常用微生物培养基手册大全

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1、 1 1、营养琼脂(普通琼脂) 成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏汤) 100 毫升 琼脂(视天气,琼脂质量而定) 制法:将上物加热溶解,补足水,调 ph 至 76,过滤分装 121,高压灭菌 15 分钟。 用途:作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板(BA) 制法:取营养琼脂(PH76) ,加热使其溶解待冷至 45-50,以灭菌操作于每 100 毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血 5-10 毫升,轻轻摇匀,立即倾注于平 板或分装试管,制成斜面备用。 用途:1 一般棉拭子均接种此培养基。 2尿液,脓液 3分离细菌标本用。 3、基础培养基 (肉膏汤 BB) 成份:蛋白胨 10 克 牛肉膏 5 克

2、 氯化钠 5 克 水 1000 毫升 制法:将以上各物称好,加水煮沸溶解,用 1NNOH 校正 PH 至 76,过滤分瓶, 2 121高压灭菌,20 分钟备用。 用途:1 作耐药试验,增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基(大管肉汤培养基) 成份:1 新鲜牛肉浸液 1000 毫升 2 PABA(对氨基苯甲酸相当于 10mg/毫升 ) 1g% 1 毫升 3 MgSO4 相当于 0493/100 毫升 493% 1 毫升 4 枸椽酸钠 03g 制法:1 将 1 号,4 号混合液,2 号,3 号液分装高压灭菌。 2 取灭菌 1,4 号混合液用无菌法加入 PABA,MgSO4,再分管,

3、行无菌试验三 天方可使用。 用途:作血,骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基(伊红美兰琼脂) 成份: 蛋白胨 10 克 乳糖 10 克 氯化钠 5 克 琼脂 25(22)克 水 1000 毫升 2%伊红溶液 20 毫升 05%美兰溶液 20 毫升 3 制法:将蛋白胨,氯化钠琼脂称好,加水 1000 毫升使溶解,校正 PH74 过滤, 补足失水,加入 2%伊红溶液 20 毫升,05%美兰溶液 20 毫升, (115高压 20 分钟) ,冷却至 50左右倾注平板,凝固后存冰箱备用。 (高压以后方可再加乳 糖) 用途:用作分离沙门氏,志贺氏菌属,也作菌群调查。 6、罗文斯坦培养基 成份:磷酸二氢钾 24

4、 克 硫酸镁 024 克 枸椽酸钠 06 克 天门冬素 36 克 纯甘油(丙三醇) 12 毫升 水 600 毫升 马铃薯粉 30 克 鸡蛋 1000 毫升(约 3 公斤) 2%孔雀绿水溶液 20 毫升 制法:1 除鸡蛋外(还有孔雀绿) 。可将其它物品称好,放入大三角瓶包扎好, 高压灭菌。 2 鸡蛋用 75%酒精泡 30 分钟,灭菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶 内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好,分装每管约 5 毫升。 4 间歇灭菌第一次 901 小时,第二次 80半小时,第三次 80半小时(或 放 85烤箱内连续二次) 。 4 质控标准: 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要

5、求两星期生长良好。 用途:作结核分枝杆菌培养用。 7、结核半固体培养基 成份:磷酸氢二钠 19 克 硫酸镁 06 克 磷酸二氢钾 25 克 天门冬素 5 克 1%孔雀绿 15 克 甘油 20 毫升 吐温 80(10%) 5 毫升 水 1000 毫升 枸椽酸钠 25 克 动物血清 100 毫升 琼脂 15 克(80 小时用甲醇去脂) 1%孔雀绿 078 毫升 吐温 80(10%) 5 毫升 加动物血清 100 毫升 制法: 1 除血清外将上述药品均称好,放入煮沸溶解,调 PH7。2 2 分管(每管约 10 毫升)包扎好,高压,121半小时灭菌。 3 待冷后无菌法加无菌血清(绵羊血或兔血)每管约

6、1 毫升备用。 4 去除琼脂方法: 取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂 1 毫升用塞密封, 放 37温浴 80 小时,每天摇动一次,冷却后到时取出用滤纸过滤,待琼脂自然 冷却后备用。 5 质控标准:1 无菌实验合格。 2 琼脂硬度合适而清亮。 3 接种标准结核杆菌用,强度合适即可用。 用途:培养结核杆菌用。 8、亚碲酸钾血琼脂平板 成份:琼脂基础 100 毫升 1 0%葡萄糖 2 毫升 1%亚碲酸钾 45 毫升 绵羊血 10 毫升 制法:1 将琼脂基础溶解好,加入羊血。 2 马上加热使成咖啡色后,稍冷再加入 10%葡萄糖 2 毫升与 1%亚碲酸 45 毫 升混合后倒入无菌平板,凝固后存冰箱备

7、用。 质控标准:接种白喉杆菌生长良好,其它革兰氏阴性菌均抑制生长。 用途:供培养及鉴别白喉杆菌用。 9、米培养基 成份:白米 20 克 水 1000 毫升 琼脂 20 克 吐温 80 10 毫升 制法:1 将 20 克米加水 200 毫升煮沸 45 分钟,煮时将容器盖好。 2 用纱布过滤,只要米汤,不要饭,加水至 1000 毫升。 6 3 加琼脂 20 克,吐温-80 10 毫升煮溶,分装中型管(每管约 3 毫升) ,包扎 好,高压,121半小时,消毒备用。 质控标准:1 灭菌。 2 要求清亮。 3 接种白色念珠菌 17-24 小时生长良好,并产生厚膜孢子。 用途:培养白色念珠菌用。 10、蛋

8、白胨水培养基 成份:蛋白胨 1 克 氯化钠 05 克 水加至 100 毫升 PH 调至 78 制法:把以上各物称好溶于水,调节 PH76 分装消毒备用。 质控标准:1 放置 37无菌生长。 2 接种大肠杆菌 24 小时生长良好。 3 可作中国兰平板基础液。 可作靛基质基础液(作此试验需要色氨酸蛋白胨) 。 11、血培养基 成份:蛋白胨 10 克 牛肉膏 5 克 氯化钠 5 克 葡萄糖 3 克 7 枸椽酸钠 3 克 MgSO4。7H2O 20 毫升 05%PABA 10 毫升 酵母浸液 10 毫升 02 克(2%过滤) *酚红 04% 6 毫升 水 1000 毫升 琼脂 05 克 *:作大 BB

9、,小 BB 时,不要加酚红和琼脂。 制法:1、除 PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调 PH74 2、调好 PH 后再加酚红。 3、硫酸镁、PABA 另外无菌再加入(亚细,小 BB) 12、沙氏培养基 成份:蛋白胨 1 克 水 100 毫升 琼脂 15 克(琼脂粉 1 克%) 葡萄糖或麦芽糖 4 克 制法:1 将上述物质称好,放入水中煮沸溶解(不必调 PH 即有 5 左右)分中号 试管(约 4 毫升)包扎,高压 11520 分钟。 2 趁热斜好,凝固备用。 质控标准:1 无菌试验合格。 2 接种霉菌比在其它培养基上生长良好,其它菌生长不好。 用途:作分离培养霉菌用。 8 注意:1 接种临床新鲜

10、标本可先加 1-2 滴 70%酒精让干后再接种于含 125%氯霉 素沙氏斜面培养基上。 2 也可用蜂蜜 8 克代替葡萄糖或麦芽糖。 13、肉渣培养基 成份: 牛肉渣 牛肉浸液(牛肉膏) 制法:将做牛肉浸液的牛肉渣,装入试管,高约 3 毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏 汤(PH76)约 5 毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高约 05 厘米(不加也可) ,121高压灭菌 20-30 分钟后保存于冰箱内备用 。 用途:用于厌氧菌培养。 注意:如无肉渣也可用牛、羊血等代替,将血块先放入水内煮沸,取出成小块, 血块在加热后摇匀成碎颗粒状。 14、单糖发酵管培养基(半固体) 成份: PH76-78

11、 蛋白胨水 1000 毫升(03 克/100 毫升) 1.2%酚红液 04 毫升 琼脂 04 - 05 克 10%糖或醇 10 毫升 制备:把蛋白胨水,琼脂加热溶解,然后加 12%酚红液 04 毫升,10%糖 10 9 毫升,混匀,分装试管,每管约 2-3 毫升,经 115高压灭菌 20 分钟后,分置 于试管架上,贴上各类糖或醇类标签备用。 质控标准:细菌发酵糖类或醇而产生酸,能使培养基 PH 改变,指示剂由红变黄 色,如因发酵产生气体则半固体内产生气泡,如有动力则半固体由清亮变混浊。 15、明胶培养基 成份:肉浸液 1000 毫升(牛肉浸膏 5 克) 明胶 12 克 制法: 100 毫升肉浸

12、液中,加入明胶 12 克,隔水加热煮化,校正 PH72,分装小号 试管,用阿诺氏间歇灭菌 8030 分钟,连续 3 日,或者 108高压 20 分钟,冷 却,贮存备用。 15-1、碱性蛋白胨水 成份: 蛋白胨 20 克 氯化钠 5 克 硝酸钾 01 克 结晶碳酸钠(NaclCO312H2O) 02 克 水 1000 毫升 制法:将蛋白胨,Nacl,硝酸钾,结晶碳酸钠称好,溶于 1000DW 中,校正 PH84 10 分装试管,121高压灭菌 15 分钟后备用 。 用途:用于霍乱弧菌培养。 16、葡萄糖蛋白胨水(M。V 用) 成份:蛋白胨 5 克 葡萄糖 5 克 K2HPO4 5 克 水 100

13、0 毫升 制法:将上述称好溶解分装试管,调 PH74 高压灭菌 115 灭菌 20 分钟 ,或 者葡萄糖加热煮沸后再倒试管 标准:灭菌试验合格。接种大肠杆菌 VP 阴性,M 阳性;接种产气杆菌 VP 阳性, M 阴性。 用途:作鉴别肠道杆菌用。 17、枸椽酸盐培养基 成份:磷酸二氢铵 01 克 硫酸镁 002 克 磷酸氢二钾 01 克 枸椽酸钠 023-05 克(036) 氯化钠 05 克 琼脂 15 克 05%溴麝香草酚兰 2 毫升 (调 PH68 再加) 制法:将上述称好,放入水中煮沸溶解,调 PH68,然后分装中号试管,高压 灭菌,趁热倒呈斜面,凝固 11 后备用。 标准:1、灭菌试验合

14、格,培养基呈果绿色适宜。 2、接种大肠杆菌,培养基上不生长,也不变色。 3、接种产气杆菌,培养基呈深兰色。 用途:作鉴别大肠杆菌用。 18、双糖铁培养基 成份: 下层:蛋白胨 1 克 氯化钠 05 克 葡萄糖 02 克 琼脂 03-05 克 水 100 毫升 将上述物质混匀调 PH76 后加 12%酚红 04 毫升 上层:蛋白胨 1 克 氯化钠 05 克 乳糖 1 克 硫代硫酸钠 003 克 硫酸亚铁 002 克 琼脂 1 克 水 100 毫升 制法: 1 将下层配好,分装中号试管(1 毫升) ,塞好包扎,15 磅高压灭菌半小 时,使凝固后备用。 2 制上层时,先将蛋白胨水制好,加入硫酸亚铁,硫代硫酸钠,加热溶 12 解 PH81,再加入酚红分瓶, (每瓶 300 毫升,称取琼脂包扎灭菌,趁热加入乳 糖隔水煮沸 30 分钟或 112消毒

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