,肝脂肪变,苏丹III染色,2. 过碘酸(periodic acid)-schiff染色,即PAS染色 此技术主要显示糖原(在淀粉酶消化对照下、中性粘液物质、基底膜、霉菌和寄生虫等。1 schiff氏试剂的配方:(1将200ml蒸馏水煮沸;(2冷却至90时,慢慢加入碱性复红1g;(3搅拌并煮沸5分钟使其全溶;(4冷却至50时过滤,并加入1N盐酸20ml;(5冷却至25时,再加入无水亚硝酸钠1g并搅拌匀。(6置入遮光瓶内并放入在4冰箱内保存备用。,2PAS染色方法:(11过碘酸水溶液染10分钟,使含有乙二醇的化合物氧化形成醛基;(2蒸馏水洗去过碘酸;(3 schif

11、f氏试剂反应15分钟,使醛基和schiff氏试剂结合,形成紫红色产物;(40.5%亚硝酸钠(NaHSO3)处理三次,每次2分钟;(5流水冲洗510分钟;(6用苏木素染色液复染细胞核;7水洗或1盐酸酒精分化。3结果: 细胞核呈蓝色,基底膜呈红色,胶原纤维、肌纤维及细胞浆呈红色。,过碘酸Schiff反应:糖元及其他PAS反应阳性物质呈红色,细胞核呈蓝色,PAS,念珠菌(PAS染色),附:AB/PAS法(阿尔辛蓝过碘酸雪夫染色法结果:中性粘液物质呈红色,酸性粘液物质呈蓝 色,中性和酸性粘液的混合物质呈紫色。,阿尔辛蓝阿尔辛黄法:常用于黏液上皮肿瘤的鉴别诊断,阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应:是显示中性和酸性黏

12、液物质的有效方法,HID/AB:高铁二胺奥新蓝法,AB/PAS,3. 六胺银(PASM染色 在肾脏活体组织检查和一些真菌感染的组织选用此方法。1PASM染液的配方: 2硝酸银水溶液3ml; 3六次甲基四胺液25ml; 5硼砂2ml。注:2硝酸银配制胺溶液,染色时间40分钟,温度 5560,随时镜下观察便于控制。,2PASM染色法:(11过碘酸水溶液内染10分钟;(2自来水冲洗,蒸馏水冲洗;(3入5铬酸水溶液40分钟,出此溶液后用1亚硫酸钠除掉铬酸;(4自来水洗数次,蒸馏水洗34次;(5入六胺银染液(506040分钟,20分钟后,每5分钟镜下观察一次,蒸馏水洗四次;(6入0.2%氯化金水溶液12

13、分钟,蒸馏水洗三次;(7入5硫代硫酸钠水溶液12分钟,蒸馏水洗数次;(8复染HE,脱水、透明、封片结果:底膜呈黑色,网状纤维呈黑色,细胞核呈蓝色,背景呈粉红色。,PASM染色,PASM染色,PASM,PASM,附:PASM对真菌的染色 真菌(fungus,又称霉菌,其种类较多。 真菌的基本结构成分是含有较多的粘多糖和蛋白质。1试剂的配制:(1六次甲基四胺、硝酸银原液(简称六胺银原液。3六次甲基四胺水溶液100ml,5硝酸银水溶液5ml;(2六胺银硼砂染色液。六胺银原液25ml,蒸馏水25ml,5硼砂水溶液2ml;(3核固红染液。核固红0.1g,硫酸铝5g,蒸馏水100ml;(4亮绿染色液。亮绿

14、0.2g,蒸馏水100ml,冰醋酸0.2ml。,2染色步骤:(15铬酸水溶液氧化1小时,流水洗2分钟,蒸馏水洗2次;(2浸入1亚硫酸钠水溶液除掉铬酸1分钟,流水洗5分钟,蒸馏水洗3次;(3浸入六胺银硼砂液染色11.5小时(4050温箱内,至切片呈浅棕色,蒸馏水3次;(4用0.2%氯化金水溶液调色3分钟,蒸馏水稍洗;(5核固红染色细胞核10分钟,流水洗,蒸馏水洗;(6亮绿染色液30秒,用蒸馏水快速稍洗;(7无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。结果:真菌均呈黑色,菌丝和孢子呈黑褐色,细胞核呈红色,背景呈淡绿色。,念珠菌(假菌丝),新生隐球菌性脑膜炎,4. 淀粉样物质染色(介绍刚果红染色) 淀粉样物质是一种嗜伊红性物质,性质属于糖蛋白成分。组织出现此物质称为淀粉样变性。1试剂配制:(1刚果红染色液。刚果红1g,蒸馏水100ml;(2Harris苏木素染色液。,2染色步骤:(1苏木素染色液浸染2分钟;(20.5%盐酸乙醇分化数秒钟;(3流水洗,蒸馏水洗2次;(4刚果红染色液中25分钟;(5无水乙醇迅速脱水2次;(6二甲苯透明,中性树胶封固。结果:淀粉样物质呈红色,细胞核呈蓝色。,

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