《河南省肉牛规模化养殖场牛病毒性腹泻的诊断与防制技术研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《河南省肉牛规模化养殖场牛病毒性腹泻的诊断与防制技术研究（131页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、原 创 性 声 明 原 创 性 声 明 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导 F ，独立进行研究工 作所取得的成果。 除文中己 经注明引用的内 容外， 本论文不包含任何其他个人或集体 已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者 ( 需亲笔)签名: 5v 4 初砰年 月， 2 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。 本人 授权南京农业大学可以将本学
2、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口， 在_ 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于不保密口。 ( 请在以_ 卜 方框内打 “J ) 学位论文作者 ( 需亲笔)签名: 导师 ( 需亲笔)签名: x t j 万 衅 年 ， 月， L q 年月日 中 文 摘 要 河南省肉牛规模化养殖场牛病毒性腹泻 的诊断与防制技术研究 摘 要 牛病 毒性腹泻( B o v i n e v i r a l d i a r r h e a , B V D) 是由牛病毒性腹泻病 毒( B o v i n e v i r a l d i a r
3、 r h e a v i r u s , B V D V) 引 起的，主要侵害牛、羊、鹿、耗牛、 猪等动物的一种重要的 传染病， 临床主要表现为 发热、 秘膜糜烂、 溃疡、白细 胞减少、 腹泻、 咳 嗽及怀孕母 牛流产或崎形胎儿。 世界每年死于B V D V感染的牛不少于5 0 0 万头， 占 牛饲养总数的 。 .5 %一 1 % 。随着我国养牛业的 迅速发展，国 外品种不断引进， 该病在我国 发生、流 行呈上升趋势。 早在2 0 世纪6 0 年代， 我国的云南、山东、四川等地就有类似该病发 生。目 前， 该病 在河南也普遍存在。为找到一种快速诊断B V D的方法， 有效地控制 其蔓延，做好防
4、制工作，减少B V D对河南省肉牛业造成的损失，本论文从以下几个 方面进行了 研究: 1 、河南 省牛病毒性腹泻流行病学 调查 从河南 省唐河、内乡 等巧个县市的不同牛 群随即采集 血样6 7 1 份， 从养牛业比 较发达的南阳、周口、 安阳3 市部分规模化肉 牛场随机采集6 4 5 份血样， 分别用牛病 毒性腹泻杭体和抗原E L I S A试剂盒检测，结果 表明:6 7 1 份血样中，1 5 4 份为抗体阳 性，阳 性率为2 2 . 9 5 % ; 6 4 5 份血样中1 0 0 份为B V D V阳性， 其检出率为1 5 . 5 0 ，从 而 证实B V D在河南省广泛存在. 2 、河南
5、省牛病毒性腹泻病毒地方 株的分离 及鉴定 从河南省不同地区 规模化肉 牛场B V D疑似病例中采集病料， 将处理好的病料接 种M D B K细 胞， 并盲传四 代，分离 得到两 株可产生细 胞病变的病 毒， 经电 镜观察、 理化特性鉴定、 琼脂扩散试验和中 和试验， 确定两 株病毒均为B V D V ， 分别将其命名 为H N - 1 株和H N - 2 株。动物回归试验进一步证实了 所分离的两株病毒均为B V D V , 3 、 分泌杭牛病毒性腹泻病毒单克隆杭体杂交瘤细 胞株的建立与鉴定 在M D B K细 胞上增殖B V D V H N - 1 株， 用蔗糖密 度梯度离 心法纯化病毒， 然
6、后免 疫B A L B / c 小鼠。 应用单克隆抗体技术， 制备脾细胞并与N S 。 骨髓瘤细 胞融 合。 经间 接E L I S A筛 选， 用有限 稀释法亚克隆， 得到4 株能 分泌B V D V单克隆杭体的杂交 瘤 细 胞 株: 3 A 8 . 3 C 7 , 3 C , 1 - 3 F 9 。 经 鉴 定， 3 A g . 3 C 7 . 3 E 9 株分 泌的 单 克 隆 抗 体为I g G l 亚类， 3 C , : 株为I g G 2 a 亚类。 杂交 瘤细 胞的平均染色 体数目 为9 9 条. 3 A 8 . 3 C 7 , 3 C 株分泌的抗体与C S F V , B D
7、V发生交 又 反应， 与B C V , B R V无交又反应，而3 C , 1 株 河南省肉牛规模化养m场病毒性腹i = i 病的诊断与肪制技术研究 分泌的杭体与以上四 种病毒均不发生交叉反应， 显示出 较好的特异性。 这些单克隆 杭 体的获得为B V D的 研究及诊断方法的建立莫定了 基础。 4 、 牛病毒性腹泻病毒单克隆杭体双夹心E L I S A的建立及其应用 用3 C , ; 株， 按常 规方法 制备腹水、 提纯I g G , 与已 制 备的兔抗B V D V I g G 建立了 检测B V D V的单克隆杭体双夹心E L I S A 。 该方法与病 毒分离 试验对比，阳 性符合率 为
8、8 6 .6 7 %,阴 性符合率为1 0 0 %; 与中 和试验对比，阳性符合率为9 3 犯%， 阴性符合 率为1 0 0 % 。 该方法 最 低病 毒检出 量为2 0 0 n g l m l 。 用 该方法与商品 化E L I S A试剂 盒同 时对比 检测牛全血 1 0 0 份， 二者阳胜 检出 符合率为% 1 5 %。初步应用该方法 对河南 省南阳、 周口、 安阳3 市肉牛场的5 6 2 头份牛全血的检测结果表明， 牛群B V D V的感 染率为1 7 .0 8 % 。 该方法具有良 好的特异性、 敏感性及稳定性， 能够较好地用于B V D V 的监测，具有良 好的应用前景。 5 ，
9、牛病毒性腹泻囊素油乳别灭活疫苗的 研制 将B V D V H N - 1 株在M D B K细 胞上 增殖、 浓 缩、 灭 活， 并与 免疫增强 剂一 一囊 素 共同乳化研制出B V D囊素油乳剂苗。 对其物理性状、安全性、 保存期等 进行 检测， 初步应用该疫苗进行免疫试验， 并和常规灭活苗以及弱毒苗进行免疫效果比 较。 试验 结果 表明: 该疫苗合格、 安全， 保存期达 到 1 2个月;产生的杭体水平较高 且维持时 间长，免疫效果和保护率优于常规灭活苗 和弱毒苗。 、肉 牛 规模化养技场病 毒性腹泻防 制 措施的 制定及实 施效果分 析 根据B V D流行病学 特征， 结 合本研究成果，
10、从品种选育、 饲养管理、 饲料营 养、 环境调控、 免疫预防、 兽医 卫生等方面制定了一套B V I ) 防制措施 并在河南的南阳、 周口、 安阳3 市部分肉牛场进行了实 施，实 施效果表明:试验牛场B V D感染 率、 发 病率、 牛场整体病死率均有所下降， 在一定程度上控制了 该病的流行和传播， 提高了 肉 牛的生产性能， 取得了 显著的经济效益和社会效益。 关健词:牛病 毒 性 腹泻; 牛 病 毒 性 腹泻 病 毒; 流 行 病 学 ; 分离 鉴定; 单 克隆 杭 体; 双杭夹心E L I S A ;囊素油乳剂苗;防制措施 英 文 摘 要 R e s e a r c h o n D i
11、a g n o s i s a n d C o n t ro l o f B o v i n e V ir a l D i a r r h e a i n t h e I n t e n s i v e B e e f F a r ms i n He n a n P r o v i n c e Ab s t r a c t B o v in e v i r a l d i a r r h e a ( B V D ) i s o n e o f t h e k e y i n f e c t i o u s d i s e a s e s c a u s e d b y b o v in e v
12、 i r a l d i a r r h e a v ir u s ( B V D 码， w h i c h m a i n l y i n f e c t s c a t t l e , s h e e p , d e e r , s w in e , e t c . I t s c l i n ic a l s y m p t o m s a r e c h a r a c t e r i z c d b y f e v e r , m u c o u s m e m b r a n e e r o s i o n , u l c e r , l e u c o p o e n i a ,
13、 d i a r r h e a , c o u g h , a b o r t i o n o r c o n g e n i t a ll y d e f o r m e d b a b i e s . E v e r y y e a r t h e n u m b e r o f c a t t l e d y i n g o f B V D i s n o l e s s t h a n S m i l l i o n i n t h e w o r l d , a c c o u n t i n g f o r 0 .5 - - 1 % o f t h e t o t a l n u
14、 m b e r o f c a tt l e . Wi t h t h e q u i c k d e v e l o p m e n t o f c a tt l e i n d u s t r y a n d t h e i n t r o d u c t i o n o f f o r e i g n c a tt l e b re e d s , t h e o c c u r r e n c e a n d s p re a d o f B V D a r e a l s o i n c r e a s i n g i n C h i n a . A s e a r ly a s
15、1 9 6 0 s , t h e d i s e a s e w a s f o u n d in a r e a s s u c h a s Y u n n a n , S h a n d o n g , a n d S i c h u a n P ro v in c e in C h i n a . I t a l s o e m e r g e s i n H e n a n P r o v i n c e a t p re s e n t . I n o r d e r t o s e t u p a s p e c i f i c a n d s e n s it i v e d
16、i a g n o s i s as s a y , c o n t ro l i t s s p re a d in g a n d d e c r e a s e t h e l o s s , r e s e a r c h e s h a v e b e e n m a d e o n t h e f o l l o w i n g as p e c t s i n t h e t h e s i s : 1 . R e s e a r c h o n E p i d e m i o l o g y o f B V D i n H e n a n P r o v i n c e 6 7 1 b l o o d s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d r a n d o m l y f r o m c a t t l e f a r m s o f 1 5 c o u n t i e
