《洛阳地区供血者rhce血型遗传学和基因多态性研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《洛阳地区供血者rhce血型遗传学和基因多态性研究（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、S T U D I E Do NR H C EB L o o DG R o U P H E R E D I T YA N DG E N E T I C P o L Y M o R P H I S Mo FB L o o DD o N o R S I NL U o Y A N GA R E R AD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt o t h eG r a d u a t eS c h o o lo fH e n a nU n i v e r s i t y i nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h e
2、R e q u i r e m e n t s f o rt h eD e g r e eo f M a s t e ro fS c i e n c e B y W a n gZ h i h o n g S u p e r v i s o r ：P r o f L a nJ i o n g c a i P r o f L i uG u a n g c h a o M a y , 2 0 1 2 关于学位论文独立完成和内容创新的声明 本人向河南大学提出硕士学位中请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是 本人在导师的指导下独立完成的对所研究的课题有新的见解。据我所知，除 文中特别加以说明、标注和致谢的
3、地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而 使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示了谢意。，j ! j 一t 。， “， 、I ，i o ，；，7 、， t ，。一l i一 -t 学位中请人( 学位论文作者) 签名：圣奎 圣 - 、：1 f 。一。，“，I ：7 ， t ，? ，：、。、j 。 ， 。，17 ，i 7 ，7 。，| _ ；：1 ：2 0 皿年5 月1 日 一_ 、。j o 。 ，0j 、i ；，： ，：一： ? - _ r ，： j ，7 ，：。，0 i ：，it
4、 ，： 0 ，：，l ： j ：”，1 0 j ， j ： j 1 ；，一 ，j ： p ，关于学位论文著作权使用授权书 ? ，一，。：- ，： | ，：， 一一， 一。，i ，? j、 本人经河南大学审核批准授予硕士学住。作为学位论文的作者本人完全 了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家 图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文( 纸质文 本和电子文本) 以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校 学术发展和进行学术交流等目的可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手 段保存、汇编学位论文( 甄质文本和电子文本) 。 ( 涉及保密内容
5、的学位论文在解密后适用本授权书) 学位荻得者( 学位论文作者) 签名：婴；叁 2 0 工年岁月7 日 学位论文指导教师签名：纽浮剁坦 2 0J 工年岁月伊 摘要 背景：R h 血型作为最复杂和最具有免疫原性的红细胞血型系统，含有国际输血协会 确证的R H l - R H 5 0 共5 0 个抗原，与临床输血反应和新生儿溶血病( H D N ) 特异性相关的 五个抗原分别为D 、C 、E 、C 和e 。同R h D 抗原一样，R h C c 和R h E e 可以刺激机体引起 免疫应答，R h D 抗原免疫引起疾病的成功预防引起大家对R h C E 抗原的关注。目前大多数 R H 基因的研究结论
6、是以欧洲白人为研究对象的，因R H 基因在不同种族和人群中存在多 态性，自种人的结果对其它种族和人群来说，是不可靠的。R H 血型等位基因具有多态性， 目前已检测到弱的或者部分的R H D 等位基因超过1 7 0 种，可以预期R J - I C E 基因具有相似 的多态性，如同弱D 和R h D 之间的抗原免疫，变异的R h C E 抗原也会发生免疫应答。但 是在目前的研究中，还未见对中国献血员免疫原性变异的C ，C ，E ，e 抗原开展分子基 础的系统性深入分析研究。 目的：本研究期望通过观察随机选择的献血员人群R h 表型频率，从表型推测R H C E 基因频率，从而估测出R h 单倍型频
7、率。对R h 基因分型与血清学表型结果不一致情况， 通过分子生物学技术检测主要的R I I C E 变异等位基因，研究变异R h C E 抗原的分子特征， 分析R H C E 基因的遗传学特征和基因多态性，为R h 抗原在临床输血医学、遗传学和免疫 学等方面的应用提供理论依据。 方法：统计2 0 0 5 年1 月至2 0 1 1 年1 2 月3 5 6 0 7 1 例捐献全血的献血员中的R H D 阴性 数据，在2 0 1 0 年到2 0 1 1 年期间采用两套单克隆抗- c 、一c 、一E 和抗一e 试剂，在全自动 血型仪上随机选择1 0 3 7 3 例R H D 阳性献血员进一步检测R h
8、 C E 血清学表型。利用哈德一伯 格遗传平衡定律比较预期值和观察值之间的差异进行基因遗传吻合度检测，用方根法计 算R h 基因频率和单倍型频率，卡方检验检测不同型别之间的差异性。R H C E 基因分型采 用以聚合酶链反应等位基因特异性引物( P C R - S S P ) 试验技术。血清学弱反应( 可 以确定抗原阳性的弱反应和极弱反应) 的C 、C 、E 或e 抗原样本和基因分型与血清学 分型不一致样本检测R H C E 变异等位基因，采用多重P C R - S S P 技术检测基因银行公布的 2 3 个R H C E 等位基因，一些特异的R H C E 等位基因鉴定需要进行D N A 序
9、列分析。 结果：研究得到R h 血型基因和单倍型频率为D 。0 9 3 2 9 、d ：O 0 6 7 1 、D C e ：O 6 1 5 3 、 D c E ：O 2 7 0 4 ，D c e ：O 0 3 4 1 、D C E ：O 0 1 3 2 、d C e ：O 0 1 2 3 、d C E ：O 0 0 0 6 、d c E ：O 0 0 2 4 、d c e ：O 0 5 1 8 R h 血型单倍型频率分布和均衡性与中国汉族人在基因平衡条件下没有显著性差异( P o 0 5 ) ， P d - I C E 基因和单倍型频率在不同R h D 表达类型中的分布有显著性差异( P 0
10、0 5 ) ，O v e r a l lf r e q u e n c i e so fR H C Ea l l e l e sa n d h a p l o t y p eb e l o n g i n gt ot h ed i f f e r e n tv a r i o u sR h D b l o o dg r o u p sa l s ov a r i e ds i g n i f i c a n t l y ( P T ，7 3 3 C G ) 可以 第l 页共5 8 页 洛阳地区供血者R h C E 血型遗传学和基因多态性研究 编码弱的和部分的C 、e 抗原，R t t C e
11、- D ( 4 ) 心杂合与弱的C 、e 抗原有关1 。C e 单倍型 中的氨基酸替换会引起低频抗原R H 5 3 ( J A H K ) 表达且与弱的C 和e 抗原有关，而P r 0 2 2 6 会抑制C 抗原表达口嘲。R t t C E 除编码C c 和E e 外还有C w ( R H 8 ) ，C x ( R H 9 ) ，V S ( R H 2 0 ) 等抗 原，R t t C E 单个氨基酸替换即使跨膜结构域内也可以影响抗原的表达，形成新的亚型， 其次为基因的转换为同源染色体的等同部分，R h C c E e 蛋白第二个胞外环跨膜结构域内 S e r l 2 2 L e u 替换就形
12、成了稀有的J A H K ( R H 5 3 ) 啼1 ，也存在船州E 杂合形成一些稀有 C c E e 变异体，R H D - C E D s 杂合基因可能是减数分裂期染色体上R H D 和R H C E 配对的基因转 换产物，可以编码部分D ，产生异常C 抗原，编码弱C ，弱e ，V S 抗原口1 。 由于R h 血型基因多态性遗传，在不同的人群中，R h 血型基因遗传产生的单倍型、 基因型和表型频率有较大差异，目前对R h 血型遗传多态性的研究，国际上主要分为欧 洲高加索白人，非洲黑人和亚洲人三大人群，在我国则以汉族人为主体北纬3 0 度为界， 采用地域划分为南方汉族人群和北方汉族人群阳
13、1 。R h D 抗原在不同的种族人群中阳性率 都很高，在欧洲与北美白种人为8 2 8 8 ，非洲黑人为9 5 ，亚洲人为9 9 口1 ，在这几个 主要人群分类中血型的遗传学和基因多态性具有很大差异。 1 2 研究R h C E 基因分型和基因多态性的临床意义 R h 血型抗原的免疫原性强度仅次于A B O 血型抗原，其抗原抗体具有重要的临床意 义，可以引起严重的新生儿溶血病( H D N ) 、溶血性输血反应( H T R s ) 和自身免疫性溶血 性贫血( A I H A ) 等血液免疫性疾病，在输血医学和妇产科学中具有重要的临床意义。由 于抗原频率不同，不同抗原在不同人群中引起的输血反应
14、频率是不同的，目前主要临床 上除大家已经广泛重视和关注的D 抗原外，R h C E 抗原在输血治疗和血型免疫中的问题也 引起了人们关注，像R h O 抗原一样，缺乏C 、C 、E 和e 抗原的病人或者孕妇在输血或怀 孕中相应抗原进入体内，就有可能产生相应的血型抗体，比如说一种常见表型D C C e e 型 的病人，输注D c c E E 型的血液，就有可能产生抗一c 或和抗一E 抗体，如果在下一次输血 时，产生抗一c 或和抗一E 抗体因为反应性较弱被漏检，再次输入含有C 或和E 的抗原 的血液，就会产生免疫学反应，发生延迟性溶血性输血反应。 R h 血型系统抗原和抗体结合后，可以引起血管内溶血
15、和血管外溶血，对红细胞的破 坏可以无需补体参与，因此，由R h 抗体引起的H D N ( 新生儿溶血病) 、H T R s ( 溶血性输血 反应) 往往比依赖补体的A B O 溶血严重得多，具有R h 特异性自身抗体的A I H A ( 自身免疫 l 引言 性溶血性贫血) 贫血者会加重溶血。作为R h 血型系统中最具有临床意义和免疫原性最 强的R h D 抗原，许多国家在输血治疗和预防H D N ( 新生儿溶血病) 的发生时，D 抗原的检 测已作为常规检测项目n 们，免疫原性低于R h D 抗原的C 、E 、c 和e ，则未引起临床足够 重视。近几年，对由D 抗原引起的免疫性疾病的成功预防和治
16、疗，引起了对C 、E 、C 和 e 的抗原的注意，据统计由R h E e 和R h C c 抗体引起的免疫性反应分别为1 4 和1 0 7 ， 国内外在有关不规则抗体的统计文献报道中，R h 血型非抗一D 抗体的检出率相当高3 ， 有1 4 - 2 1 R h c 抗原阳性的胎儿( 孕妇R h c 抗原阴性) 会因母体产生的抗一c 抗体，出生 后需要换血治疗，在不规则抗体的筛查中抗一E 、抗一c 的比例分别高达2 8 3 0 、7 7 3 n 羽。 在我国作为免疫原性仅次于D 抗原的C 、E 抗原，其在献血员中的频率为5 0 左右， 输血时造成C 、E 抗原不合的概率远远大于D 抗原，而抗一C 、抗一e 抗体虽然检出率不高， 但是由于C 和e 抗原在我国主要人群中分布频率比较高，且大部分经免疫产生的
