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1、含笑花挥发油化学成分的GC-MS分析李先文,冯亚非(广东海洋大学理学院,广东湛江,524088)摘要含笑花具有祛瘀生新，活血止痛之功效。为了更好地利用含笑资源,扩大其药用部位源,本实验采用挥发油提取器提取和溶剂提取二种不同方法分别提取含笑花挥发油,运用固相微萃取和毛细管气相色谱-质谱联用法结合计算机检索对其挥发油进行了化学成分分析，同时也采用一种鲜花直接固相微萃取的对照测定试验。结果显示,从挥发油提取器提取所得挥发油中鉴定出了31种化合物,从乙醚提取所得挥发油中分别鉴定出了31种化合物, 直接从鲜花室温固相微萃取的组分中鉴定出了14种化合物。面积归一法测定了3种方法所鉴定出成分的相对质量分数,
2、各占总峰面积的97.58%，97.69%和100.00%。3种挥发油化学组成各有异同,前两种方法提取的主要成分为萜类化合物：-榄香烯、-石竹烯、-石竹烯、-榄香烯、大根香叶烯D。第三种方法提取的主要成分为脂类：异丁酸乙酯、乙酸异丁酯、丁酸乙酯、异丁酸异丁酯、己酸乙酯、己酸-2-甲基丙酯。关键词：含笑；挥发油；气相色谱-质谱联用；固相微萃取论文分类：中药和天然药物Analysis of the Essential Oils from the Flower Of Michelia Figo by GasChromatography-Mass SpectrometryLi Xianwen, Feng
3、 Yafei(Science School, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, P.R. China)【Abstract】 ObjectiveThe flower of Michelia figocould eliminate stasis, engender the new, quicken the blood andrelieve pain. In order to enlarge the medication parts, make better use of resources of Michelia figo. Methods
4、The experiment extract volatile oils of the flower of Mich-elia figo in two very interesting ways ,analyzed by techniques of GC-MS-computer. Simultanei- ty,check test Michelia figo in solid-phase microextraction. Results Result ,31compounds were identified from the oil of the Extractor,31compounds w
5、ere identified from the oil of the Aether and 14compounds were identified from the Michelia figo.The identified relative contents of essential oils were 97.58%, 97.69%, and 100.00%, respectively. ConclusionThere were differences among some chemical constituents of threekindsofessentialoils.beta.Cary
6、ophyllen, alpha.Caryophyl- ene, .gamma.Elemene,Germacrene D.The Mechelia figo untransacting main constituents were Ethyl isobutyrate,Isobutyl acetate,Butyricether, Isobutyl isbutyrate,Ethyl caproate,Isobutyl caperoate.【Key words】 Michelia figo; volatile oil; microwave extraction; gas chromatography-
7、mass spectrometry 1.引言李先文，男，1955年生，陕西三原人，博士，教授。主要从事天然药物、海洋药物研究。 含笑是木兰科，含笑属植物，约50余种，分布于亚洲热带、亚热带及温带的中国、印度、斯里兰卡、中南半岛、马来群岛、日本南部。我国约有41种，主产西南部至东部，以西南部较多1，2。，大部供观赏用，其中最常栽培的有白兰（M. alba DC.）、黄兰（M. champaca L. ）和含笑花（M. figo（Lour. ）Spreng. ）（其中括号里是拉丁名）三种。为灌木或乔木，和木兰属Magnolia不同之处为花腋生，雌蕊群有明显的柄，胚珠在每一子房室内通常为两颗以上。本
8、实验所使用的原料是含笑花(M. figo（Lour. ）Spreng.)。采摘于广东海洋大学校园内。含笑花蕾味苦涩，性平，有去淤生新，活血止痛的药用功能。临床上主要用于治月经不调，痛经，胸胁间作痛等。含笑挥发油成分的研究始于1986年3,国内学者陆续对不同品种的含笑成分进行了分析研究，这些研究所采用的均为传统的挥发油提取方法,而使用固相微萃取与色谱-质谱联用分析其化学成分的方法，鲜见报道。60年代初，自Doskotch等4从木兰科(Magnoliaceae)鹅掌楸属北美鹅掌楸(Liriodendron tulipi-fera L.)中分离到吉马烷型倍半萜以来，从木兰科植物中分离到越来越多的倍半
9、萜内酯，其中许多化合物被证明有抗菌、抗癌等生理活性57。在对吉马内酯结构的活性研究中，发现凡-内酯环C11C13上具双键的，对人体鼻咽癌细胞(KB细胞)都有细胞毒活性8。有关学者对深山含笑叶挥发油进行体外抑菌实验和抗肿瘤实验，发现其化学成分对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用；对大肠杆菌、红酵母无明显作用。在浓度为100 ug/mL对肺癌细胞有较强的抑制作用9。说明木兰科植物体的化学成分有一定的生物活性，经过前人的试验表明：这种生物活性物质主要是单萜和倍半萜以及它们的含氧衍生物。萜类化合物无论是从它们在植物界分布的广泛程度、含量、结构多样性，还是从它们对人类生活的作用来看，都是一种重要的植物成分。
10、凡由甲戊二羟酸衍生、且分子式符合(C5H8)n通式的衍生物统称为萜类化合物。萜类化合物的结构多种多样，从最简单的直链碳氢化合物到最复杂的环状结构，按组成分子的异戊二烯结构单元将萜类化合物分为单萜、倍半萜、二萜、二倍半萜、三萜、四萜和多萜，每种萜类化合物又可分为直链、单环、双环、三环、四环和多环，其含氧衍生物还可分为醇、醛、酮、酯、酸、醚等，其中很多化合物具有明显的生物活性10，11。通过对样品的前处理（粉碎，粗提），再使用固相微萃取和气相色谱-质谱联机分析仪测定含笑花挥发油中化学成分的组成和含量。本课题用挥发油提取器和乙醚浸渍法来提取含笑花中化学成分，得到粗提液，通过运用固相微萃取和GM-SM
11、联用对其中的化学成分进行分析鉴定，从而也了解含笑花中更多具体的化学成分, 对木兰科植物的研究也具有重大的意义。2.实验部分2.1试剂和仪器试剂试材：新鲜含笑花采于广东海洋大学校园内试剂：无水硫酸钠分析纯国药集团化学试剂有限公司无水乙醚分析纯国药集团化学试剂有限公司实验用水为二次蒸馏水仪器挥发油提取器AUY102型电子天平日本岛津（SHIMADZU）公司DS-1高速组织捣碎机上海标本模型厂DF101S集热式恒温加热磁力搅拌器巩义市莫峪予华仪器厂RE52-99旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂DZF-6020真空干燥箱上海博讯实验有限公司医疗设备厂GZX9070MBE电热恒温鼓风干燥箱上海博迅实业有限公
12、司医疗设备厂SHZD（）循环水热真空泵巩义市莫峪予华仪器厂GC-MS型气相色谱-质谱联用仪美国Finnigan Voyager 2.2实验步骤2.2.1含笑花中挥发油的提取及保存（1）原料准备：将所采集的新鲜含笑花用清水反复洗干净，自然晾干，粉碎后备用。（2）提取一：称取上述碎料300g，置于挥发油提取器（自制）加水蒸馏6H，收集挥发油无水硫酸钠干燥，称重。取一定体积的挥发油（样品1），在0环境保存备用。（3）提取二：称取上述碎料300g，充分研磨后，加入无水乙醚500ml充分萃取2H，将萃取液置于挥发油蒸发器中在40下蒸发乙醚，收集挥发油用无水硫酸钠干燥，称重。取一定体积挥发油（样品2），在
13、05环境保存备用。表1 含笑花挥发油出油率编号原料量/g挥发油量/g出油率/%样品13000.6000.200样品23000.5300.176（4）提取三：称取上述碎料100g（样品3），使用保鲜膜密封，在05环境保存备用。（5）将2.2.1（3）（4）（5）中3种备用样品各取适量进行固相微萃取处理。样品1萃取温度为80，萃取时间30min；样品2萃取温度为80，萃取时间30min；样品3萃取温度为室温（20），萃取时间1h。表2样品固相微萃取的条件序号样品萃取温度/萃取时间/min1样品180302样品280303样品3室温（20）602.2.2 GC/MS分析测定将2.2.1（5）中3种经
14、固相微处理后的样品进行GC/MS分析测定。GC-MS测试采用美国Finnigan Voyager GC-MS仪器,石英弹性毛细管柱,色谱柱BPX5(250.220.25m),升温程序：柱起始温度60，保持3min,以3/ 升温至170，再以每分钟25升温至250，载气He，流量1mL/min,分流进样，分流比20：1，进样口温度220，接口温度230，质谱条件：电离方式EI，离子源温度200，电离能70eV，倍增电压400V，扫描质量范围35-450amu 。3.结果与讨论3.1 总离子流图按照上述实验测试条件，对含笑花提取液中挥发油化学成分进行分离测定。化合物的相对百分含量按峰面积归一化法计
15、算。成分鉴定根据GC/MS联用所得的质谱信息，应用NIST62. LIB 和NIST12.L IB数据库检索与EPA/NIH质谱标准谱图对照、分析，确认了大部分化学成分（表1）总离子流图如图1 所示。图1 含笑花挥发油样品1 80固相微萃取30min的气质联用总离子流图图2含笑花挥发油样品2 80固相微萃取30min的气质联用总离子流图图3新鲜含笑花室温固相微萃取1小时的气质联用总离子流图3.2 组分与含量分析对图1 图2 以及图3 的总离子图进行分析鉴定，得到挥发油中的组成和含量，如总表2所示。表2含笑花提取液中挥发油的化学成分分析结果序号化合物分子式相对质量分数/%样品1样品2样品31Ethyl isobutyrate(异丁酸乙酯)C6H12O20.050.013.972Isobutyl acetate(乙酸异丁酯)C6H12O23.120.4181.903Butyric ether(丁酸乙酯)C6
